Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 037817

   Библиографические данные
(11)037817    (13) B1
(21)201600471

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: A     


Документ опубликован 2021.05.25
Текущий бюллетень: 2021-05  
Все публикации: 037817  
Реестр евразийского патента: 037817  

(22)2014.12.18
(51) A01H 5/00 (2006.01)
C11B 1/10 (2006.01)
C12N 15/52 (2006.01)
C07H 21/04 (2006.01)
C12N 15/82 (2006.01)
C12N 15/79(2006.01)
(43)A1 2016.10.31 Бюллетень № 10  тит.лист, описание 
(45)B1 2021.05.25 Бюллетень № 05  тит.лист, описание  последовательности 
(31)2013905033; 2014902471
(32)2013.12.18; 2014.06.27
(33)AU; AU
(86)AU2014/050433
(87)2015/089587 2015.06.25
(71)КОММОНВЕЛТ САЙНТИФИК ЭНД ИНДАСТРИЭЛ РИСЕРЧ ОРГАНИЗЭЙШН; НУСИД ПТИ ЛТД; ГРЕЙНЗ РИСЕРЧ ЭНД ДИВЕЛОПМЕНТ КОРПОРЕЙШН (AU)
(72)Петри Джеймс Робертсон, Сингх Суриндер Пал, Шреста Пушкар, Макаллистер Джейсон Тимоти (AU), Дивайн Малколм Дэвид (CA), Де Фейтер Роберт Чарльз (AU)
(73)КОММОНВЕЛТ САЙНТИФИК ЭНД ИНДАСТРИЭЛ РИСЕРЧ ОРГАНИЗЭЙШН; НУСИД ПТИ ЛТД; ГРЕЙНЗ РИСЕРЧ ЭНД ДИВЕЛОПМЕНТ КОРПОРЕЙШН (AU)
(74)Рыбина Н.А., Рыбин В.Н. (RU)
(54)ЭКСТРАГИРОВАННЫЙ РАСТИТЕЛЬНЫЙ ЛИПИД, СОДЕРЖАЩИЙ ДЛИННОЦЕПОЧЕЧНЫЕ ПОЛИНЕНАСЫЩЕННЫЕ ЖИРНЫЕ КИСЛОТЫ
   Формула 
(57) 1. Экстрагированный растительный липид, содержащий жирные кислоты в этерифицированной форме, причем жирные кислоты содержат олеиновую кислоту, пальмитиновую кислоту, w6 жирные кислоты, содержащие линолевую кислоту (ЛК) и g-линоленовую кислоту (ГЛК), w3 жирные кислоты, содержащие a-линоленовую кислоту (АЛК), докозагексаеновую кислоту (ДГК), стеаридоновую кислоту (СДК) и докозапентаеновую кислоту (ДПК), при этом уровень пальмитиновой кислоты в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от около 2 до 16%, и при этом уровень миристиновой кислоты (C14:0) в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет менее чем 1%, причем уровень ДГК в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от 20,1 до 30% или от 20,1 до 35%.
2. Липид по п.1, отличающийся тем, что характеризуется одним или более из следующих признаков:
i) уровень пальмитиновой кислоты в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от около 2 до 15% или от около 3 до около 10;
ii) уровень миристиновой кислоты (C14:0) в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет около 0,1%;
iii) уровень олеиновой кислоты в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от около 1 до около 30%, от около 3 до около 30%, от около 6 до около 30%, от 1 до около 20%, от около 30 до около 60%, от около 45 до около 60%, около 30% или от около 15 до около 30%;
iv) уровень линолевой кислоты (ЛК) в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от около 4 до около 35%, от около 4 до около 20%, от около 4 до около 17% или от около 5 до около 10%;
v) уровень a-линоленовой кислоты (АЛК) в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от около 4 до около 40%, от около 7 до около 40%, от около 10 до около 35%, от около 20 до около 35%, от около 4 до 16% или от около 2 до 16%;
vi) уровень g-линоленовой кислоты (ГЛК) в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет менее 4%, менее чем около 3%, менее чем около 2%, менее чем около 1%, менее чем около 0,5%, от 0,05 до 7%, от 0,05 до 4%, от 0,05 до около 3% или от 0,05 до около 2%;
vii) уровень стеаридоновой кислоты (СДК) в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет менее чем около 10%, менее чем около 8%, менее чем около 7%, менее чем около 6%, менее чем около 4%, менее чем около 3%, от около 0,05 до около 7%, от около 0,05 до около 6%, от около 0,05 до около 4%, от около 0,05 до около 3%, от около 0,05 до около 10% или от 0,05 до около 2%;
viii) уровень эйкозатетраеновой кислоты (ЭТК) в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет менее чем около 6%, менее чем около 5%, менее чем около 4%, менее чем около 1%, менее чем около 0,5%, от около 0,05 до около 6%, от около 0,05 до около 5%, от около 0,05 до около 4%, от около 0,05 до около 3% или от 0,05 до около 2%;
