Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 035559

   Библиографические данные
(11)035559    (13) B1
(21)201590998

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: A     


Документ опубликован 2020.07.07
Текущий бюллетень: 2020-07  
Все публикации: 035559  
Реестр евразийского патента: 035559  

(22)2013.11.21
(51) A61K 38/39 (2006.01)
A61K 38/00 (2006.01)
C07K 14/00(2006.01)
(43)A1 2016.02.29 Бюллетень № 02  тит.лист, описание 
(45)B1 2020.07.07 Бюллетень № 07  тит.лист, описание  последовательности 
(31)61/728,906; 61/728,914; 61/728,912; 61/782,550; 61/809,541
(32)2012.11.21; 2012.11.21; 2012.11.21; 2013.03.14; 2013.04.08
(33)US; US; US; US; US
(86)US2013/071267
(87)2014/081944 2014.05.30
(71)ЯНССЕН БАЙОТЕК, ИНК. (US)
(72)Андерсон Марк, Аттар Рикардо, Дим Майкл, Хиун Лайнус, Джекобс Стивен, Кинг Аластэр, Клейн Донна, Мурс Шери, О'Нил Карин, Пича Кристен (US)
(73)ЯНССЕН БАЙОТЕК, ИНК. (US)
(74)Медведев В.Н. (RU)
(54)СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С EGFR И C-MET МОЛЕКУЛЫ С ДОМЕНАМИ ФИБРОНЕКТИНА ТИПА III
   Формула 
(57) 1. Выделенная биспецифическая молекула, содержащая первый и второй домен FN3, причем первый домен специфически связывается с рецептором эпидермального фактора роста (EGFR) и блокирует связывание с эпидермальным фактором роста (EGF), а второй домен специфически связывается с рецептором фактора роста гепатоцитов (c-Met) и блокирует его связывание с фактором роста гепатоцитов (HGF), при этом первый домен содержит последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 18-29, 107-110, 122-137 или 194-211, а второй домен содержит последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 32-49, 111-114 или 212-223.
2. Биспецифическая молекула по п.1, в которой:
a) первый домен ингибирует индуцированное EGF фосфорилирование EGFR по тирозиновому остатку EGFR в положении 1173 со значением IC50 менее 2,5´10-6 М при измерении в клетках A431 с использованием 50 нг/мл человеческого EGF, а второй домен ингибирует индуцированное HGF фосфорилирование c-Met по тирозиновому остатку c-Met в положении 1349 со значением IC50 менее 1,5´10-6 М при измерении в клетках NCI-H441 с использованием 100 нг/мл человеческого HGF;
b) первый домен ингибирует индуцированное EGF фосфорилирование EGFR по тирозиновому остатку EGFR в положении 1173 со значением IC50 от 1,8´10-8М до 2,5´10-6М при измерении в клетках A431 с использованием 50 нг/мл человеческого EGF, a второй домен FN3 ингибирует индуцированное HGF фосфорилирование c-Met по тирозиновому остатку c-Met в положении 1349 со значением IC50 от 4´10-9 М до 1,5´10-6 М при измерении в клетках NCI-H441 с использованием 100 нг/мл человеческого HGF;
c) первый домен связывается с человеческим EGFR с константой диссоциации (KD) менее чем 1´10-8 М, а второй домен FN3 связывается с человеческим c-Met с KD менее чем 5´10-8 М, причем KD измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса; или
d) первый домен связывается с человеческим EGFR с KD от 2´10-10 до 1´10-8 M, а второй домен FN3 связывается с человеческим c-Met с KD от 3´10-10 до 5´10-8 М, причем KD измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса.
3. Биспецифическая молекула по п.1 или 2, ингибирующая пролиферацию клеток NCI-H292 со значением IC50, которое по меньшей мере в 30 раз меньше значения IC50 для ингибирования роста клеток NCI-H292 смесью первого домена и второго домена, причем пролиферацию клеток индуцируют 10% эмбриональной бычьей сыворотки (FBS) с добавлением 7,5 нг/мл HGF.
