Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 037776

   Библиографические данные
(11)037776    (13) B1
(21)201891967

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: C     


Документ опубликован 2021.05.20
Текущий бюллетень: 2021-05  
Все публикации: 037776  
Реестр евразийского патента: 037776  

(22)2014.08.27
(51) C12N 9/14 (2006.01)
A23K 1/165(2006.01)
(43)A1 2019.02.28 Бюллетень № 02  тит.лист, описание 
(45)B1 2021.05.20 Бюллетень № 05  тит.лист, описание  последовательности 
(31)A 667/2013
(32)2013.08.28
(33)AT
(62)201690471; 2014.08.27
(71)ЭРБЕР АКЦИЕНГЕЗЕЛЛЬШАФТ (AT)
(72)Фрухауф Себастьян, Тамхесль Михаэла, Пфеффер Мартин, Молль Дитер, Шатцмаир Герд, Биндер Ева Мария (AT)
(73)ЭРБЕР АКЦИЕНГЕЗЕЛЛЬШАФТ (AT)
(74)Медведев В.Н. (RU)
(54)ПОЛИПЕПТИД ДЛЯ ГИДРОЛИТИЧЕСКОГО РАСЩЕПЛЕНИЯ ЗЕАРАЛЕНОНА И/ИЛИ ПРОИЗВОДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ЗЕАРАЛЕНОНА, ПОЛИНУКЛЕОТИД, ВЫДЕЛЕННЫЙ ИЗ НЕГО, А ТАКЖЕ СОДЕРЖАЩАЯ ПОЛИПЕПТИД ДОБАВКА, ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ, А ТАКЖЕ СПОСОБ
   Формула 
(57) 1. Добавка, которая гидролитически расщепляет зераленон и/или по меньшей мере одно производное зеараленона для получения продуктов питания для свиней, птицы или аквакультуры для добавления к пищевым продуктам или к высушенной барде, где добавка содержит по меньшей мере один полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы SEQ ID NO: 2-15, или ее функциональный вариант, где идентичность последовательности между функциональным вариантом и по меньшей мере одной из аминокислотных последовательностей составляет по меньшей мере 70%, а также присутствуют вспомогательные вещества.
2. Добавка по п.1, где вспомогательные вещества выбраны из по меньшей мере одного инертного носителя, а также необязательных дополнительных ингредиентов, таких как витамины, и/или минералы, и/или ферменты, и/или другие компоненты для детоксификации микотоксинов.
3. Добавка по п.1 или 2, где по меньшей мере один полипептид по любому из пп.1 или 2 присутствует в добавке в концентрации не более 10000 ед./г, предпочтительно не более 1000 ед./г, более предпочтительно не более 100 ед./г и наиболее предпочтительно не более 10 ед./г.
4. Добавка по любому из пп.1, 2 или 3, где добавка присутствует в капсулированной или покрытой форме.
5. Применение добавки по любому из пп.1-4 для гидролитического расщепления зеараленона и/или по меньшей мере одного производного зеараленона в кормах, предпочтительно для свиней, птицы или аквакультуры, или в пищевых продуктах, или в высушенной барде.
6. Способ гидролитического расщепления зеараленона и/или по меньшей мере одного производного зеараленона, отличающийся тем, что зеараленон и/или по меньшей мере одно производное зеараленона гидролизуется по меньшей мере одним полипептидом, имеющим аминокислотную последовательность, выбранную из группы SEQ ID NO: 2-15 или их функционального варианта, где идентичность последовательности между функциональным вариантом и аминокислотной последовательностью составляет по меньшей мере 70%.
7. Способ по п.6, отличающийся тем, что по меньшей мере один полипептид применяют в добавке по любому из пп.1-4.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что по меньшей мере один полипептид или добавку смешивают с пищевым продуктом или кормом для животного, загрязненным зеараленоном и/или по меньшей мере одним производным зеараленона; загрязненный пищевой продукт или корм для животного приводят в контакт с влагой, а полипептид или добавка гидролизует зеараленон и/или по меньшей мере одно производное соединение зеараленона, содержащееся в загрязненном пищевом продукте или корме для животного.