ix) уровень эйкозатриеновой кислоты (ЭТрК) в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет менее чем 4%, менее чем около 2%, менее чем около 1%, от 0,05 до 4%, от 0,05 до 3%, или от 0,05 до около 2%, или от 0,05 до около 1%;
x) уровень эйкозапентаеновой кислоты (ЭПК) в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от 4 до 15%, менее чем 4%, менее чем около 3%, менее чем около 2%, от 0,05 до 10%, от 0,05 до 5%, от 0,05 до около 3% или от 0,05 до около 2%;
xi) если уровень ДГК в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от 20,1 до 30% или от 20,1 до 35%, то уровень докозапентаеновой кислоты (ДПК) в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет менее чем 4%, менее чем около 3%, менее чем около 2%, от 0,05 до 8%, от 0,05 до 5%, от 0,05 до около 3%, от 5 до 15%, от 5 до 10% или от 0,05 до около 2%;
xii) уровень ДГК в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет около 22%, около 24%, около 26%, около 28%, около 31%, от 20,1 до 29%, от 20,1 до 28%, от 20,1 до около 27%, от 20,1 до около 26%, от 20,1 до около 25%, от 20,1 до около 24%, от 21 до 35%, от 21 до 30%, от 21 до 28%, от 21 до около 26% или от 21 до около 24%;
xiii) липид содержит w6-докозапентаеновую кислоту (22:5D4,7,10,13,16) в числе содержащихся в нем жирных кислот;
xiv) липид содержит менее чем 0,1% w6-докозапентаеновой кислоты (22:5D4,7,10,13,16) в числе содержащихся в нем жирных кислот;
xv) липид содержит менее чем 0,1% одной или более или всех из СДК, ЭПК и ЭТК в числе содержащихся в нем жирных кислот;
xvi) уровень общих насыщенных жирных кислот в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от около 4 до около 25%, от около 4 до около 20%, от около 6 до около 20%, от около 6 до около 12%;
xvii) уровень общих мононенасыщенных жирных кислот в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от около 4 до около 40%, около 4 до около 35%, от около 8 до около 25%, от 8 до около 22%, от около 15 до около 40% или от около 15 до около 35%;
xviii) уровень общих полиненасыщенных жирных кислот в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от около 20 до около 75%, от 30 до 75%, от около 50 до около 75%, около 60%, около 65%, около 70%, около 75% или от около 60 до около 75%;
xix) уровень общих w6 жирных кислот в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от около 35 до около 50%, от около 20 до около 35%, от около 6 до 20%, менее чем 20%, менее чем около 16%, менее чем около 10%, от около 1 до около 16%, от около 2 до около 10% или от около 4 до около 10%;
хх) уровень общих w6 жирных кислот, которые не включают ЛК, в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет менее чем около 10%, менее чем около 8%, менее чем около 6%, менее чем 4%, от около 1 до около 20%, от около 1 до около 10%, от 0,5 до около 8% или от 0,5 до 4%;
xxi) уровень общих w3 жирных кислот в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от 36 до около 65%, от 36 до около 70%, от 40 до около 60%, от около 30 до около 60%, от около 35 до около 60%, от 40 до около 65%, от около 30 до около 65%, от 35 до около 65%, около 35%, около 40%, около 45%, около 50%, около 55%, около 60%, около 65% или около 70%;
xxii) уровень общих w3 жирных кислот, которые не включают ЛК, в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от 21 до около 45%, от 21 до около 35%, от около 23 до около 35%, от около 25 до около 35%, от около 27 до около 35%, около 23%, около 25%, около 27%, около 30%, около 35%, около 40% или около 45%;
xxiii) соотношение общих w6 жирных кислот к общему содержанию w3 жирных кислот в содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от около 1,0 до около 3,0, от около 0,1 до около 1, от около 0,1 до около 0,5, менее чем около 0,50, менее чем около 0,40, менее чем около 0,30, менее чем около 0,20, менее чем около 0,15, около 1,0, около 0,1, от около 0,10 до около 0,4 или около 0,2;
