Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 035489

   Библиографические данные
(11)035489    (13) B1
(21)201591723

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: C     


Документ опубликован 2020.06.24
Текущий бюллетень: 2020-06  
Все публикации: 035489  
Реестр евразийского патента: 035489  

(22)2014.03.13
(51) C12N 1/08(2006.01)
(43)A1 2016.03.31 Бюллетень № 03  тит.лист, описание 
(45)B1 2020.06.24 Бюллетень № 06  тит.лист, описание  SEQL 
(31)61/794,400; 61/928,080
(32)2013.03.15; 2014.01.16
(33)US; US
(86)US2014/026379
(87)2014/151748 2014.09.25
(71)ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. (NL)
(72)Трухарт Джошуа, Макграс Джессика (US)
(73)ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. (NL)
(74)Бадаева Т.Н., Фелицына С.Б. (RU)
(54)ПРИМЕНЕНИЕ ТЕРМОФИЛЬНЫХ НУКЛЕАЗ ДЛЯ РАЗРУШЕНИЯ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ В КЛЕТКАХ-ХОЗЯЕВАХ
   Формула 
(57) 1. Способ разрушения in vivo и/или in situ нуклеиновых кислот клетки-хозяина, содержащей по меньшей мере один гетерологичный ген термофильной нуклеазы, согласно которому:
a) выращивают клетку-хозяин при температуре, при которой термофильная нуклеаза находится в латентном состоянии; и
b) изменяют температуру для активации термофильной нуклеазы, в результате чего происходит разрушение нуклеиновых кислот клетки-хозяна.
2. Способ по п.1, в котором нуклеаза является нуклеазой, расщепляющей ДНК, и нуклеиновые кислоты являются дезоксирибонуклеиновыми кислотами.
3. Способ по п.2, в котором ДНК клетки-хозяина содержит рекомбинантную ДНК.
4. Способ по любому из пп.1-3, в котором температура на стадии (a) является оптимальной для роста клетки-хозяина.
5. Способ по любому из пп.1-4, в котором разрушение нуклеиновых кислот проводят при температуре в пределах отклонения ±5°C от значения, оптимального для указанной термофильной нуклеазы.
6. Способ по п.1, в котором разрушение нуклеиновых кислот проводят в процессе пастеризации клеток-хозяев.
7. Способ по п.1, в котором разрушение нуклеиновых кислот проводят при температуре в диапазоне от 40 до 100°C.
8. Способ по п.2, в котором нуклеаза, расщепляющая ДНК, является нуклеазой TaqI и разрушение нуклеиновых кислот проводят при температуре в диапазоне от около 60 до около 70°C.
9. Способ по п.2, в котором нуклеаза, расщепляющая ДНК, является нуклеазой PhoI и разрушение нуклеиновых кислот проводят при температуре 75°C или при температуре в диапазоне от около 70 до около 80°C.
10. Способ по любому из пп.1-9, в котором клетка-хозяин является растительной, животной или клеткой микроорганизма.
11. Способ по п.10, в котором микроорганизм выбирают из дрожжей, грибов, водорослей, бактерий и архей, например, родов Yarrowia, Bacillus, Escherichia, Pseudomonas, Paracoccus, Corynebacterium, Candida, Hansenula, Saccharomyces, Mortierella, Schizosaccharomyces, Aspergillus, Fusarium, Trichoderma, Crypthecodinium, Schizochytrium и Thraustochytrium, в частности вида Yarrowia lipolytica.
12. Способ по п.1, в котором клетка-хозяин содержит несколько генов термофильных нуклеаз.
13. Способ по п.3, в котором указанная рекомбинантная ДНК оптимизирована таким образом, что включает дополнительные сайты расщепления термофильной нуклеазой, в частности включает один сайт расщепления нуклеазой на каждые 500 или менее нуклеотидов.
14. Генетически модифицированная клетка, которая продуцирует один или более конечных продуктов, не являющихся термофильной нуклеазой, и которая содержит по меньшей мере один гетерологичный ген термофильной нуклеазы, причем кодируемая данным геном термофильная нуклеаза находится в латентном состоянии при температуре, при которой происходит нормальный рост указанной генетически модифицированной клетки.
15. Клетка по п.14, в которой указанная нуклеаза является нуклеазой, расщепляющей ДНК, например нуклеазой TaqI или нуклеазой PhoI.
16. Клетка по п.14 или 15, которая является растительной, животной или клеткой микроорганизма.
17. Клетка по п.16, в которой микроорганизм выбирают из дрожжей, грибов, водорослей, бактерий и архей, например, родов Yarrowia, Bacillus, Escherichia, Pseudomonas, Paracoccus, Corynebacterium, Candida, Hansenula, Saccharomyces, Mortierella, Schizosaccharomyces, Aspergillus, Fusarium, Trichoderma, Crypthecodinium, Schizochytrium и Thraustochytrium, в частности вида Yarrowia lipolytica.
18. Клетка по п.17, в которой указанный конечный продукт выбирают из фитоена, ликопина, бета-каротина, альфа-каротина, бета-криптоксантина, лютеина, зеаксантина, астаксантина, кантаксантина, эхиненона, 3-гидроксиэхиненона, 3'-гидроксиэхиненона, адонирубина, виолаксантина, адониксантина, убихинона, витамина K, витамина E, ретинола, ретиналя, ретиноевой кислоты, ретинилпальмитата и их модифицированных форм.
19. Клетка по п.14, которая содержит несколько генов термофильной нуклеазы.
20. Применение термофильной нуклеазы для разрушения нуклеиновых кислот клетки-хозяина in vivo и/или in situ, причем термофильная нуклеаза является гетерологичной для клетки-хозяина.
21. Применение по п.20, в котором нуклеаза является нуклеазой, расщепляющей ДНК, и нуклеиновые кислоты являются дезоксирибонуклеиновыми кислотами, в частности рекомбинантными ДНК.
22. Способ получения продукта биомассы, не содержащего активных молекул нуклеиновых кислот и являющегося продуктом клетки-хозяина, которая содержит гетерологичный ген термофильной нуклеазы, согласно которому:
a) выращивают клетку-хозяина при температуре, при которой термофильная нуклеаза находится в латентном состоянии;
b) измененяют температуру для активации термофильной нуклеазы, в результате чего происходит разрушение нуклеиновых кислот клетки-хозяина; и
c) выделяют продукт биомассы.
23. Способ по п.22, в котором нуклеаза является нуклеазой, расщепляющей ДНК, и нуклеиновые кислоты являются дезоксирибонуклеиновыми кислотами, в частности рекомбинантными ДНК.
24. Способ по п.22 или 23, в котором температура на стадии (a) является оптимальной для роста клетки-хозяина.
25. Способ по любому из пп.22-24, в котором разрушение нуклеиновых кислот проводят при температуре в пределах отклонения ±5°C от значения, оптимального для указанной термофильной нуклеазы.
Zoom in