Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 037184

   Библиографические данные
(11)037184    (13) B1
(21)201700030

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: A     


Документ опубликован 2021.02.16
Текущий бюллетень: 2021-02  
Все публикации: 037184  
Реестр евразийского патента: 037184  

(22)2015.06.18
(51) A61K 36/00 (2006.01)
A61K 31/232 (2006.01)
A01H 5/00 (2006.01)
C11B 1/10 (2006.01)
C12N 15/52 (2006.01)
C12N 15/82(2006.01)
(43)A1 2017.06.30 Бюллетень № 06  тит.лист, описание 
(45)B1 2021.02.16 Бюллетень № 02  тит.лист, описание  последовательности 
(31)2014902471; 20140104761; PCT/AU2014/050433; 14/575,756
(32)2014.06.27; 2014.12.18; 2014.12.18; 2014.12.18
(33)AU; AR; AU; US
(86)AU2015/050340
(87)2015/196250 2015.12.30
(71)КОММОНВЕЛТ САЙНТИФИК ЭНД ИНДАСТРИЭЛ РИСЕРЧ ОРГАНИЗЭЙШН; НУСИД ПТИ ЛТД; ГРЕЙНЗ РИСЕРЧ ЭНД ДИВЕЛОПМЕНТ КОРПОРЕЙШН (AU)
(72)Петри Джеймс Робертсон, Сингх Суриндер Пал, Шреста Пушкар, Макаллистер Джейсон Тимоти (AU), Дивайн Малколм Дэвид (CA), Де Фейтер Роберт Чарльз (AU)
(73)КОММОНВЕЛТ САЙНТИФИК ЭНД ИНДАСТРИЭЛ РИСЕРЧ ОРГАНИЗЭЙШН; НУСИД ПТИ ЛТД; ГРЕЙНЗ РИСЕРЧ ЭНД ДИВЕЛОПМЕНТ КОРПОРЕЙШН (AU)
(74)Рыбина Н.А., Рыбин В.Н. (RU)
(54)ЛИПИД, СОДЕРЖАЩИЙ ДОКОЗАПЕНТАЕНОВУЮ КИСЛОТУ
   Формула 
(57) 1. Экстрагированный растительный липид, содержащий жирные кислоты в этерифицированной форме, причем жирные кислоты включают олеиновую кислоту, пальмитиновую кислоту, w6 жирные кислоты, включающие линолевую кислоту (ЛК), w3 жирные кислоты, включающие a-линолевую кислоту (АЛК), докозапентаеновую кислоту (ДПК), стеаридоновую кислоту (СДК), эйкозапентаеновую кислоту (ЭПК) и эйкозатетраеновую кислоту (ЭТК), причем уровень ДПК в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от 7 до 35%.
2. Липид по п.1, отличающийся тем, что характеризуется по меньшей мере одним из следующих признаков:
i) уровень пальмитиновой кислоты в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от около 2 до 15% или от около 3 до около 10%,
ii) уровень миристиновой кислоты (С14:0) в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет около 0,1%,
iii) уровень олеиновой кислоты в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от около 1 до около 30%, от около 3 до около 30%, от около 6 до около 30%, от 1 до около 20%, от около 30 до около 60%, от около 45 до около 60%, около 30% или от около 15 до около 30%,
iv) уровень линолевой кислоты (ЛК) в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от около 4 до около 35%, от около 4 до около 20%, от около 4 до 17% или от около 5 до около 10%,
v) уровень a-линоленовой кислоты (АЛК) в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от около 4 до около 40%, от около 7 до около 40%, от около 10 до около 35%, от около 20 до около 35%, от около 4 до 16% или от около 2 до 16%,
vi) уровень g-линоленовой кислоты (ГЛК) в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет менее 4, менее чем около 3, менее чем около 2, менее чем около 1, менее чем около 0,5%, от 0,05 до 7%, от 0,05 до 4%, от 0,05 до около 3% или от 0,05 до около 2%,
vii) уровень стеаридоновой кислоты (СДК) в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет менее чем около 10, менее чем около 8, менее чем около 7, менее чем около 6, менее чем около 4, менее чем около 3%, от около 0,05 до около 7%, от около 0,05 до около 6%, от около 0,05 до около 4%, от около 0,05 до около 3%, от около 0,05 до около 10% или от 0,05 до около 2%,
viii) уровень эйкозатетраеновой кислоты (ЭТК) в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет менее чем около 6, менее чем около 5, менее чем около 4, менее чем около 1, менее чем около 0,5%, от около 0,05 до около 6%, от около 0,05 до около 5%, от около 0,05 до около 4%, от около 0,05 до около 3% или от 0,05 до около 2%,