xxiv) соотношение общих w6 жирных кислот, которые не включают ЛК, к новым w3 жирным кислотам в содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от около 1,0 до около 3,0, от около 0,02 до около 0,1, от около 0,1 до около 1, от около 0,1 до около 0,5, менее чем около 0,50, менее чем около 0,40, менее чем около 0,30, менее чем около 0,20, менее чем около 0,15, около 0,02, около 0,05, около 0,1, около 0,2 или около 1,0;
xxv) композиция жирных кислот липида базируется на эффективности превращения олеиновой кислоты в ЛК под действием D12-десатуразы на уровне по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 80%, от около 60 до около 98%, от около 70 до около 95% или от около 75 до около 90%;
xxvi) композиция жирных кислот липида базируется на эффективности превращения АЛК в СДК под действием D6-десатуразы на уровне по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 70%, от около 30 до около 70%, от около 35 до около 60% или от около 50 до около 70%;
xxvii) композиция жирных кислот липида базируется на эффективности превращения СДК в кислоту ЭТК под действием D6-элонгазы на уровне по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, от около 60 до около 95%, от около 70 до около 88% или от около 75 до около 85%;
xxviii) композиция жирных кислот липида базируется на эффективности превращения ЭТК в ЭПК под действием D5-десатуразы на уровне по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, от около 60 до около 99%, от около 70 до около 99% или от около 75 до около 98%;
xxix) композиция жирных кислот липида базируется на эффективности превращения ЭПК в ДПК под действием D5-элонгазы на уровне по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90%, от около 50 до около 99%, от около 85 до около 99%, от около 50 до около 95% или от около 85 до около 95%;
ххх) композиция жирных кислот липида базируется на эффективности превращения ДПК в ДГК под действием D4-десатуразы на уровне по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 90%, по меньшей мере около 93%, от около 50 до около 95%, от около 80 до около 95% или от около 85 до около 95%;
xxxi) композиция жирных кислот липида базируется на эффективности превращения олеиновой кислоты в ДГК на уровне по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, около 20%, около 25%, около 30%, от около 10 до около 50%, от около 10 до около 30%, от около 10 до около 25% или от около 20 до около 30%;
xxxii) композиция жирных кислот липида базируется на эффективности превращения ЛК в ДГК на уровне по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 22%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 40%, около 25%, около 30%, около 35%, около 40%, около 45%, около 50%, от около 15 до около 50%, от около 20 до около 40% или от около 20 до около 30%;
xxxiii) композиция жирных кислот липида базируется на эффективности превращения АЛК в ДГК на уровне по меньшей мере около 17%, по меньшей мере около 22%, по меньшей мере около 24%, по меньшей мере около 30%, около 30%, около 30%, около 35%, около 40%, около 45%, около 50%, около 55%, около 60%, от около 22 до около 70%, от около 17 до около 55%, от около 22 до около 40% или от около 24 до около 40%;
xxxiv) общие жирные кислоты в экстрагированном липиде составляют менее чем 1,5% C20:1, менее чем 1% C20:1 или около 1% C20:1;
xxxv) содержание триацилглицерида (ТАГ) в липиде составляет по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 90%, по меньшей мере 95%, от около 70 до около 99% или от около 90 до около 99%;
xxxvi) по меньшей мере 70%, по меньшей мере 72% или по меньшей мере 80% этерифицированной ДГК в форме ТАГ находится в положении sn-1 или sn-2 ТАГ;
xxxvii) наиболее распространенными ДГК-содержащими видами ТАГ в липиде являются ДГК/18:3/18:3 (ТАГ 58:12);
xxxviii) наиболее распространенными ДГК-содержащими видами ТАГ в липиде являются ДГК/18:3/18:3 (ТАГ 58:12);
xxxix) липид содержит три-ДГК ТАГ (ТАГ 66:18).
3. Липид по п.1 или 2, отличающийся тем, что представляет собой масло масличной культуры.
