Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 036375

   Библиографические данные
(11)036375    (13) B1
(21)201650071

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: C     


Документ опубликован 2020.11.02
Текущий бюллетень: 2020-11  
Все публикации: 036375  
Реестр евразийского патента: 036375  

(22)2015.05.04
(51) C12N 9/22 (2006.01)
C12N 15/90(2006.01)
(43)A1 2017.03.31 Бюллетень № 03  тит.лист, описание 
(45)B1 2020.11.02 Бюллетень № 11  тит.лист, описание  последовательности 
(31)10 2014 106 327.9
(32)2014.05.07
(33)DE
(86)DE2015/200295
(87)2015/169314 2015.11.12
(71)ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ "ЭйДжиСиТи" (RU)
(72)Мок Ульрике (GB), Фесе Борис (DE)
(73)ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ "ЭйДжиСиТи" (RU)
(74)Пустовалова М.Л., Котлов Д.В., Черняев М.А., Яремчук А.А. (RU)
(54)TAL-ЭФФЕКТОРНАЯ НУКЛЕАЗА ДЛЯ ЦЕЛЕВОГО НОКАУТА ВИЧ-КОРЕЦЕПТОРА CCR5
   Формула 
(57) 1. Набор из двух мономеров TAL-эффекторной нуклеазы для инактивации ВИЧ корецептора CCR5 человека, характеризующийся тем, что каждый мономер TAL-эффекторной нуклеазы включает в себя домен с эндонуклеазной активностью II типа и ДНК-связывающий домен TAL-эффектора, содержащий 19 единиц повтора, каждая из которых имеет пару вариабельных аминокислот RVD (Repeat Variable Diresidue), при этом:
а) ДНК-связывающий домен TAL-эффектора одного мономера TAL-эффекторной нуклеазы связывается с последовательностью-мишенью GCTGGTCATCCTCATCCTG (SEQ ID NO: 1) и содержит следующую последовательность RVD в составе следующих друг за другом единиц повтора: NH, HD, NG, NH, NH, NG, HD, NI, NG, HD, HD, NG, HD, NI, NG, HD, HD, NG, NN, и
б) ДНК-связывающий домен TAL-эффектора другого мономера TAL-эффекторной нуклеазы связывается с последовательностью-мишенью AGATGTCAGTCATGCTCTT (SEQ ID NO: 2) и содержит следующую последовательность RVD в составе следующих друг за другом единиц повтора: NI, NN, NI, NG, NN, NG, HD, NI, NH, NG, HD, NI, NG, NH, HD, NG, HD, NG, NG;
при этом домен с эндонуклеазной активностью в каждом мономере TAL-эффекторной нуклеазы является С-концевым по отношению к ДНК-связывающему домену TAL-эффектора и каждая единица повтора содержит от 33 до 35 аминокислот;
при этом указанные мономеры, связываясь с двуцепочечной ДНК в локусе гена ВИЧ корецептора CCR5 человека, образуют TAL-эффекторную нуклеазу, способную образовывать двуцепочечный разрыв в указанной ДНК.
2. Набор по п.1, в котором домен с эндонуклеазной активностью мономеров TAL-эффекторных нуклеаз является ДНК-расщепляющим доменом эндонуклеазы FokI.
3. Набор по любому из пп.1, 2, в котором первый мономер TAL-эффекторной нуклеазы содержит аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 3, а второй мономер TAL-эффекторной нуклеазы содержит аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 4.
4. Нуклеиновая кислота для инактивации ВИЧ корецептора CCR5 человека, включающая в себя:
а) первую нуклеотидную последовательность, кодирующую первый мономер TAL-эффекторной нуклеазы, который содержит домен с эндонуклеазной активностью II типа и ДНК-связывающий домен TAL-эффектора, содержащий 19 единиц повтора, каждая из которых имеет пару вариабельных аминокислот RVD, и при этом ДНК-связывающий домен TAL-эффектора связывается с последовательностью-мишенью GCTGGTCATCCTCATCCTG (SEQ ID NO: 1) и содержит следующую последовательность RVD в составе следующих друг за другом единиц повтора: NH, HD, NG, NH, NH, NG, HD, NI, NG, HD, HD, NG, HD, NI, NG, HD, HD, NG, NN, и