ix) уровень эйкозатриеновой кислоты (ЭТрК) в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет менее чем 4%, менее чем около 2, менее чем около 1%, от 0,05 до 4%, от 0,05 до 3%, или от 0,05 до около 2%, или от 0,05 до около 1%,
х) уровень эйкозапентаеновой кислоты (ЭПК) в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от 4 до 15%, менее чем 4%, менее чем около 3, менее чем около 2%, от 0,05 до 10%, от 0,05 до 5%, от 0,05 до около 3% или от 0,05 до около 2%,
xi) уровень докозагексаеновой кислоты (ДГК) в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет менее чем 2% или от 0,05 до около 2%,
xii) липид содержит менее чем 0,1% w6-докозапентаеновой кислоты (22:5 D4,7,10,13,16) в общем содержании жирных кислот,
xiii) уровень общих насыщенных жирных кислот в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от около 4 до около 25%, от около 4 до около 20%, от около 6 до около 20%, от около 6 до около 12%,
xiv) уровень общих мононенасыщенных жирных кислот в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от около 4 до около 40%, около 4 до около 35%, от около 8 до около 25%, от 8 до около 22%, от около 15 до около 40% или от около 15 до около 35%,
xv) уровень общих полиненасыщенных жирных кислот в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от около 20 до около 75%, от 30 до 75%, от около 50 до около 75%, около 60, около 65, около 70, около 75% или от около 60 до около 75%,
xvi) уровень общих w6 жирных кислот в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от около 35 до около 50%, от около 20 до около 35%, от около 6 до 20%, менее чем 20, менее чем около 16, менее чем около 10%, от около 1 до около 16%, от около 2 до около 10% или от около 4 до около 10%,
xvii) уровень общих w6 жирных кислот в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет менее чем около 10, менее чем около 8, менее чем около 6%, менее чем 4%, от около 1 до около 20%, от около 1 до около 10%, от 0,5 до около 8% или от 0,5 до 4%, при этом указанные w6 жирные кислоты представляют собой сумму всех w6 жирных кислот, кроме ЛК, в экстрагированном липиде, выраженную в процентах от общего содержания жирных кислот в экстрагированном липиде,
xviii) уровень общих w3 жирных кислот в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от 36 до около 65%, от 36 до около 70%, от 40 до около 60%, от около 30 до около 60%, от около 35 до около 60%, от 40 до около 65%, от около 30 до около 65%, от 35 до около 65%, около 35, около 40, около 45, около 50, около 55, около 60, около 65 или около 70%,
xix) уровень общих w3 жирных кислот в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от 21 до около 45%, от 21 до около 35%, от около 23 до около 35%, от около 25 до около 35%, от около 27 до около 35%, около 23, около 25, около 27, около 30, около 35, около 40 или около 45%, при этом указанные w3 жирные кислоты представляют собой сумму всех w3 жирных кислот, кроме АЛК, в экстрагированном липиде, выраженную в процентах от общего содержания жирных кислот в экстрагированном липиде,
хх) соотношение общих w6 жирных кислот к общим w3 жирным кислотам в экстрагированном липиде составляет от около 1,0 до около 3,0, от около 0,1 до около 1, от около 0,1 до около 0,5, менее чем около 0,50, менее чем около 0,40, менее чем около 0,30, менее чем около 0,20, менее чем около 0,15, около 1,0, около 0,1, от около 0,10 до около 0,4 или около 0,2,