4. Липид по п.3, отличающийся тем, что содержит или представляет собой масло вида рода Brassica, масло Gossypium hirsutum, масло Linum usitatissimum, масло вида Helianthus, масло Carthamus tinctorius, масло Glycine max, масло Zea mays, масло Elaesis guineenis, масло Nicotiana benthamiana, масло Lupinus angustifolius, масло Camelina sativa, масло Crambe abyssinica, масло Miscanthus x giganteus или масло Miscanthus sinensis.
5. Способ получения экстрагированного растительного липида по п.1, который включает экстрагирование липида из части растения, причем часть растения содержит липид, который содержит жирные кислоты в этерифицированной форме, причем жирные кислоты содержат олеиновую кислоту, пальмитиновую кислоту, w6 жирные кислоты, содержащие линолевую кислоту (ЛК) и g-линоленовую кислоту (ГЛК), w3 жирные кислоты, содержащие a-линоленовую кислоту (АЛК), стеаридоновую кислоту (СДК), докозапентаеновую кислоту (ДПК) и докозагексаеновую кислоту (ДГК), причем уровень пальмитиновой кислоты в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от около 2 до 16%, и при этом уровень миристиновой кислоты (C14:0) в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет менее чем 1%, при том что уровень ДГК в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида в части растения составляет от 20,1 до 30% или от 20,1 до 35%, и причем уровень ДГК в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от 20,1 до 30% или от 20,1 до 35%.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что экстрагированный липид характеризуется одним или более признаков по любому из пп.2-4.
7. Способ по п.5 или 6, отличающийся тем, что часть растения представляет собой семя масличной культуры, такой как вид рода Brassica, такой как Brassica napus или Brassica juncea, Gossypium hirsutum, Linum usitatissimum, вида Helianthus, Carthamus tinctorius, Glycine max, Zea mays, Elaesis guineenis, Nicotiana benthamiana, Lupinus angustifolius, Camelina saliva или Crambe abyssinica.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что указанное семя масличной культуры представляет собой семя Brassica napus, B. juncea или C. sativa.
9. Способ по любому из пп.5-8, отличающийся тем, что часть растения содержит экзогенные полинуклеотиды, кодирующие один из следующих наборов ферментов:
i) w3-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D4-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза,
ii) D15-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D4-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза,
iii) D12-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D4-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза,
iv) D12-десатураза, w3-десатураза и/или D15-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D4-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза,
v) w3-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D4-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
vi) D15-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D4-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
vii) D12-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D4-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
viii) D12-десатураза, w3-десатураза и/или D15-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D4-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
ix) w3-десатураза или D15-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза,
x) w3-десатураза или D15-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
xi) D12-десатураза, w3-десатураза или D15-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза, или
xii) D12-десатураза, w3-десатураза или D15-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
причем каждый полинуклеотид функционально связан с одним или более промоторов, способных управлять экспрессией указанных полинуклеотидов в клетке части растения.
10. Способ по п.9, отличающийся тем, что часть растения характеризуется одним или более или всеми из следующих признаков:
i) D12-десатураза превращает олеиновую кислоту в линолевую кислоту в одной или более клеток части растения с эффективностью на уровне по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 80%, от около 60 до около 95%, от около 70 до около 90% или от около 75 до около 85%;
ii) w3-десатураза превращает w6 жирных кислот в w3 жирных кислот в одной или более клеток части растения с эффективностью на уровне по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 85%, от около 65 до около 95%, от около 75 до около 91% или от около 80 до около 91%;
iii) D6-десатураза превращает АЛК в СДК в одной или более клеток части растения с эффективностью на уровне по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 70%, от около 30 до около 70%, от около 35 до около 60% или от около 50 до около 70%;
iv) D6-десатураза превращает линолевую кислоту в g-линоленовую кислоту в одной или более клеток части растения с эффективностью на уровне менее чем около 5%, менее чем около 2,5%, менее чем около 1%, от около 0,1 до около 5%, от около 0,5 до около 2,5% или от около 0,5 до около 1%;