б) вторую нуклеотидную последовательность, кодирующую второй мономер TAL-эффекторной нуклеазы, который содержит домен с эндонуклеазной активностью II типа и ДНК-связывающий домен TAL-эффектора, содержащий 19 единиц повтора, каждая из которых имеет пару вариабельных аминокислот RVD, и при этом ДНК-связывающий домен TAL-эффектора связывается с последовательностью-мишенью AGATGTCAGTCATGCTCTT (SEQ ID NO: 2) и содержит следующую последовательность RVD в составе следующих друг за другом единиц повтора: NI, NN, NI, NG, NN, NG, HD, NI, NH, NG, HD, NI, NG, NH, HD, NG, HD, NG, NG.
5. Вектор, включающий в себя нуклеиновую кислоту по п.4.
6. Комбинация нуклеиновых кислот для инактивации ВИЧ корецептора CCR5 человека, включающая в себя:
а) первую нуклеиновую кислоту, кодирующую первый мономер TAL-эффекторной нуклеазы, который содержит домен с эндонуклеазной активностью II типа и ДНК-связывающий домен TAL-эффектора, содержащий 19 единиц повтора, каждая из которых имеет пару вариабельных аминокислот RVD, и при этом ДНК-связывающий домен TAL-эффектора связывается с последовательностью-мишенью GCTGGTCATCCTCATCCTG (SEQ ID NO: 1) и содержит следующую последовательность RVD в составе следующих друг за другом единиц повтора: NH, HD, NG, NH, NH, NG, HD, NI, NG, HD, HD, NG, HD, NI, NG, HD, HD, NG, NN, и
б) вторую нуклеиновую кислоту, кодирующую второй мономер TAL-эффекторной нуклеазы, который содержит домен с эндонуклеазной активностью II типа и ДНК-связывающий домен TAL-эффектора, содержащий 19 единиц повтора, каждая из которых имеет пару вариабельных аминокислот RVD, и при этом ДНК-связывающий домен TAL-эффектора связывается с последовательностью-мишенью AGATGTCAGTCATGCTCTT (SEQ ID NO: 2) и содержит следующую последовательность RVD в составе следующих друг за другом единиц повтора: NI, NN, NI, NG, NN, NG, HD, NI, NH, NG, HD, NI, NG, NH, HD, NG, HD, NG, NG.
7. Комбинация нуклеиновых кислот по п.6, в которой первая нуклеиновая кислота является первой мРНК и вторая нуклеиновая кислота является второй мРНК.
8. Комбинация нуклеиновых кислот по п.7, в которой первая нуклеиновая кислота включает последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 17, а вторая нуклеиновая кислота включает последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 18.
9. Изолированная клетка-хозяин, включающая в себя нуклеиновую кислоту по п.4, комбинацию нуклеиновых кислот по пп.6-8 или вектор по п.5 при условии, что клетка-хозяин не является зародышевой клеткой человека, эмбриональной зародышевой клеткой человека или эмбриональной стволовой клеткой, процесс получения которых сопряжен с разрушением эмбриона человека.
10. Фармацевтическая композиция для инактивации ВИЧ корецептора CCR5 человека, включающая в себя нуклеиновую кислоту по п.4, комбинацию нуклеиновых кислот по пп.6-8 или вектор по п.5.
11. Лекарственное средство для инактивации ВИЧ корецептора CCR5 человека, включающее в себя нуклеиновую кислоту по п.4, комбинацию нуклеиновых кислот по любому из пп.6-8, вектор по п.5 или фармацевтическую композицию по п.10.