xxi) соотношение общих w6 жирных кислот (xvii) к общим w3 жирным кислотам (xix) в экстрагированном липиде составляет от около 1,0 до около 3,0, от около 0,02 до около 0,1, от около 0,1 до около 1, от около 0,1 до около 0,5, менее чем около 0,50, менее чем около 0,40, менее чем около 0,30, менее чем около 0,20, менее чем около 0,15, около 0,02, около 0,05, около 0,1, около 0,2 или около 1,0,
xxii) общие жирные кислоты в экстрагированном липиде содержат менее чем 1,5% С20:1, менее чем 1% С20:1 или около 1% С20:1,
xxiii) содержание триацилглицерида (ТАГ) в экстрагированном липиде составляет по меньшей мере около 70, по меньшей мере около 80, по меньшей мере около 90, по меньшей мере 95% (мас./мас.), от около 70 до около 99% (мас./мас.) или от около 90 до около 99% (мас./мас.),
xxiv) липид содержит диацилглицерид (ДАГ), причем ДАГ содержит ДПК,
xxv) по меньшей мере 70% этерифицированной ДГК и/или ДПК в составе ТАГ находится в положении sn-1 или sn-3 ТАГ и
xxvi) уровень ДПК в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет около 7, около 8, около 9, около 10, около 12, около 15, около 18, около 20, около 22, около 24, около 26, около 28, около 31, от около 7 до около 31%, от около 7 до около 28%, от около 10 до 35%, от около 10 до около 30%, от около 10 до около 25%, от около 10 до около 22%, от около 14 до 35%, от около 16 до 35%, от около 16 до около 30%, от около 16 до около 25% или от около 16 до около 22%.
3. Липид по п.2, отличающийся тем, что уровень ДГК составляет менее чем 0,5% от общего содержания жирных кислот экстрагированного липида.
4. Липид по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что является компонентом масла, полученного из масличной культуры.
5. Липид по п.4, отличающийся тем, что масло получено из растений рода Brassica или растений рода Camelina, в частности С. sativa.
6. Способ получения экстрагированного растительного липида по любому из пп.1-5, включающий стадии:
I) получения части растения, содержащей липид, включающий профиль жирных кислот по любому из пп.1-5, при этом часть растения содержит экзогенные полинуклеотиды, кодирующие один из следующих наборов ферментов:
a) w3-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза,
b) D15-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза,
c) D12-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза,
d) D12-десатураза, w3-десатураза и/или D15-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза,
e) w3-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
f) D15-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
g) D12-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
h) D12-десатураза, w3-десатураза и/или D15-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
i) w3-десатураза или D15-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза или
j) w3-десатураза или D15-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
причем каждый полинуклеотид функционально связан с одним или более промоторами, способными направлять экспрессию указанных полинуклеотидов в клетке части растения, и
II) экстракции липида из части растения, причем уровень ДПК в общем содержании жирных кислот экстрагированного липида составляет от 7 до 35%, при этом одна или более клеток части растения содержат по меньшей мере около на 25% больше w3 жирных кислот, чем соответствующие клетки без экзогенных полинуклеотидов.
7. Способ по п.6, отличающийся тем, что часть растения представляет собой семя.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что семя представляет собой семя Brassica napus, B. juncea или С. sativa.
9. Способ по любому из пп.6-8, отличающийся тем, что часть растения содержит экзогенные полинуклеотиды, кодирующие D12-десатуразу, w3-десатуразу и/или D15-десатуразу, D6-десатуразу, D5-десатуразу, D6-элонгазу и D5-элонгазу.