v) D6-элонгаза превращает СДК в ЭТК в одной или более клеток части растения с эффективностью на уровне по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, от около 60 до около 95%, от около 70 до около 80% или от около 75 до около 80%;
vi) D5-десатураза превращает ЭТК в ЭПК в одной или более клеток части растения с эффективностью на уровне по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 90%, от около 60 до около 95%, от около 70 до около 95% или от около 75 до около 95%;
vii) D5-элонгаза превращает ЭПК в ДПК в одной или более клеток части растения с эффективностью на уровне по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90%, от около 50 до около 90% или от около 85 до около 95%;
viii) D4-десатураза превращает ДПК в ДГК в одной или более клеток части растения с эффективностью на уровне по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 90%, по меньшей мере около 93%, от около 50 до около 95%, от около 80 до около 95% или от около 85 до около 95%;
ix) эффективность превращения олеиновой кислоты в ДГК в одной или более клеток части растения составляет по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, около 20%, около 25%, около 30%, от около 10 до около 50%, от около 10 до около 30%, от около 10 до около 25% или от около 20 до около 30%;
x) эффективность превращения ЛК в ДГК в одной или более клеток части растения составляет по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 22%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, около 25%, около 30%, около 35%, от около 15 до около 50%, от около 20 до около 40% или от около 20 до около 30%;
xi) эффективность превращения АЛК в ДГК в одной или более клеток части растения составляет по меньшей мере около 17%, по меньшей мере около 22%, по меньшей мере около 24%, по меньшей мере около 30%, около 30%, около 35%, около 40%, от около 17 до около 55%, от около 22 до около 35% или от около 24 до около 35%;
xii) одна или более клеток части растения содержат по меньшей мере около на 25%, по меньшей мере около на 30%, от около 25 до около 40% или от около 27,5 до около 37,5% больше w3 жирных кислот, чем соответствующие клетки без экзогенных полинуклеотидов;
xiii) D6-десатураза имеет большую активность в отношении a-линоленовой кислоты (АЛК), чем линолевой кислоты (ЛК);
xiv) D6-элонгаза также характеризуется активностью D9-элонгазы;
xv) D12-десатураза также характеризуется активностью D15-десатуразы;
xvi) D6-десатураза также характеризуется активностью D8-десатуразы;
xvii) D8-десатураза также характеризуется активностью D6-десатуразы или не характеризуется активностью D6-десатуразы;
xviii) D15-десатураза также характеризуется активностью w3-десатуразы в отношении ГЛК;
xix) w3-десатураза также характеризуется активностью D15-десатуразы в отношении ЛК;
хх) w3-десатураза осуществляет десатурацию ЛК и/или ГЛК;
xxi) w3-десатураза имеет большую активность в отношении ГЛК, чем в отношении ЛК;
xxii) одна или более или все десатуразы характеризуются более высокой активностью на субстрате ацил-КоА, чем на соответствующем субстрате ацил-ФХ (ацил-фосфатидилхолин);
xxiii) D6-десатураза характеризуется более высокой активностью D6-десатуразы в отношении АЛК, чем в отношении ЛК как жирнокислотного субстрата;
xxiv) D6-десатураза характеризуется более высокой активностью D6-десатуразы в отношении АЛК-КоА как жирнокислотного субстрата, чем в отношении АЛК, присоединенной к положению sn-2 ФХ, как жирнокислотного субстрата;
xxv) D6-десатураза характеризуется по меньшей мере в 2 раза более высокой D6-десатуразной активностью, по меньшей мере в 3 раза более высокой активностью, по меньшей мере в 4 раза более высокой активностью или по меньшей мере в 5 раз более высокой активностью в отношении АЛК как субстрата по сравнению с ЛК;
xxvi) D6-десатураза характеризуется более высокой активностью в отношении АЛК-КоА как жирнокислотного субстрата, чем в отношении АЛК, присоединенной к положению sn-2 ФХ, как жирнокислотного субстрата;
xxvii) D6-десатураза характеризуется по меньшей мере в 5 раз более высокой D6-десатуразной активностью или по меньшей мере в 10 раз более высокой десатуразной активностью в отношении АЛК-КоА как жирнокислотного субстрата, чем в отношении АЛК, присоединенной к положению sn-2 ФХ, как жирнокислотного субстрата; и
xxviii) десатураза представляет собой фронт-энд десатуразу.
11. Способ по п.9 или 10, отличающийся тем, что часть растения дополнительно содержит экзогенный полинуклеотид, кодирующий диацилглицерид ацилтрансферазу (ДГАТ), моноацилглицерид ацилтрансферазу (МГАТ), глицерид-3-фосфатацилтрансферазу (ГФАТ), 1-ацил-глицерид-3-фосфатацил­трансферазу (ЛФКАТ), ацил-КоА:лизофосфатидилхолин ацилтрансферазу (ЛФХАТ), фосфолипазу A2 (РЛК2), фосфолипазу C (PLC), фосфолипазу D (PLD), СДФ-холин диацилглицеридхолин фосфотрансферазу (ХФТ), фосфатидилхолин диацилглицерид ацилтрансферазу (ФДАГ), фосфатидилхолин:диацилглицерид холин фосфотрансферазу (ФДХТ), ацил-КоА синтазу (АКС) или комбинацию двух или более из указанных ферментов.
