Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 035444

   Библиографические данные
(11)035444    (13) B1
(21)201790360

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: C     


Документ опубликован 2020.06.17
Текущий бюллетень: 2020-06  
Все публикации: 035444  
Реестр евразийского патента: 035444  

(22)2015.08.12
(51) C12N 9/64(2006.01)
(43)A1 2017.06.30 Бюллетень № 06  тит.лист, описание 
(45)B1 2020.06.17 Бюллетень № 06  тит.лист, описание  SEQL 
(31)62/036,438
(32)2014.08.12
(33)US
(86)US2015/044883
(87)2016/025615 2016.02.18
(71)БАКСАЛТА ИНКОРПОРЕЙТЕД (US); БАКСАЛТА ГМБХ (CH)
(72)Бём Эрнст, Хорлинг Франциска, Кён Ядранка, Доккаль Михель (AT)
(73)БАКСАЛТА ИНКОРПОРЕЙТЕД (US); БАКСАЛТА ГМБХ (CH)
(74)Медведев В.Н. (RU)
(54)ПОЛУЧЕНИЕ ПОЛНОСТЬЮ ПРОЦЕССИРОВАННОГО И ФУНКЦИОНАЛЬНОГО ФАКТОРА X В ФУРИН-СЕКРЕТИРУЮЩЕЙ СИСТЕМЕ ЭКСПРЕССИИ МЛЕКОПИТАЮЩЕГО
   Формула 
(57) 1. Трансформированная клетка млекопитающего для получения полностью процессированного фактора X, где трансформированная клетка млекопитающего содержит
первую нуклеотидную последовательность, кодирующую фурин человека, и вторую нуклеотидную последовательность, кодирующую фактор X человека, где трансформированная клетка экспрессирует и секретирует функциональный фурин и фактор X в супернатант культуры, где фурин секретируется в супернатанте культуры в концентрации от 50 до 300 Ед/мл после культивирования в течение от 42 до 78 ч и по меньшей мере 85% фактора X является полностью процессированным.
2. Трансформированная клетка млекопитающего по п.1, где нуклеотидная последовательность, кодирующая фурин человека, и нуклеотидная последовательность, кодирующая белок, находятся в разных экспрессирующих векторах.
3. Трансформированная клетка млекопитающего по п.1, где нуклеотидная последовательность, кодирующая фурин человека, и нуклеотидная последовательность, кодирующая белок, находятся в одном экспрессирующем векторе.
4. Трансформированная клетка млекопитающего по п.1, где функциональный фурин секретируется в супернатанте культуры в концентрации по меньшей мере от 50 до 60 Ед/мл после культивирования в течение от 42 до 78 ч.
5. Трансформированная клетка млекопитающего по п.4, где по меньшей мере 90% фактора X, продуцируемого трансформированной клеткой, является полностью процессированным.
6. Трансформированная клетка млекопитающего по п.1, где функциональный фурин секретируется в супернатанте культуры в концентрации по меньшей мере от 90 до 100 Ед/мл после культивирования в течение от 42 до 78 ч.
7. Трансформированная клетка млекопитающего по п.6, где по меньшей мере 95% фактора X, продуцируемого трансформированной клеткой, является полностью процессированным.
8. Трансформированная клетка млекопитающего по любому из пп.1-7, где клеткой млекопитающего является клетка яичника китайского хомяка (CHO), эмбриональная клетка почки человека, клетка почки примата, фибробласт и миеломная клетка мыши.
9. Эукариотическая система экспрессии белка для получения полностью процессированного фактора X, содержащая
линию клеток млекопитающего, подходящую для экспрессии белков млекопитающего;
первый экспрессирующий вектор, который экспрессирует фурин человека в линии клеток, где первый экспрессирующий вектор включает нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид фурина человека; и
второй экспрессирующий вектор, который экспрессирует фактор X в линии клеток, где второй экспрессирующий вектор включает нуклеотидную последовательность, кодирующую фактор X,
где линия клеток способна секретировать функциональный фурин в супернатант культуры в концентрации от 50 до 300 Ед/мл после культивирования в течение от 42 до 78 ч и по меньшей мере 85% фактора X является полностью процессированным.
10. Эукариотическая система экспрессии белка по п.9, где линия клеток млекопитающего способна секретировать функциональный фурин в супернатант культуры в концентрации по меньшей мере от 50 до 60 Ед/мл после культивирования в течение от 42 до 78 ч.
