Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 037102

   Библиографические данные
(11)037102    (13) B1
(21)201990005

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: G     


Документ опубликован 2021.02.05
Текущий бюллетень: 2021-02  
Все публикации: 037102  
Реестр евразийского патента: 037102  

(22)2017.07.19
(51) G01N 33/50 (2006.01)
A61K 31/727 (2006.01)
G01N 24/08(2006.01)
(43)A1 2019.06.28 Бюллетень № 06  тит.лист, описание 
(45)B1 2021.02.05 Бюллетень № 02  тит.лист, описание 
(31)16382350.3
(32)2016.07.19
(33)EP
(86)EP2017/068285
(87)2018/015463 2018.01.25
(71)ЛАБОРАТОРИОС ФАРМАСЕУТИКОС РОВИ, С.А. (ES)
(72)Франко Гильермо, Гутьерро Ибон (ES)
(73)ЛАБОРАТОРИОС ФАРМАСЕУТИКОС РОВИ, С.А. (ES)
(74)Медведев В.Н. (RU)
(54)СПОСОБ АНАЛИЗА ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНОВ, ГЕПАРИНОВ И ИХ ПРОИЗВОДНЫХ МЕТОДОМ ЯМР (ЯДЕРНОГО МАГНИТНОГО РЕЗОНАНСА)
   Формула 
(57) 1. Способ анализа состава, содержащего моносахаридные остатки, присутствующие в цепях гепарина, с помощью одномерного ядерного магнитного резонанса 1H ЯМР и/или двумерного ядерного магнитного резонанса 1Н-13С HSQC, включающий следующие этапы:
a) получение состава, включающего по меньшей мере один моносахаридный остаток, присутствующий в цепях гепарина, и получение его спектра путем одномерного ядерного магнитного резонанса 1H ЯМР и/или двумерного ядерного магнитного резонанса 1Н-13С HSQC с использованием диметилмалоновой кислоты (DMMA) в качестве внутреннего эталона, и затем
b) выявление в спектре ЯМР факта присутствия или отсутствия как минимум одного сигнала как минимум одного остатка, выбранного из группы, состоящей из 4,5-ненасыщенной 2-O-сульфоуроновой кислоты (DU2S), 4,5-ненасыщенной уроновой кислоты (DU), 2-N-сульфо-1,6-ангидроглюкозамина (1,6-an.A), 2-N-сульфо-1,6-ангидроманнозамина (1,6-an.M), 2-N-сульфо-6-O-сульфоглюкозамина (ANS6S), 2, 5-ангидроманнита, N-сульфоглюкозамина, глюкуроновой кислоты, N-сульфо-6-O-сульфоглюкозамина, 2-O-сульфоидуроновой кислоты, идуроновой кислоты, N-сульфо-3-О-сульфоглюкозамина, N-сульфо-3,6-ди-О-сульфоглюкозамина, галактуроновой кислоты, ксилозы, N-ацетилглюкозамина и N-ацетил-6-O-сульфоглюкозамина,
отличающийся тем, что наличие указанных ЯМР-сигналов в определенной относительной пропорции ее нормализованных интегралов по отношению к DMMA или их отсутствие составляет образец, который позволяет идентифицировать гепарин, который представляет собой моносахаридный остаток, путем сравнения модели, полученной в анализе, с эталоном, ранее полученным для разных гепаринов при тех же условиях.
2. Способ по п.1, где в спектре 1H ЯМР идентифицируют следующую структуру:
Zoom in
тем самым определяя, что моносахаридные остатки происходят из эноксапарин натрия.
3. Способ по п.1, где в спектре 1Н-13С HSQC ЯМР идентифицируют следующую структуру:
Zoom in
Zoom in
где "LC" является "пределом количественной оценки",
тем самым определяя, что моносахаридные остатки происходят из эноксапарин натрия.
4. Способ по п.1, где в спектре 1Н ЯМР идентифицируют следующую структуру:
Zoom in
тем самым определяя, что моносахаридные остатки происходят из бемипарин натрия.
5. Способ по п.1, где в спектре 1Н-13С HSQC ЯМР идентифицируют следующую структуру:
Zoom in
тем самым определяя, что моносахаридные остатки происходят из бемипарин натрия.
6. Способ по п.1, где в спектре 1H ЯМР идентифицируют следующую структуру:
Zoom in
тем самым определяя, что моносахаридные остатки происходят из дальтепарин натрия.
7. Способ по п.1, где в спектре 1Н-13С HSQC ЯМР идентифицируют следующую структуру:
Zoom in
тем самым определяя, что моносахаридные остатки происходят из дальтепарин натрия.
8. Способ по п.1, где в спектре 1H ЯМР идентифицируют следующую структуру:
тем самым определяя, что моносахаридные остатки происходят из тинзапарин натрия
Zoom in
9. Способ по п.1, где в спектре 1Н-13С HSQC ЯМР идентифицируют следующую структуру:
Zoom in
тем самым определяя, что моносахаридные остатки происходят из тинзапарин натрия.
10. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором сигналы, соответствующие N-ацетильным группам, присутствуют в области от 1,8 до 2,1 м.д. в 1H ЯМР-спектроскопии.
11. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором сигналы, соответствующие сахаридному кольцу указанных остатков, проявляются в области от 2,8 до 6,0 м.д. в 1Н ЯМР-спектроскопии.
12. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором сигналы, соответствующие аномерным протонам H1 и протонам Н4 невосстанавливающих концов одного из указанных остатков, находятся в области между 4,6 и 6,0 м.д. в 1Н ЯМР-спектроскопии.
13. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором в 1Н ЯМР-спектроскопии сигналы 4,5-ненасыщенной 2-О-сульфоуроновой кислоты (DU2S) появляются в области между 5,99 и 5,51 м.д. для Н4 и аномерных протонов соответственно, а сигнал 4,5-ненасыщенной уроновой кислоты (DU) появляется в области 5,82 м.д. для протона Н4, сигнал 2-N-сульфо-1,6-ангидроглюкозамина (1,6-an.A) появляется в области 5,62 м.д. для аномерного протона, сигнал 2-N-сульфо-1,6-ангидроманнозамина (1,6-an.M) появляется в области 5,57 м.д. для аномерного протона, а сигналы 2-N-сульфо-6-О-сульфоглюкозамина появляются в области между 5,41 и 4,21-4,34 м.д. для протонов H1 и Н6 и Н6' соответственно.
14. Способ по любому из предшествующих пунктов, где в 1Н-13С HSQC ЯМР-спектроскопии сигналы 4,5-ненасыщенной 2-O-сульфоуроновой кислоты (DU2S) появляются при 6,0-109,0 м.д. (Н4-С4), 5,5-100,2 м.д. (Н1-С1), 4,6-77,4 м.д. (Н2-С2) или 4,3-66,8 м.д. (Н3-С3), сигналы 4,5-ненасыщенной уроновой кислоты (DU) появляются при 5,8-110,7 м.д. (Н4-С4) или 5,2-103,9 м.д. (Н1-С1), сигналы 2-N-сульфо-1,6-ангидроглюкозамина (1,6-an.A) появляются при 5,6-104,2 м.д. (Н1-С1), 3,2-58,5 м.д. (Н2-С2) или 3,8-67,5 м.д. (Н6-С6), сигналы 2-N-сульфо-1,6-ангидроманнозамина (1,6-ап.М) появляются при 5,6-103,9 м.д. (Н1-С1), 3,5-55,1 (Н2-С2) или 3,8-67,5 м.д. (Н6-С6), а сигналы 2-N-сульфо-6-O-сульфоглюкозамина появляются при 5,4-99,4 м.д. (Н1-С1), 3,8-80,9 м.д. (Н4-С4), от 3,7 до 3,8- от 42,3 до 72,5 м.д. (Н3-С3), 4,1- от 70,6 до 71,7 м.д. (Н5-С5) или от 3,3 до 60,5-60,8 м.д. (Н2-С2.)
15. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором модель, полученная в результате анализа, является таковой, которая определяет, что моносахаридные остатки происходят из нефракционированного гепарина.
16. Способ по любому из пп.1-8, в котором модель, полученная при анализе, является таковой, которая определяет, что моносахаридные остатки происходят из низкомолекулярного гепарина (LMWH).
17. Способ по любому из пп.1-8, в котором модель, полученная при анализе, является таковой, которая определяет, что остатки моносахаридов происходят из ультранизкомолекулярного гепарина (ULMWH).
Zoom in