12. Способ по п.11, отличающийся тем, что ЛФКАТ может использовать полиненасыщенный жирный C22 ацил КоА субстрат, такой как ДГК-КоА.
13. Способ по любому из пп.9-12, отличающийся тем, что экзогенные полинуклеотиды ковалентно соединены в молекулу T-ДНК, интегрированную в геном клеток части растения.
14. Способ по п.13, отличающийся тем, что количество молекул T-ДНК, интегрированных в геном клеток части растения, составляет одну, две или три.
15. Способ по любому из пп.5-14, отличающийся тем, что общее содержание масла в части растения, содержащей экзогенные полинуклеотиды, составляет по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 70%, от около 50 до около 80% или от около 80 до около 100% от общего содержания масла в соответствующей части растения, в которой отсутствуют экзогенные полинуклеотиды.
16. Способ по любому из пп.5-15, отличающийся тем, что дополнительно включает обработку липида для повышения уровня ДГК в процентном выражении от общего содержания жирных кислот, причем обработка включает одно или более из фракционирования, перегонки или переэтерификации, такой как получение метиловых или этиловых эфиров ДГК.
17. Растение масличной культуры или его часть, содержащее:
а) липид в семени по п.1, причем липид содержит жирные кислоты в этерифицированной форме; и
б) экзогенные полинуклеотиды, кодирующие один из следующих наборов ферментов:
i) D12-десатураза, w3-десатураза и/или D15-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D4-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза, или
ii) D12-десатураза, w3-десатураза и/или D15-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D4-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
при том, что каждый полинуклеотид функционально связан с одним или более специфичных для семени промоторов, способных управлять экспрессией указанных полинуклеотидов в развивающемся семени растения, и при этом жирные кислоты содержат олеиновую кислоту, пальмитиновую кислоту, w6 жирные кислоты, содержащие линолевую кислоту (ЛК) и g-линоленовую кислоту (ГЛК), w3 жирные кислоты, содержащие a-линоленовую кислоту (АЛК), стеаридоновую кислоту (СДК), докозапентаеновую кислоту (ДПК) и докозагексаеновую кислоту (ДГК), причем уровень ДГК в общем содержании жирных кислот липида семени составляет от 20,1 до 30% или от 20,1 до 35% и уровень пальмитиновой кислоты в общем содержании жирных кислот липида составляет от около 2 до 16%, и при этом уровень миристиновой кислоты (C14:0) в общем содержании жирных кислот липида, в случае если она присутствует, составляет менее чем 1%.
18. Растение масличной культуры по п.17, которое представляет собой Brassica napus, B. juncea или Camelina sativa, которое способно к образованию семени, содержащему ДГК, причем собранное в процессе сбора урожая зрелое семя растения содержит ДГК в количестве по меньшей мере около 28 мг на 1 г семени, по меньшей мере около 32 мг на 1 г семени, по меньшей мере около 36 мг на 1 г семени, по меньшей мере около 40 мг на 1 г семени, по меньшей мере около 44 мг на 1 г семени, по меньшей мере около 48 мг на 1 г семени, около 80 мг на 1 г семени или от около 30 до около 80 мг на 1 г семени.
19. Клетка растения по п.17 или 18, содержащая экзогенные полинуклеотиды.
20. Часть растения, которая получена из растения по п.17 или 18 и которая содержит липид по любому из пп.1-4.
21. Семя, которое является частью растения по п.20.
22. Семя по п.21, отличающееся тем, что представляет собой зрелое, собранное семя Brassica napus, B. juncea или Camelina sativa, содержащее ДГК, с содержанием влаги от около 4 до около 15 мас.%, от около 6 до около 8 мас.% или от около 4 до около 8 мас.%, причем содержание ДГК в семени растения составляет по меньшей мере около 28 мг на 1 г семени, по меньшей мере около 32 мг на 1 г семени, по меньшей мере около 36 мг на 1 г семени, по меньшей мере около 40 мг на 1 г семени, по меньшей мере около 44 мг на 1 г семени, по меньшей мере около 48 мг на 1 г семени, около 80 мг на 1 г семени или от около 30 до около 80 мг на 1 г семени.