9. Способ по любому из пп.6-8, отличающийся тем, что по меньшей мере 70%, предпочтительно по меньшей мере 80%, в частности по меньшей мере 90% зеараленона и/или по меньшей мере одного производного зеараленона гидролизуется.
10. Применение полипептида для гидролитического расщепления зеараленона и/или по меньшей мере одного производного соединения зеараленона, отличающееся тем, что полипептид представляет собой гидролазу с аминокислотной последовательностью, выбранную из группы SEQ ID NO: 2-15, или ее функциональный вариант, причем идентичность последовательности между функциональным вариантом и по меньшей мере одной аминокислотной последовательностью составляет по меньшей мере 70%.
11. Применение по п.10, отличающееся тем, что полипептид содержит по меньшей мере один консервативный участок аминокислотной последовательности или его функциональный вариант, причем функциональный вариант участка аминокислотной последовательности имеет идентичность последовательности по меньшей мере 70%, предпочтительно по меньшей мере 84%, более предпочтительно по меньшей мере 92% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 98% и по меньшей мере один консервативный участок аминокислотной последовательности выбран из группы аминокислотных последовательностей от +24 до +50, от +52 до +77, от +79 до +87, от +89 до +145, от +150 до +171, от +177 до +193, от +223 до +228, от +230 до +237, от +239 до +247, от +249 до +255, от +257 до +261, от +263 до +270, от +272 до +279, от +297 до +301, от +303 до +313, от +24 до 328, от +1 до +328 последовательности с SEQ ID NO: 1.
12. Применение по п.10 или 11, отличающееся тем, что функциональный вариант имеет по меньшей мере одну модификацию аминокислот, выбранную из группы замен, делеций и инсерций соответственно одной или нескольких аминокислот.
13. Применение по любому из пп.10, 11 или 12, отличающееся тем, что полипептид имеет удельную активность, равную по меньшей мере 0,01 ед./мг, преимущественно по меньшей мере 0,1 ед./мг и предпочтительно по меньшей мере 1 ед./мг, и/или имеет константу KM гидролитического расщепления зеараленона, равную не более 50 мкМ, преимущественно не более 3,5 мкМ и предпочтительно не более 0,5 мкМ, и/или имеет константу kcat гидролитического расщепления зеараленона, равную по меньшей мере 0,05 с-1, преимущественно по меньшей мере 0,6 с-1 и предпочтительно по меньшей мере 5 с-1, и/или имеет константу vmax гидролитического расщепления зеараленона, равную по меньшей мере 0,00001 мкМ-1×с-1, преимущественно по меньшей мере 0,0001 мкМ-1×с-1 и предпочтительно по меньшей мере 0,001 мкМ-1×с-1.
14. Применение по любому из пп.10-13, отличающееся тем, что полипептид может содержать аминокислотную последовательность, выбранную из группы последовательностей SEQ ID NO: 2, 5, 6, 7, 9, 11 и 15, или ее функциональный вариант, причем функциональный вариант имеет по меньшей мере 70% идентичности последовательности по меньшей мере с одной из аминокислотных последовательностей, и стабильность рН полипептида при рН 5,0 составляет по меньшей мере 15%, предпочтительно 50% и, в частности, предпочтительно 90%.
15. Применение по любому из пп.10-13, отличающееся тем, что полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы последовательностей SEQ ID NO: 2, 5, 6, 7, 9, 11 и 15, или ее функциональный вариант, причем функциональный вариант имеет по меньшей мере 70% идентичности последовательности по сравнению по меньшей мере с одной из аминокислотных последовательностей, и полипептид обладает наиболее высокой ферментативной активностью в температурном интервале от 30 до 75°C, предпочтительно от 38 до 55°C и особенно предпочтительно от 38 до 52°C.
