Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 035885

   Библиографические данные
(11)035885    (13) B1
(21)201791753

 A ]   B ]   C ]   [ D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: C     


Документ опубликован 2020.08.27
Текущий бюллетень: 2020-08  
Все публикации: 035885  
Реестр евразийского патента: 035885  

(22)2016.04.21
(51) C07H 21/00 (2006.01)
C12P 19/34 (2006.01)
C12N 15/113(2010.01)
(43)A1 2018.04.30 Бюллетень № 04  тит.лист, описание 
(45)B1 2020.08.27 Бюллетень № 08  тит.лист, описание  последовательности 
(31)62/151,891
(32)2015.04.23
(33)US
(86)US2016/028657
(87)2016/172346 2016.10.27
(71)ДЖЕРОН КОРПОРЕЙШН (US)
(72)Рамия Премчандран Х. (US)
(73)ДЖЕРОН КОРПОРЕЙШН (US)
(74)Поликарпов А.В., Соколова М.В., Путинцев А.И., Черкас Д.А., Игнатьев А.В. (RU)
(54)СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИНУКЛЕОТИДОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КОМПОЗИЦИЙ СОЛЕЙ ПОЛИВАЛЕНТНЫХ КАТИОНОВ
   Формула 
(57) 1. Способ получения полинуклеотида, включающий:
a) приведение в контакт первой полинуклеотидной композиции с поливалентной катионной солью для осаждения первой соли полинуклеотида и
b) отделение первой соли полинуклеотида от контактирующей первой полинуклеотидной композиции для получения второй полинуклеотидной композиции, содержащей первую соль полинуклеотида;
причем упомянутая первая полинуклеотидная композиция содержит:
(i) полинуклеотид, имеющий последовательность из 7-500 нуклеозидов, в котором по меньшей мере два из нуклеозидов связаны N3'®P5' тиофосфорамидатной межнуклеозидной связью; и
(ii) растворимые нецелевые синтетические продукты и реагенты;
c) приведение в контакт второй полинуклеотидной композиции с этапа b) с носителем хроматографии на обращенной фазе и
d) элюирование из этого носителя хроматографии на обращенной фазе третьей полинуклеотидной композиции, содержащей вторую растворимую соль полинуклеотида.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что все нуклеозиды связаны межнуклеозидными связями, каждая из которых независимо выбрана из N3'®P5' тиофосфорамидатной межнуклеозидной связи и N3'®P5' фосфорамидатной межнуклеозидной связи.
3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что полинуклеотид описан формулой (I)
Zoom in
в которой каждый В независимо представляет собой пурин, защищенный пурин, пиримидин или защищенный пиримидин или их аналог;
каждый X независимо представляет собой кислород или серу;
каждый R3 независимо представляет собой водород, фтор, гидроксил, алкокси, замещенный алкокси или защищенный гидроксил;
R6 представляет собой амино, гидроксил, защищенный амино, защищенный гидрокси, -O-T-Z или -NH-T-Z;
каждый Т независимо представляет собой необязательный линкер;
каждый Z независимо представляет собой Н, липид, носитель, олигонуклеотид, полимер, полипептид, обнаруживаемую метку или маркер и
n представляет собой целое число от 7 до 100.
4. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что полинуклеотид содержит последовательность, содержащую 13 или более нуклеозидов, комплементарных РНК-компоненту теломеразы человека.
5. Способ по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что полинуклеотид содержит от 10 до 50 смежных нуклеозидов, комплементарных РНК-компоненту теломеразы человека.
6. Способ по любому из пп.1-5, отличающийся тем, что все нуклеозиды соединены между собой N3'®Р5' тиофосфорамидатными межнуклеозидными связями.
7. Способ по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что полинуклеотид содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из GTTAGGGTTAG (SEQ ID NO: 4), TAGGGTTAGACAA (SEQ ID NO: 3) и CAGTTAGGGTTAG (SEQ ID NO: 5).
8. Способ по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что полинуклеотид конъюгирован с липидным фрагментом через опциональный линкер.
9. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что вторая соль полинуклеотида имеет структуру:
Zoom in
где каждый Мх+ независимо представляет собой водород или катионный противоион, каждый х независимо представляет собой 1, 2 или 3 и n представляет собой целое число от 5 до 13.
10. Способ по любому из пп.1-9, отличающийся тем, что после этапа d) элюирования упомянутая вторая полинуклеотидная соль представляет собой фармацевтически приемлемую соль полинуклеотида.
11. Способ по любому из пп.1-10, отличающийся тем, что после этапа d) элюирования упомянутая вторая полинуклеотидная соль представляет собой одновалентную катионную соль полинуклеотида.
12. Способ по любому из пп.1-11, отличающийся тем, что после этапа d) элюирования упомянутая вторая полинуклеотидная соль представляет собой натриевую соль полинуклеотида.
13. Способ по любому из пп.1-12, отличающийся тем, что он дополнительно включает, перед этапом а) приведения в контакт, отщепление упомянутого полинуклеотида от носителя для твердофазного синтеза для получения первой полинуклеотидной композиции в виде неочищенного синтетического препарата полинуклеотида.
