Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 035360

   Библиографические данные
(11)035360    (13) B1
(21)201791508

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: A     


Документ опубликован 2020.06.02
Текущий бюллетень: 2020-06  
Все публикации: 035360  
Реестр евразийского патента: 035360  

(22)2015.12.30
(51) A61K 48/00 (2006.01)
C12N 15/09 (2006.01)
C12N 15/861 (2006.01)
C12N 5/10 (2006.01)
A61P 3/10 (2006.01)
A61P 5/48 (2006.01)
C12N 15/63(2006.01)
(43)A1 2018.05.31 Бюллетень № 05  тит.лист, описание 
(45)B1 2020.06.02 Бюллетень № 06  тит.лист, описание  последовательности 
(31)62/098,050
(32)2014.12.30
(33)US
(86)IL2015/051267
(87)2016/108237 2016.07.07
(71)ОРДЖЕНИСИС ЛТД.; ТЕЛ ХАШОМЕР МЕДИКАЛ РИСЕРЧ, ИНФРАСТРАКЧЕ ЭНД СЕРВИСИЗ ЛТД (IL)
(72)Фербер Сара (IL)
(73)ОРДЖЕНИСИС ЛТД.; ТЕЛ ХАШОМЕР МЕДИКАЛ РИСЕРЧ, ИНФРАСТРАКЧЕ ЭНД СЕРВИСИЗ ЛТД (IL)
(74)Медведев В.Н. (RU)
(54)СПОСОБЫ ТРАНСДИФФЕРЕНЦИРОВКИ И СПОСОБЫ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
   Формула 
(57) 1. Способ получения популяции клеток человека, продуцирующих человеческий инсулин, причем способ включает этапы:
(a) получение ткани взрослого человека;
(b) обработка указанной ткани для извлечения первичных клеток взрослого человека;
(c) культивирование указанных первичных клеток взрослого человека;
(d) трансдифференцировка указанных культивированных клеток, где указанная трансдифференцировка содержит:
(1) инфицирование указанных культивированных клеток по меньшей мере одним вектором экспрессии,
(i) причем указанный по меньшей мере один вектор экспрессии содержит аденовирусный вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид PDX-1, и аденовирусный вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид второго панкреатического фактора транскрипции, причем указанное инфицирование указанными аденовирусными векторами происходит в одно и то же время, или
(ii) причем указанный по меньшей мере один вектор экспрессии содержит аденовирусный вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид PDX-1 человека и полипептид второго панкреатического фактора транскрипции; и
(2) инфицирование указанных культивированных инфицированных клеток, полученных на этапе (1), аденовирусным вектором, содержащим нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид MafA; и
(e) сбор указанных трансдифференцированных клеток;
таким образом позволяя производить указанную популяцию клеток, продуцирующих человеческий инсулин, причем указанные клетки взрослого человека не проходят стадию, на которой указанные клетки имеют эмбриональные маркеры, причем указанные клетки, продуцирующие человеческий инсулин, обеспечивают непродолжительную эктопическую экспрессию факторов транскрипции PDX-1, NeuroDl и MafA после инфицирования; экспрессию и продуцирование глюкагона, повышенное содержание инсулина; повышенную секрецию инсулина, регулируемую глюкозой; повышенную секрецию C-пептида; или повышенное содержание эндогенного фактора транскрипции Nkx6.1; или любую их комбинацию, по сравнению с контрольными нетрансдифференцированными первичными клетками взрослого человека, и причем указанные клетки, продуцирующие человеческий инсулин, не экспрессируют эмбриональные маркеры.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанные клетки культивируют в биореакторе.
3. Способ по любому из пп.1, 2, отличающийся тем, что на этапе (a) указанная ткань человека содержит:
a) ткань, полученную от субъекта, страдающего нарушением со стороны панкреатической железы или инсулинзависимым диабетом; или
b) ткань печени, жировую ткань, костный мозг, кожу, плаценту, пуповину, вартоновый студень или пуповинную кровь;
или любую их комбинацию.
4. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что первичные клетки человека содержат эндотелиальные клетки, эпителиальные клетки, фибробласты, клетки печени, клетки костного мозга, мышечные клетки, клетки селезенки, почечные клетки, клетки крови, клетки кожи, клетки поджелудочной железы, перицентральные клетки печени, непанкреатические клетки, непанкреатические бета клетки, гепатоциты, гемопоэтические стволовые клетки, печеночные стволовые клетки, мезенхимальные стволовые клетки, мезенхимальные стволовые клетки, полученные из жировой ткани, плацентарные стволовые клетки, нейронные стволовые клетки или эмбриональные клетки печени.
5. Способ по любому из пп.2-4, отличающийся тем, что указанная биореакторная система содержит один биореактор или несколько биореакторов.
6. Способ по любому из пп.2-5, где указанный биореактор включает одноразовый биореактор, многоразовый биореактор, биореактор с замкнутой системой или биореактор с открытой системой или любую их комбинацию.
7. Способ по любому из пп.2-6, отличающийся тем, что этап (d) осуществляют в системе биореакторов.
8. Способ по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что указанный второй панкреатический фактор транскрипции выбран из NeuroDl и Pax4.
9. Способ по любому из пп.1-8, дополнительно включающий этап обогащения указанных первичных клеток взрослого человека для клеток, предрасположенных к трансдифференцировке, причем указанный этап обогащения выполняют до проведения этапа указанной трансдифференцировки или параллельно с указанной трансдифференцировкой.
10. Способ по п.9, отличающийся тем, что указанные предрасположенные клетки включают:
(a) активный Wnt-сигнальный путь;
(b) способность активации элемента ответа глютаминсинтетазы (GSRE);
(c) увеличенную экспрессию HOMER1 (homer scaffolding protein 1), LAMP3 (lysosomal associated membrane protein 3), ITGA6 (integrin subunit alpha 6), DCBLD2 (Discodin, CUB and LCCL Domain Contai-ning 2), THBS1 (Thrombospondin 1), VAMP4 (Vesicle Associated Membrane Protein 4) или BMPR2 (bone morphogenetic protein receptor type 2) или любой их комбинации, когда указанные клетки содержат клетки печени;
(d) уменьшенную экспрессию ABCB1 (ATP binding cassette subfamily В member 1), ITGA4 (integrin subunit alpha 4), ABCB4 (ATP binding cassette subfamily В member 4) или PRNP (prion protein) или любой их комбинации, когда указанные клетки содержат клетки печени; или любую их комбинацию.
11. Способ по любому из пп.1-10, дополнительно включающий этап усиления активации Wnt-сигнального пути в указанных первичных клетках.
12. Способ по п.11, отличающийся тем, что указанная индукция включает инкубацию указанных первичных клеток взрослого человека с литием.
13. Способ по любому из пп.1-12, отличающийся тем, что заданное количество клеток составляет примерно 1-2 млрд клеток.
14. Способ по любому из пп.1-13, отличающийся тем, что по меньшей мере 90% указанной популяции культивированных клеток экспрессируют CD73, CD90, CD105 или CD44 или любую их комбинацию до этапа (d).
Zoom in