10. Способ по любому из пп.6 или 9, отличающийся тем, что указанные ферменты имеют следующие активности:
i) D6-десатураза предпочтительно осуществляет десатурацию a-линоленовой кислоты (АЛК) относительно линолевой кислоты (ЛК),
ii) D6-элонгаза также обладает активностью D9-элонгазы,
iii) D12-десатураза также обладает активностью D15-десатуразы,
iv) D6-десатураза также обладает активностью D8-десатуразы,
v) D8-десатураза также обладает активностью D6-десатуразы,
vi) D15-десатураза также обладает активностью w3-десатуразы в отношении ГЛК,
vii) w3-десатураза также обладает активностью D15-десатуразы в отношении ЛК,
viii) w3-десатураза осуществляет десатурацию ЛК и/или ГЛК,
ix) w3-десатураза осуществляет десатурацию ГЛК относительно ЛК,
х) одна или более или все десатуразы обладают более высокой активностью по отношению к ацил-КоА чем по отношению к ацил-ФХ (ацил-фосфатидилхолин),
xi) D6-десатураза обладает более высокой активностью D6-десатуразы в отношении АЛК, чем в отношении к ЛК,
xii) D6-десатураза обладает более высокой активностью в отношении АЛК-КоА чем в отношении АЛК, присоединенной к положению sn-2 ФХ,
xiii) D6-десатураза обладает по меньшей мере в 2 раза более высокой D6-десатуразной активностью, по меньшей мере в 3 раза более высокой активностью, по меньшей мере в 4 раза более высокой активностью или по меньшей мере в 5 раз более высокой активностью в отношении АЛК чем в отношении ЛК,
xiv) D6-десатураза обладает более высокой активностью в отношении АЛК-КоА чем в отношении АЛК, присоединенной к положению sn-2 ФХ,
xv) D6-десатураза обладает по меньшей мере в 5 раз или 10 раз более высокой D6-десатуразной активностью в отношении АЛК-КоА чем в отношении АЛК, присоединенной к положению sn-2 ФХ,
xvi) десатураза представляет собой фронт-энд десатуразу и
xvii) D6-десатураза не обладает обнаруживаемой активностью D5-десатуразы в отношении ЭТК.
11. Способ по любому из пп.6-10, отличающийся тем, что экзогенные полинуклеотиды ковалентно соединены в молекулу Т-ДНК, которая интегрирована в геном клеток части растения, причем количество таких молекул Т-ДНК, интегрированных в геном клеток части растения, составляет одну, две или три.
12. Способ по любому из пп.6-11, отличающийся тем, что дополнительно включает обработку экстрагированного липида для повышения уровня ДПК в процентном выражении от общего содержания жирных кислот, причем обработка включает фракционирование, перегонку или переэтерификацию, в частности, с получением метиловых или этиловых эфиров ДПК или комбинацию указанных методов.
13. Растение масличной культуры, содержащее липид по любом из пп.1-5, в семени, или его часть, включающие экзогенные полинуклеотиды, кодирующие один из следующих наборов ферментов:
i) D12-десатураза, w3-десатураза и/или D15-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза,
ii) D12-десатураза, w3-десатураза и/или D15-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
iii) w3-десатураза и/или D15-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза или
iv) w3-десатураза и/или D15-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
причем каждый полинуклеотид функционально связан с одним или более специфическими для семени промоторами, способными направлять экспрессию указанных полинуклеотидов в развивающемся семени растения.
14. Растение или его часть по п.13, включащие экзогенные полинуклеотиды, кодирующие D12-десатуразу, w3-десатуразу и/или D15-десатуразу, D6-десатуразу, D5-десатуразу, D6-элонгазу и D5-элонгазу.
15. Растение по п.13 или 14, которое представляет собой Brassica napus, В. juncea или Camelina sativa, причем зрелое семя указанного растения содержит ДПК в количестве по меньшей мере около 28 мг на 1 г семян.
16. Клетка растения по любому из пп.13-15, содержащая экзогенные полинуклеотиды, кодирующие один из следующих наборов ферментов:
i) D12-десатураза, w3-десатураза и/или D15-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза,
ii) D12-десатураза, w3-десатураза и/или D15-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
iii) w3-десатураза и/или D15-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза или
iv) w3-десатураза и/или D15-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
причем каждый полинуклеотид функционально связан с одним или более специфическими для семени промоторами, способными направлять экспрессию указанных полинуклеотидов в развивающемся семени растения.