4. Биспецифическая молекула по любому из пп.1-3, которая:
a) ингибирует индуцированное EGF фосфорилирование EGFR в положении 1173 со значением IC50 менее 8´10-7 М при измерении в клетках NCI-H292 с использованием 50 нг/мл человеческого EGF;
b) ингибирует индуцированное HGF фосфорилирование c-Met по тирозиновому остатку c-Met в положении 1349 со значением IC50 менее 8,4´10-7 М при измерении в клетках NCI-H441 с использованием 100 нг/мл человеческого HGF;
c) ингибирует индуцированную HGF пролиферацию клеток NCI-H292 со значением IC50 менее 9,5´10-6 М, причем пролиферацию клеток индуцируют 10% FBS с добавлением 7,5 нг HGF;
d) связывается с EGFR с KD менее 2,0´10-8М или
e) связывается с c-Met с KD менее 2,0´10-8 М;
причем KD измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса.
5. Биспецифическая молекула по любому из пп.1-4, в которой первый домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 107 или 108; а второй домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 114.
6. Биспецифическая молекула по любому из пп.1-5, в которой первый домен FN3 связывается с EGFR при помощи одного или более аминокислотных остатков, соответствующих остаткам D23, F27, Y28, V77 и G85 последовательности P54AR4-83v2 (SEQ ID NO: 27).
7. Биспецифическая молекула по п.6, в которой второй домен FN3 связывается с c-Met при помощи одного или более аминокислотных остатков, соответствующих остаткам R34, F38, M72 и I79 в P114AR7P95-A3 (SEQ ID NO: 41).
8. Биспецифическая молекула по любому из пп.1-7, в которой:
a) первый домен FN3 содержит
i) петлю FG, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 179 или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 180; и
ii) петлю BC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 181; и
b) второй домен FN3 содержит
i) тяж C и петлю CD, содержащие аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 184; и
ii) тяж F и петлю FG, содержащие аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 185.
9. Биспецифическая молекула по любому из пп.1-8, в которой:
a) первый домен FN3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 182 или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 183 и
b) второй домен FN3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 186.
10. Биспецифическая молекула по любому из пп.1-9, в которой первый домен FN3 и/или второй домен FN3 содержит замены в одном или более положении 11, 14, 17, 37, 46, 73 и 86 в Tencon (SEQ ID NO: 1).
11. Биспецифическая молекула по п.10, в которой первый домен FN3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 187; а второй домен FN3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 188.
12. Биспецифическая молекула по п.1, в которой первый домен и второй домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:
a) 27 и 32 соответственно;
b) 27 и 41 соответственно;
c) 27 и 40 соответственно;
d) 27 и 33 соответственно;
e) 107 и 41 соответственно;
f) 107 и 40 соответственно;
g) 107 и 33 соответственно;
h) 107 и 32 соответственно;
i) 107 и 114 соответственно;
j) 108 и 111 соответственно;
k) 108 и 112 соответственно;
l) 108 и 113 соответственно;
m) 108 и 114 соответственно;
n) 109 и 111 соответственно;
o) 109 и 112 соответственно;
p) 109 и 113 соответственно;
q) 109 и 114 соответственно;
r) 110 и 111 соответственно;
s) 110 и 112 соответственно;
t) 110 и 113 соответственно;
u) 110 и 114 соответственно;
v) 135 и 111 соответственно;
w) 135 и 112 соответственно;
x) 135 и 113 соответственно или
y) 135 и 114 соответственно.
13. Биспецифическая молекула по п.12, в которой первый домен FN3 и/или второй домен FN3 содержит одну или более замен, соответствующих заменам L17A, N46V и E86I в Tencon (SEQ ID NO: 1).
14. Биспецифическая молекула по любому из пп.1-13, в которой первый домен FN3 и/или второй домен FN3 отобраны из библиотеки, созданной на основе последовательности Tencon SEQ ID NO: 1.
15. Биспецифическая молекула по любому из пп.1-14, в которой первый домен FN3 и второй домен FN3 соединены линкером.
16. Биспецифическая молекула по п.15, в которой линкер содержит аминокислотную последовательность, представленную в одной из SEQ ID NO: 78-84 и 224.
17. Биспецифическая молекула по любому из пп.1-16, содержащая аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 50-72, 106, 118-121, 138-165 или 190-193, и необязательно содержащая метионин (Met), присоединенный к N-концу молекулы.
18. Биспецифическая молекула по п.17, дополнительно содержащая цистеин, присоединенный к C-концу молекулы.
19. Биспецифическая молекула по любому из пп.1-18, соединенная с фрагментом, увеличивающим период полужизни.
