Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 037815

   Библиографические данные
(11)037815    (13) B1
(21)201990052

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: A     


Документ опубликован 2021.05.25
Текущий бюллетень: 2021-05  
Все публикации: 037815  
Реестр евразийского патента: 037815  

(22)2017.06.19
(51) A61K 38/00 (2006.01)
A61K 38/36 (2006.01)
A61K 38/48 (2006.01)
C07K 14/745(2006.01)
(43)A1 2019.05.31 Бюллетень № 05  тит.лист, описание 
(45)B1 2021.05.25 Бюллетень № 05  тит.лист, описание  последовательности 
(31)62/351,841
(32)2016.06.17
(33)US
(86)US2017/038169
(87)2017/219034 2017.12.21
(71)ПОРТОЛА ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК. (US)
(72)Карбарз Марк, Конли Памела Б., Лу Гэньминь (US)
(73)ПОРТОЛА ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК. (US)
(74)Медведев В.Н. (RU)
(54)ПОЛУЧЕНИЕ ПРОИЗВОДНЫХ ФАКТОРА Xa
   Формула 
(57) 1. Способ очистки полипептидного продукта, экспрессируемого из полинуклеотидной конструкции, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 7 или последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью, кодируемой SEQ ID NO: 7, включающий
добавление детергента к образцу, который содержит полинуклеотидную конструкцию и полипептидный продукт, экспрессированный из полинуклеотидной конструкции;
загрузку образца в хроматограф для аффинной хроматографии на основе ингибитора трипсина сои (STI) и элюирование полипептида первым элюирующим буфером для получения первого элюированного образца, причем загруженный образец не содержит органического растворителя;
загрузку первого элюированного образца на хроматограф с ионным обменом и смешанным режимом и элюирование полипептида вторым элюирующим буфером, содержащим по меньшей мере 1М неорганической соли, для получения второго элюированного образца; и
загрузку второго элюированного образца на хроматограф с гидрофобным взаимодействием и элюирование полипептида третьим элюирующим буфером, содержащим по меньшей мере 2 мМ хлорида натрия,
с получением, тем самым, очищенного образца, содержащего полипептидный продукт.
2. Способ по п.1, в котором детергент содержит тритон Х-100 (п-(1,1,3,3-тетраметилбутил)фениловый эфир полиэтиленгликоля).
3. Способ по п.1 или 2, в котором первый элюирующий буфер содержит от 0,5 до 2М аргинина.
4. Способ по п.3, в котором первый элюирующий буфер обладает рН от около 5 до 5,4.
5. Способ по любому из пп.1-4, в котором хроматограф с ионным обменом и смешанным режимом включает хроматограф с керамическим гидроксиапатитом типа I.
6. Способ по любому из пп.1-5, в котором второй элюирующий буфер содержит по меньшей мере 2М неорганической соли.
7. Способ по п.6, в котором неорганическая соль представляет собой хлорид натрия.
8. Способ по любому из пп.1-7, в котором хроматограф с гидрофобным взаимодействием включает хроматограф с октилсефарозой.
9. Способ по п.1, дополнительно включающий стадию очистки с помощью анионообменного хроматографа.
10. Способ по п.9, в котором анионообменный хроматограф содержит ионообменную мембрану SartobindÔ.
11. Способ по любому из пп.1-10, дополнительно включающий фильтрацию одного или более образцов с помощью фильтра из нанофлиса.
12. Способ по п.11, в котором фильтрацию с помощью фильтра из нанофлиса проводят перед загрузкой образца на хроматограф для аффинной хроматографии на основе STI.
13. Способ по любому из пп.1-12, в котором очищенный образец содержит менее чем приблизительно 1% загрязняющих белков, неэкспрессированных полинуклеотидной конструкцией.
14. Способ по любому из пп.1-13, в котором полипептидный продукт экспрессируется в клетке, которая содержит полинуклеотидную конструкцию.
15. Способ по п.14, в котором клетку выращивают в среде в условиях с получением по меньшей мере 100 мг полипептидного продукта на 1 л среды.
16. Способ по п.15, в котором клетку выращивают в среде в условиях, подходящих для получения по меньшей мере 200 мг полипептидного продукта на 1 л среды.
17. Способ по п.15 или 16, в котором очищенный образец содержит более чем приблизительно 50% полипептидного продукта, продуцированного в среде.