17. Семя растения, которое получено из растения по любому из пп.13 или 15 и содержит липид по любому из пп.1-5.
18. Семя по п.17, которое представляет собой зрелое, собранное семя Brassica napus, В. juncea или Camelina sativa, содержащее влагу от около 4 до около 15 мас.%, причем содержание ДПК в указанном семени составляет по меньшей мере около 28 мг на 1 г семян.
19. Способ получения экстрагированного растительного липида по любому из пп.1-5, включающий следующие стадии:
i) получение семени по п.17 или 18 и
ii) экстракцию липида из семени.
20. Способ получения растения, содержащего липид по любому из пп.1-5, включающий:
а) количественное определение уровня ДПК в липиде, который образуется в одной или более частях множества растений, причем каждое растение содержит по меньшей мере один экзогенный полинуклеотид, кодирующий один из следующих наборов ферментов;
i) w3-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза,
ii) D15-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза,
iii) D12-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза,
iv) D12-десатураза, w3-десатураза и/или D15-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза,
v) w3-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
vi) D15-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
vii) D12-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
viii) D12-десатураза, w3-десатураза и/или D15-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
ix) w3-десатураза или D15-десатураза, D6-десатураза, D5-десатураза, D6-элонгаза и D5-элонгаза или
х) w3-десатураза или D15-десатураза, D8-десатураза, D5-десатураза, D9-элонгаза и D5-элонгаза,
причем каждый полинуклеотид функционально связан с одним или более промоторами, способными направлять экспрессию указанных полинуклеотидов в клетке части растения, и
б) идентификацию растения среди множества растений, одна или более частей которого содержат липид по любому из пп.1-5, и
в) получение потомства от идентифицированного растения или его семян.
21. Способ получения семян, включающий:
а) выращивание в поле одного или более растений по любому из пп.13-15, которые образуют семена по п.17 или 18, и
б) сбор урожая семян указанных растений.
22. Способ получения липида по любому из пп.1-5, включающий получение семян способом по п.21 и экстракцию липида из указанных семян, который имеет общий выход ДПК по меньшей мере 60 кг ДПК на 1 га.
23. Жмых, полученный из семян по п.17 или 18, или из семян, полученных от растения по любому из пп.13-15.
24. Композиция, содержащая липид по любому из пп.1-5 в комбинации со стандартным, известным, нетоксичным приемлемым для использования в пищевых продуктах или сельском хозяйстве носителем, адъювантом или растворителем, таким как фосфатно-солевой буфер, вода, этанол, полиолы, растительные масла, увлажняющий агент или эмульсия, такая как эмульсия вода/масло, а также с изотоническим агентом, сахаром, натрием хлоридом, подсластителями, вкусовыми добавками и ароматизаторами, витаминами, жирными кислотами, протеинами или витаминами, другими ингредиентами для пищевых продуктов или кормов, причем указанная композиция находится в форме, выбранной из таблеток, капсул, проглатываемой жидкости или порошка, инъекционной форме или в форме мази или крема для местного применения для использования в пищевой промышленности или сельском хозяйстве.
25. Корм, содержащий липид по любому из пп.1-5, растение или часть растения по любому из пп.13-15, растительные клетки по п.16, семена по п.17 или 18, жмых по п.23 или их комбинацию.
26. Способ получения корма, включающий смешивание липида по любому из пп.1-5, растения или части растения по любому из пп.13-15, растительных клеток п.16, семян по п.17 или 18 или жмыха по п.23 по меньшей мере с еще одним кормовым ингредиентом.
27. Способ получения пищевого продукта, включающий смешивание липида по любому из пп.1-5, растения или части растения по любому из пп.13-15, растительных клеток по п.16, семян по п.17 или 18 или жмыха по п.23 по меньшей мере с еще одним пищевым ингредиентом.
28. Применение липида по любому из пп.1-5 для получения лекарственного средства для лечения или предупреждения состояния, при котором ПНЖК оказывают благоприятное воздействие.