Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 037088

   Библиографические данные
(11)037088    (13) B1
(21)201691208

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: C     


Документ опубликован 2021.02.04
Текущий бюллетень: 2021-02  
Все публикации: 037088  
Реестр евразийского патента: 037088  

(22)2014.12.12
(51) C12N 9/02(2006.01)
(43)A1 2016.12.30 Бюллетень № 12  тит.лист, описание 
(45)B1 2021.02.04 Бюллетень № 02  тит.лист, описание  последовательности 
(31)13196950.3
(32)2013.12.12
(33)EP
(86)EP2014/077638
(87)2015/086839 2015.06.18
(71)ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. (NL)
(72)Йонг Де Рене Марсель, Чжао Чжэн, Дюлк Ден Бен, Винтер Ремко Тшиббе (NL)
(73)ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. (NL)
(74)Бадаева Т.Н., Фелицына С.Б. (RU)
(54)ФУМАРАТРЕДУКТАЗЫ
   Формула 
(57) 1. Вариантный полипептид, имеющий активность фумаратредуктазы, который имеет модифицированную NADP(H)-зависимую активность и/или модифицированную NAD(H)-зависимую активность по сравнению с эталонным полипептидом, имеющим активность фумаратредуктазы и содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33,
где вариантный полипептид характеризуется увеличением NADP(H)-зависимой активности относительно NAD(H)-зависимой активности по сравнению с эталонным полипептидом,
где вариантный полипептид содержит аминокислотную последовательность, которая при выравнивании с фумаратредуктазой, имеющей последовательность, представленную в SEQ ID NO: 33, содержит по меньшей мере одну замену аминокислотных остатков, соответствующих любой из аминокислот 1042, 1071, 1072, 1082 или 1083, где указанные положения определены относительно SEQ ID NO: 33,
где вариантный полипептид имеет по меньшей мере 80% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 33.
2. Вариантный полипептид по п.1, который имеет повышенную NADP(H)-зависимую активность по сравнению с эталонным полипептидом.
3. Вариантный полипептид по п.1 или 2, который имеет пониженную NADP(H)-зависимую активность по сравнению с эталонным полипептидом.
4. Вариантный полипептид по любому из предшествующих пунктов, где модифицированная NADP(H)-зависимая активность является увеличенной NADP(H)-зависимой активностью и модифицированная NAD(H)-зависимая активность является сниженной NAD(H)-зависимой активностью.
5. Вариантный полипептид по любому из предшествующих пунктов, где вариантный полипептид является не встречающимся в природе полипептидом.
6. Вариантный полипептид по любому из предшествующих пунктов, определенный в табл. 1.
7. Вариантный полипептид по любому из предшествующих пунктов, имеющий по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 33.
8. Вариантный полипептид по любому из предшествующих пунктов, где вариантный полипептид содержит:
a) R, K или Q в положении 1042, определенном относительно SEQ ID NO: 33;
b) G, T или S в положении 1071, определенном относительно SEQ ID NO: 33;
c) K в положении 1072, определенном относительно SEQ ID NO: 33;
d) K или R в положении 1082, определенном относительно SEQ ID NO: 33; и/или
e) S, Y, I или A в положении 1083, определенном относительно SEQ ID NO: 33
9. Нуклеиновая кислота, кодирующая вариантный полипептид, имеющий активность фумаратредуктазы, где нуклеиновая кислота содержит последовательность, кодирующую вариантный полипептид по любому из предшествующих пунктов.
10. Нуклеотидная конструкция для экспрессии вариантного полипептида, имеющего активность фумаратредуктазы, где нуклеотидная конструкция содержит нуклеотидную последовательность по п.9, функционально связанную с одной или несколькими контрольными последовательностями, способными направлять экспрессию фумаратредуктазы в подходящем экспрессирующем хозяине.
11. Экспрессирующий вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.9 или нуклеотидную конструкцию по п.10.
12. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по п.9, нуклеотидную конструкцию по п.10 или экспрессирующий вектор по п.11.
13. Клетка-хозяин по п.12, которая является прокариотической клеткой, такой как бактериальная клетка, или эукариотической клеткой, например дрожжевой клеткой или клеткой мицелиального гриба.
14. Клетка-хозяин по п.13, где дрожжевая клетка представляет собой клетку-хозяин Saccharomyces cerevisiae.
15. Способ получения фумаратредуктазы, включающий культивирование клетки-хозяина по любому из пп.12-14, в условиях, подходящих для выработки фумаратредуктазы и извлечения фумаратредуктазы.
16. Способ получения дикарбоновой кислоты, такой как янтарная кислота, который включает ферментацию клетки-хозяина по любому из пп.12-14, в условиях, подходящих для выработки янтарной кислоты и, необязательно, извлечения янтарной кислоты.