18. Способ по п.15 или 16, в котором очищенный образец содержит более чем приблизительно 100 мг полипептидного продукта на каждый литр полученной среды.
19. Способ по любому из пп.1-18, в котором полипептидный продукт представляет собой двухцепочечный полипептид, содержащий легкую цепь и тяжелую цепь.
20. Способ по п.19, в котором приблизительно от 20 до 50% полипептидного продукта в очищенном образце содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 5.
21. Способ по п.20, в котором приблизительно 5-95% тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 5, содержит два О-связанных гликозилирования и приблизительно 5-95% тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 5, содержит одно О-связанное гликозилирование.
22. Способ по любому из пп.19-21, в котором приблизительно 40-80% полипептидного продукта в очищенном образце содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8.
23. Способ по п.22, в котором по меньшей мере приблизительно 90% тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8, содержит одно О-связанное гликозилирование.
24. Способ по любому из пп.19-23, в котором приблизительно 2-12% полипептидного продукта в очищенном образце содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9.
25. Способ по любому из пп.19-24, в котором приблизительно 0,1-1,5% полипептидного продукта в очищенном образце содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10.
26. Способ по любому из пп.19-25, в котором приблизительно 2-8% полипептидного продукта в очищенном образце содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 11.
27. Способ по любому из пп.19-26, в котором приблизительно 35-60% полипептидного продукта в очищенном образце содержит легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4.
28. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и полипептидную часть из двухцепочечных полипептидов, в которой
приблизительно 35-60% двухцепочечных полипептидов содержат легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4;
приблизительно 20-60% двухцепочечных полипептидов содержат тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 5;
приблизительно 40-60% двухцепочечных полипептидов содержат тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8; и
менее чем 10% двухцепочечных полипептидов содержат тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9.
29. Фармацевтическая композиция по п.28, в которой менее чем 5% двухцепочечных полипептидов содержат тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9.
30. Фармацевтическая композиция по п.28, в которой менее чем 3% двухцепочечных полипептидов содержат тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9.
31. Фармацевтическая композиция по любому из пп.28-30, в которой приблизительно 0,1-1,5% двухцепочечных полипептидов содержат тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10.
32. Фармацевтическая композиция по любому из пп.28-31, в которой приблизительно 2-8% двухцепочечных полипептидов содержат тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 11.
33. Фармацевтическая композиция по любому из пп.28-32, в которой приблизительно 30-70% тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 5, содержит два O-связанных гликозилирования.
34. Фармацевтическая композиция по любому из пп.28-33, в которой приблизительно 30-70% тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 5, содержит одно O-связанное гликозилирование.
35. Фармацевтическая композиция по любому из пп.28-34, в которой по меньшей мере приблизительно 90% тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8, содержит одно О-связанное гликозилирование.
36. Фармацевтическая композиция по любому из пп.28-35, в которой препарат лиофилизирован.
37. Фармацевтическая композиция по любому из пп.28-36, дополнительно содержащая L-аргинина HCl или L-аргинина ацетат.
38. Фармацевтическая композиция по любому из пп.28-37, дополнительно содержащая сахарозу.
39. Фармацевтическая композиция по любому из пп.28-38, дополнительно содержащая маннит.
40. Способ нейтрализации или ингибирования состояния антикоагуляции у пациента, подвергающегося антикоагуляционному лечению ингибитором фактора Ха, включающий введение пациенту фармацевтической композиции по любому из пп.28-39.
Zoom in