11. Эукариотическая система экспрессии белка по п.10, где по меньшей мере 90% фактора X, продуцируемого системой экспрессии, является полностью процессированным.
12. Эукариотическая система экспрессии белка по п.9, где линия клеток млекопитающего способна секретировать функциональный фурин в супернатант культуры в концентрации по меньшей мере от 90 до 100 Ед/мл после культивирования в течение от 42 до 78 ч.
13. Эукариотическая система экспрессии белка по п.12, где по меньшей мере 95% фактора X, продуцируемого системой экспрессии, является полностью процессированным.
14. Эукариотическая система экспрессии белка для получения полностью процессированного фактора X, содержащая
линию клеток млекопитающего, подходящую для экспрессии белков млекопитающего;
экспрессирующий вектор, который экспрессирует фурин человека и фактор X, где экспрессирующий вектор включает первую нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид фурина человека, и вторую нуклеотидную последовательность, кодирующую фактор X, где линия клеток способна секретировать функциональный фурин в супернатант культуры в концентрации от 50 до 300 Ед/мл после культивирования в течение от 42 до 78 ч и по меньшей мере 85% фактора X является полностью процессированным.
15. Эукариотическая система экспрессии белка по п.14, где линия клеток млекопитающего способна секретировать функциональный фурин в супернатант культуры в концентрации по меньшей мере от 50 до 60 Ед/мл после культивирования в течение от 42 до 78 ч.
16. Эукариотическая система экспрессии белка по п.15, где по меньшей мере 90% фактора X, продуцируемого системой экспрессии, является полностью процессированным.
17. Эукариотическая система экспрессии белка по п.14, где линия клеток млекопитающего способна секретировать функциональный фурин в супернатант культуры в концентрации по меньшей мере от 90 до 100 Ед/мл после культивирования в течение от 42 до 78 ч.
18. Эукариотическая система экспрессии белка по п.17, где по меньшей мере 95% фактора X, продуцируемого системой экспрессии, является полностью процессированным.
19. Эукариотическая система экспрессии белка по любому из пп.9-18, где клеткой млекопитающего является клетка яичника китайского хомяка (CHO), эмбриональная клетка почки человека, клетка почки примата, фибробласт и миеломная клетка мыши.
20. Способ получения трансформированной клетки млекопитающего по п.1, включающий
трансфекцию линии клеток млекопитающего, подходящей для экспрессии белков млекопитающего, с использованием первого экспрессирующего вектора, который экспрессирует фурин человека в линии клеток, где первый экспрессирующий вектор включает нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид фурина человека;
трансфекцию линии клеток млекопитающего с использованием второго экспрессирующего вектора, который экспрессирует фактор X в линии клеток, где второй экспрессирующий вектор включает нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид фактора X;
получение клетки млекопитающего, трансфицированной с использованием первого и второго экспрессирующих векторов, экспрессирующих и секретирующих функциональный фурин человека в супернатанте культуры в концентрации от 50 до 300 Ед/мл после культивирования в течение от 42 до 78 ч.
21. Способ по п.20, где линию клеток млекопитающего трансфицируют с использованием первого экспрессирующего вектора и второго экспрессирующего вектора одновременно.
22. Способ по п.20, где линию клеток млекопитающего трансфицируют с использованием первого экспрессирующего вектора до трансфекции клеток с использованием второго экспрессирующего вектора.
23. Способ по п.20, где линию клеток млекопитающего трансфицируют с использованием первого экспрессирующего вектора после трансфекции клеток с использованием второго экспрессирующего вектора.
24. Способ получения зрелого, полностью процессированного FX, включающий культивирование трансформированной клетки млекопитающего по любому из пп.1-8 в культуральной среде и выделение зрелого, полностью процессированного FX из культуральной среды.