14. Способ по любому из пп.1-13, отличающийся тем, что перед этапом а) приведения в контакт упомянутая первая полинуклеотидная композиция содержит одновалентную катионную соль полинуклеотида.
15. Способ по любому из пп.1-14, отличающийся тем, что этап а) приведения в контакт включает загрузку и элюирование первой полинуклеотидной композиции из катионообменного носителя.
16. Способ по любому из пп.1-15, отличающийся тем, что этап b) отделения включает центрифугирование контактирующей первой полинуклеотидной композиции для осаждения осадка соли первого полинуклеотида.
17. Способ по любому из пп.1-16, отличающийся тем, что этап b) отделения включает фильтрацию соли первого полинуклеотида из контактирующей первой полинуклеотидной композиции.
18. Способ по п.1, отличающийся тем, что вторая полинуклеотидная композиция с этапа b) загружается непосредственно на носитель хроматографии на обращенной фазе.
19. Способ по любому из пп.1-18, отличающийся тем, что он дополнительно включает, перед этапом с) приведения в контакт, растворение второй полинуклеотидной композиции в растворителе.
20. Способ по любому из пп.1-19, отличающийся тем, что по меньшей мере один поливалентный катионный противоион является двухвалентным.
21. Способ по п.20, отличающийся тем, что по меньшей мере один поливалентный катионный противоион выбран из группы, состоящей из магния, цинка и кальция.
22. Способ по любому из пп.1-19, отличающийся тем, что по меньшей мере один поливалентный катионный противоион является трехвалентным.
23. Способ по п.22, отличающийся тем, что по меньшей мере один поливалентный катионный противоион представляет собой алюминий.
24. Способ по любому из пп.1-23, отличающийся тем, что соль первого полинуклеотида дополнительно содержит одновалентный катионный противоион.
25. Осадок соли полинуклеотида, содержащей по меньшей мере один поливалентный катионный противоион; причем полинуклеотид имеет последовательность из 7-500 нуклеозидов, комплементарных РНК-компоненту теломеразы человека, и по меньшей мере два из нуклеозидов соединены между собой N3'®Р5' тиофосфорамидатной межнуклеозидной связью.
26. Осадок соли полинуклеотида по п.25, причем по меньшей мере один поливалентный катионный противоион является двухвалентным.
27. Осадок соли полинуклеотида по п.26, причем по меньшей мере один поливалентный катионный противоион выбран из группы, состоящей из магния, цинка и кальция.
28. Осадок соли полинуклеотида по любому из пп.25-27, причем по меньшей мере один поливалентный катионный противоион представляет собой магний.
29. Осадок соли полинуклеотида по п.25, причем по меньшей мере один поливалентный катионный противоион является трехвалентным.
30. Осадок соли полинуклеотида по п.29, причем по меньшей мере один поливалентный катионный противоион представляет собой алюминий.
31. Осадок соли полинуклеотида по любому из пп.25-30, причем соль полинуклеотида содержит 3 мол.% или более поливалентного катионного противоиона.
32. Осадок соли полинуклеотида по любому из пп.25-30, причем полинуклеотид содержит 1,0 % по массе или более поливалентного катионного противоиона.
33. Осадок соли полинуклеотида по любому из пп.25-32, причем полинуклеотид описан формулой (I)
Zoom in
в которой каждый В независимо представляет собой пурин, защищенный пурин, пиримидин или защищенный пиримидин или их аналог;
каждый X независимо представляет собой кислород или серу;
каждый R3 независимо представляет собой водород, фтор, гидроксил, алкокси, замещенный алкокси или защищенный гидроксил;
R6 представляет собой амино, гидроксил, защищенный амино, защищенный гидрокси, -O-T-Z или -NH-T-Z;
каждый Т независимо представляет собой необязательный линкер;
каждый Z независимо представляет собой Н, липид, носитель, олигонуклеотид, полимер, полипептид, обнаруживаемую метку или маркер и
n представляет собой целое число от 7 до 100.
34. Осадок соли полинуклеотида по любому из пп.25-33, причем полинуклеотид содержит последовательность, содержащую 13 или более нуклеозидов, комплементарных РНК-компоненту теломеразы человека.
35. Осадок соли полинуклеотида по любому из пп.25-34, причем полинуклеотид содержит от 10 до 50 смежных нуклеозидов, комплементарных РНК-компоненту теломеразы человека.
36. Осадок соли полинуклеотида по любому из пп.25-35, причем все нуклеозиды соединены между собой N3'®Р5' тиофосфорамидатными межнуклеозидными связями.
37. Осадок соли полинуклеотида по любому из пп.25-36, причем полинуклеотид содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из GTTAGGGTTAG (SEQ ID NO: 4), TAGGGTTAGACAA (SEQ ID NO: 3) и CAGTTAGGGTTAG (SEQ ID NO: 5).
38. Осадок соли полинуклеотида по любому из пп.25-37, причем полинуклеотид конъюгирован с липидным фрагментом через опциональный линкер.
39. Осадок соли полинуклеотида по любому из пп.25-38, причем полинуклеотид имеет структуру:
Zoom in
где каждый Мх+ независимо представляет собой катионный противоион, каждый х представляет собой 1, 2 или 3 и n равно 5 до 12.
Zoom in