23. Способ получения растения, которое может применяться для получения экстрагированного растительного липида по любому из пп.1-4, который включает:
а) количественное определение уровня ДГК в липиде, выработанном одной или более частей растения от множества растений, причем каждое растение содержит один или более экзогенных полинуклеотидов, кодирующих один из следующих наборов ферментов:
i) w3-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D4-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза,
ii) D15-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D4-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза,
iii) D12-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D4-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза,
iv) D12-десатураза, w3-десатураза или D15-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D4-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза,
v) w3-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D4-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
vi) D15-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D4-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
vii) D12-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D4-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
viii) D12-десатураза, w3-десатураза или D15-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D4-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
ix) w3-десатураза или D15-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза,
x) w3-десатураза или D15-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
xi) D12-десатураза, w3-десатураза или D15-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза, или
xii) D12-десатураза, w3-десатураза или D15-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
причем каждый полинуклеотид функционально связан с одним или более промоторами, способными управлять экспрессией указанных полинуклеотидов в клетке части растения; и
б) идентификацию растения из множества растений, полученных из семян масличной культуры по пп.17 или 18, которые могут применяться для получения экстрагированного растительного липида по любому из пп.1-4 в одной или более его частей.
24. Способ по п.23, дополнительно включающий получение потомства растений от идентифицированного растения или их семени.
25. Способ получения семян, содержащих липид по пп.1-4, включающий:
а) выращивание растения по п.17 или 18 или растения, которое образует часть растения по п.20 или которое образует семя по п.21 или 22, в поле как часть популяции размером по меньшей мере 1000, или 2000, или 3000 таких растений или на площади размером по меньшей мере 1, или 2, или 3 га, культивируемых со стандартной плотностью насаждения; и
б) сбор урожая семян растения или растений.
26. Способ по п.23, отличающийся тем, что липид экстрагируют из семени для получения масла с общим выходом ДГК по меньшей мере 60, или 70, или 80 кг ДГК на 1 га.
27. Растение или часть растения, в том числе клетка или семя растения по любому из пп.17-22, отличающиеся тем, что характеризуются одним или более из следующих признаков:
i) содержат масло по любому из пп.2-4;
ii) часть растения или семя пригодны для применения в способе по любому из пп.5-16.
28. Жмых, полученный из семени по п.21 или 22 или полученный из растения по п.17 или 18.
29. Композиция, содержащая одно или более из липида или масла по пп.1-4, носитель, подходящий для фармацевтического, пищевого или сельскохозяйственного применения, соединение для обработки семени, удобрение, другой пищевой продукт или питательный ингредиент или дополнительный белок или витамины для использования в пищевой промышленности или сельском хозяйстве.
30. Корма, содержащие одно или более из липида или масла по п.29, семени по п.21 или 22 или жмыха по п.28.
31. Способ получения корма, включающий смешивание одного или более из липида или масла по любому из пп.1-4, клетки по п.19, растения масличной культуры по п.17 или 18, растительной клетки по п.19, части растения по п.27, семени по п.21 или 22, жмыха по п.28 или композиции по п.29, по меньшей мере с еще одним питательным ингредиентом.
32. Применение одного или более из липида или масла по любому из пп.1-4 для производства лекарственного средства для лечения или предупреждения состояния, при котором ПНЖК оказывают благоприятное воздействие, включая, без ограничения, повышенные уровни триглицеридов в сыворотке, повышенные уровни холестерина в сыворотке, например повышенные уровни ЛПНП холестерина, сердечную аритмию, ангиопластику, воспаление, астму, псориаз, остеопороз, камни в почках, СПИД, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, болезнь Крона, шизофрению, рак, плодный алкогольный синдром, синдром гиперактивности и дефицита внимания, муковисцидоз, фенилкетонурию, униполярную депрессию, агрессивную враждебность, адренолейкодистрофию, заболевание коронарных сосудов сердца, гипертензию, диабет, ожирение, болезнь Альцгеймера, хроническое обструктивное заболевание легких, язвенный колит, рестеноз после ангиопластики, экзему, гипертонию, агрегацию тромбоцитов, желудочно-кишечное кровотечение, эндометриоз, предменструальный синдром, миалгический энцефаломиелит, хроническую усталость после вирусных инфекций или заболевание глаз.