20. Биспецифическая молекула по п.19, в которой фрагмент, увеличивающий период полужизни, представляет собой альбумин-связывающую молекулу, полиэтиленгликоль (ПЭГ), альбумин, вариант альбумина или по меньшей мере часть Fc-области иммуноглобулина.
21. Биспецифическая молекула по п.20, в которой фрагмент, увеличивающий период полужизни, представляет собой вариант альбумина с последовательностью SEQ ID NO: 189.
22. Выделенный полинуклеотид, кодирующий биспецифическую молекулу по п.1.
23. Вектор, содержащий полинуклеотид по п.22.
24. Выделенная клетка-хозяин, содержащая вектор по п.23.
25. Способ получения биспецифической молекулы, включающий культивирование выделенной клетки-хозяина по п.24 в условиях, обеспечивающих экспрессию биспецифической молекулы, и ее очистку.
26. Фармацевтическая композиция для лечения рака, содержащая биспецифическую молекулу по любому из пп.1-21 и фармацевтически приемлемый носитель.
27. Способ лечения рака, включающий введение терапевтически эффективного количества биспецифической молекулы по п.1 нуждающемуся в лечении пациенту.
28. Способ по п.27, в котором рак связан с активирующей EGFR мутацией, амплификацией гена EGFR, активирующей c-Met мутацией или амплификацией гена c-Met.
29. Способ по п.28, в котором активирующая EGFR мутация представляет собой замену G719A, G719X (X представляет собой любую аминокислоту), L861X (X представляет собой любую аминокислоту), L858R, E746K, L747S, E749Q, A750P, A755V, V765M, L858P или T790M, делецию E746-A750, делецию R748-P753, вставку Ala (A) между M766 и A767, вставку Ser, Val и Ala (SVA) между S768 и V769 и вставку Asn и Ser (NS) между P772 и H773.
30. Способ по п.27, в котором субъект резистентен или имеет приобретенную резистентность к лечению эрлотинибом, гефитинибом, афатинибом, CO-1686, AZD9192 или цетуксимабом.
31. Способ по п.27, в котором рак представляет собой рак эпителиальных клеток, рак молочной железы, рак яичников, рак легких, немелкоклеточный рак легких (NSCLC), легочную аденокарциному, мелкоклеточный рак легких, колоректальный рак, рак анального канала, рак простаты, рак почек, рак мочевого пузыря, рак головы и шеи, рак глотки, рак носа, рак поджелудочной железы, рак кожи, рак ротовой полости, рак языка, рак пищевода, вагинальный рак, рак шейки матки, рак селезенки, тестикулярный рак, рак желудка, рак тимуса, рак толстой кишки, рак щитовидной железы, рак печени, гепатоклеточную карциному (HCC) или спорадическую или наследственную папиллярную почечную карциному (PRCC).
32. Способ по п.27, дополнительно включающий введение второго терапевтического агента.
33. Способ по п.31, в котором второй терапевтический агент представляет собой химиотерапевтический агент или целенаправленное противораковое средство.
34. Способ по п.33, в котором второй химиотерапевтический агент представляет собой цисплатин, винбластин, тирозинкиназный ингибитор EGFR, с-Met, HER2, HER3, HER4 или VEGFR, эрлотиниб, гефитиниб или афатиниб.
35. Способ по п.32, в котором второй терапевтический агент и биспецифическую молекулу вводят одновременно или последовательно.
36. Применение биспецифической молекулы, содержащей домены FN3, по любому из пп.1-21 для лечения рака.
37. Применение по п.36, где рак представляет собой рак эпителиальных клеток, рак молочной железы, рак яичников, рак легких, немелкоклеточный рак легких (NSCLC), легочную аденокарциному, мелкоклеточный рак легких, колоректальный рак, рак анального канала, рак простаты, рак почек, рак мочевого пузыря, рак головы и шеи, рак глотки, рак носа, рак поджелудочной железы, рак кожи, рак ротовой полости, рак языка, рак пищевода, вагинальный рак, рак шейки матки, рак селезенки, тестикулярный рак, рак желудка, рак тимуса, рак толстой кишки, рак щитовидной железы, рак печени, гепатоклеточную карциному (HCC) или спорадическую или наследственную папиллярную почечную карциному (PRCC).
Zoom in