Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 035511

   Библиографические данные
(11)035511    (13) B1
(21)201492183

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: A     


Документ опубликован 2020.06.26
Текущий бюллетень: 2020-06  
Все публикации: 035511  
Реестр евразийского патента: 035511  

(22)2013.06.28
(51) A61K 38/46 (2006.01)
C07K 1/00 (2006.01)
C12P 21/06(2006.01)
(43)A1 2015.06.30 Бюллетень № 06  тит.лист, описание 
(45)B1 2020.06.26 Бюллетень № 06  тит.лист, описание  SEQL 
(31)61/666,719
(32)2012.06.29
(33)US
(86)US2013/048571
(87)2014/005019 2014.01.03
(71)ШИР ХЬЮМАН ДЖЕНЕТИК ТЕРАПИС, ИНК. (US)
(72)Болдог Ференс, Хартлейн Майкл (US)
(73)ШИР ХЬЮМАН ДЖЕНЕТИК ТЕРАПИС, ИНК. (US)
(74)Нилова М.И. (RU)
(54)КЛЕТКА И СПОСОБ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОЙ ИДУРОНАТ-2-СУЛЬФАТАЗЫ
   Формула 
(57) 1. Клетка для получения белка идуронат-2-сульфатазы (I2S), содержащая
первую нуклеиновую кислоту, кодирующую белок I2S, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO:1; и
вторую нуклеиновую кислоту, кодирующую белок формилглицинобразующего фермента (FGE), содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO:5,
причем первая и/или вторая нуклеиновые кислоты являются экзогенными, и при этом клетка при культивировании в условиях клеточной культуры вырабатывает белок I2S на уровне, который в 0,3-10 раз выше уровня формилглицинобразующего фермента, вырабатываемого клеткой,
причем по меньшей мере 70% белка I2S имеют остаток цистеина, соответствующий Cys59 из SEQ ID NO:1, преобразованный в Ca-формилглицин (FGly).
2. Клетка по п.1, отличающаяся тем, что по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% белка I2S имеют остаток цистеина, соответствующий Cys59 из SEQ ID NO:1, преобразованный в Ca-формилглицин (FGly).
3. Клетка по любому из пп.1 и 2, отличающаяся тем, что первая или вторая нуклеиновая кислота функционально связана с промотором hCMV.
4. Клетка по любому из пп.1-3, отличающаяся тем, что первая нуклеиновая кислота содержит последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную SEQ ID NO:7.
5. Клетка по любому из пп.1-4, отличающаяся тем, что вторая нуклеиновая кислота содержит последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную SEQ ID NO:8.
6. Клетка по любому из пп.1-5, отличающаяся тем, что как первая, так и вторая нуклеиновые кислоты являются экзогенными.
7. Клетка по любому из пп.1-6, отличающаяся тем, что является клеткой млекопитающего.
8. Клетка по п.7, отличающаяся тем, что является клеткой человека или клеткой СНО.
9. Клетка по любому из пп.1-8, отличающаяся тем, что первая нуклеиновая кислота кодирует белок I2S, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную или полностью идентичную SEQ ID NO:1.
10. Клетка по любому из пп.1-9, отличающаяся тем, что первая нуклеиновая кислота содержит последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную SEQ ID NO:7, и вторая нуклеиновая кислота содержит последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную SEQ ID NO:8.
11. Клетка по любому из пп.1-10, отличающаяся тем, что вторая нуклеиновая кислота кодирует белок FGE, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную или полностью идентичную SEQ ID NO:5.
12. Клетка по любому из пп.1-11, отличающаяся тем, что вырабатывает белок I2S с удельной продуктивностью выше 30 пг/клетку/день.
13. Способ получения рекомбинантного белка I2S, включающий культивирование клетки по любому из пп.1-12 в условиях, обеспечивающих совместную экспрессию белков I2S и FGE в клетке.
14. Способ по п.13, отличающийся тем, что клетку культивируют в биореакторе.
15. Способ по п.14, отличающийся тем, что объем биореактора составляет 10, 200, 500, 1000, 1500 или 2000 л.
16. Способ по любому из пп.13-15, отличающийся тем, что культивирование является перфузионным процессом или процессом, проходящим в роллерном флаконе.
17. Способ по п.13, отличающийся тем, что клетки культивируют в бессывороточной среде.
18. Способ по п.13 или 17, отличающийся тем, что клетки культивируют в суспензии.
19. Способ по любому из пп.13-16, отличающийся тем, что дополнительно включает этап очистки рекомбинантного белка I2S.