16. Применение по любому из пп.10-13, отличающееся тем, что полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы последовательностей SEQ ID NO: 2, 5, 6, 9, 11 и 15, или ее функционального варианта, причем функциональный вариант имеет по меньшей мере 70% идентичности последовательности по сравнению по меньшей мере с одной из аминокислотных последовательностей, и полипептид является термически стабильным до температуры 90°C, предпочтительно 75°C и особенно предпочтительно 60°C.
17. Применение по любому из пп.10-16, отличающееся тем, что полипептид имеет по меньшей мере одну мутацию аминокислотной последовательности относительно SEQ ID NO: 1 по меньшей мере в одной из следующих позиций, выбранных из группы: 22, 23, 25, 26, 27, 29, 31, 32, 35, 37, 42, 43, 46, 51, 53, 54, 57, 60, 69, 72, 73, 78, 80, 84, 88, 95, 97, 99, 114, 118, 119, 123, 132, 141, 146, 148, 149, 154, 163, 164, 165, 169, 170, 172, 176, 180, 182, 183, 190, 191, 194, 196, 197, 198, 201, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 212, 213, 214, 216, 217, 220, 221, 222, 229, 231, 233, 238, 240, 244, 245, 246, 248, 249, 251, 254, 256, 260, 262, 263, 266, 269, 271, 277, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 292, 296, 298, 302, 307, 308, 309, 311, 314, 317, 319, 321, 323, 325 и 326.
18. Применение по п.17, отличающееся тем, что полипептид имеет по меньшей мере одну мутацию аминокислотной последовательности относительно SEQ ID NO: 1, выбранную из группы: D22A, S23Q, S23L, N25D, I26V, F27Y, F27H, S29P, R31A, F32Y, R35K, R35Q, V37A, V42I, V43T, F46Y, S51E, S51D, D53G, N54M, N54R, L57V, L60I, S69G, Р72Е, V73A, A78S, N80H, F84Y, I88L, T95S, Т97А, R99K, I114M, I118V, K119R, V123I, L132V, A141S, I146V, I146L, A148G, A149V, А154Р, Р163Т, А164Т, Y165C, Y165H, V169I, L170R, A172G, А176М, A176V, Y180F, D182T, F183Y, I190V, G191S, K194Т, K194Е, F196Y, V197C, V197R, E198R, E198S, K201D, K201G, P204S, Р204А, A205S, K206Р, А207М, М208А, Q209R, L210A, L210S, DР212, T213V, Р214А, Е216Т, E216G, A217I, N220H, L221M, K222R, K222Q, G229A, A231V, F233W, F233Y, F233H, A238G, H240N, H240S, D244E, R245Q, M246L, S248T, S248N, S248G, Q249R, K251N, I254V, I256L, А260М, T262D, T262G, I263T, E266D, Е269Н, E269N, L271V, L277E, Е280А, E280L, H281R, H281Q, A282V, Q283R, D284L, D284R, I285L, I286M, R287E, R287D, R292K, R292T, Q296A, Q296E, H298V, L302S, L307Q, F308S, D309A, А311Р, A314V, L317F, S319Q, S319P, S319R, S321A, S321T, Т323А, Р325А, А326Р.
19. Применение по любому из пп.10-17, отличающееся тем, что полипептид содержит по меньшей мере один из следующих аминокислотных мотивов, выбранных из группы последовательностей SEQ ID NO: 32-69.
20. Применение по п.18, отличающееся тем, что полипептид содержит по меньшей мере одну консервативную замену аминокислоты по меньшей мере в одной позиции, а консервативная замена аминокислоты выбрана из замен G на А, или А на G, S, или V на I, L, A, T, S, или I на V, L, М, или L на I, М, V, или М на L, I, V, или Р на A, S, N, или F на Y, W, Н, или Y на F, W, Н, или W на Y, F, Н, или R на K, Е, D, или K на R, E, D, или Н на Q, N, S, или D на N, Е, K, R, Q, или Е на Q, D, K, R, N, или S на Т, А, или Т на S, V, А, или С на S, Т, А, или N на D, Q, H, S, или Q на Е, N, Н, K, R.