Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 035340

   Библиографические данные
(11)035340    (13) B1
(21)201790241

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: C     


Документ опубликован 2020.05.29
Текущий бюллетень: 2020-05  
Все публикации: 035340  
Реестр евразийского патента: 035340  

(22)2015.08.19
(51) C12P 21/06 (2006.01)
C12N 15/00 (2006.01)
C12N 5/07 (2010.01)
C12N 5/10 (2006.01)
C12N 5/02 (2006.01)
C12N 9/12(2006.01)
(43)A1 2017.06.30 Бюллетень № 06  тит.лист, описание 
(45)B1 2020.05.29 Бюллетень № 05  тит.лист, описание  последовательности 
(31)62/039,416
(32)2014.08.19
(33)US
(86)US2015/045793
(87)2016/028838 2016.02.25
(71)РЕГЕНЕРОН ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК. (US)
(72)Дэшпанде Дипали, Бураков Дарья, Чэнь Ган, Фандл Джэймс (US)
(73)РЕГЕНЕРОН ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК. (US)
(74)Карпенко О.Ю., Лыу Т.Н., Угрюмов В.М., Дементьев В.Н., Глухарёва А.О., Клюкин В.А., Строкова О.В., Христофоров А.А. (RU)
(54)ЭФФЕКТИВНАЯ СЕЛЕКТИВНОСТЬ В ОТНОШЕНИИ РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ
   Формула 
(57) 1. Выделенная клетка млекопитающего для получения представляющего интерес рекомбинантного белка (POI), содержащая ген млекопитающего, придающий устойчивость к туникамицину (Tn), кодирующий белок, который характеризуется по меньшей мере 93% идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 3, функционально связанный с представляющим интерес первым геном (GOI), кодирующим первый POI, и по меньшей мере одним регуляторным элементом.
2. Выделенная клетка по п.1, где ген, придающий устойчивость к Tn, экзогенно добавлен в клетку.
3. Выделенная клетка по п.1 или 2, где ген, придающий устойчивость к Tn, содержит последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 и SEQ ID NO: 17.
4. Выделенная клетка по п.1, где по меньшей мере один регуляторный элемент выбран из группы, состоящей из промотора, сайта связывания рибосомы и энхансера.
5. Выделенная клетка по п.1, дополнительно содержащая второй GOI, кодирующий второй POI.
6. Выделенная клетка по п.1 или 5, где первый GOI выбран из группы, состоящей из гена, кодирующего легкую цепь антитела или ее антиген-специфический фрагмент, тяжелую цепь антитела или ее антиген-специфический фрагмент, слитый белок, содержащий Fc-фрагмент, или его фрагмента и рецептора или его лиганд-специфического фрагмента.
7. Выделенная клетка по п.5, где второй GOI выбран из группы, состоящей из гена, кодирующего легкую цепь антитела или ее антиген-специфический фрагмент, тяжелую цепь антитела или ее антиген-специфический фрагмент, слитый белок, содержащий Fc-фрагмент, или его фрагмента и рецептора или его лиганд-специфического фрагмента.
8. Выделенная клетка по п.5, дополнительно содержащая сайт распознавания для рекомбиназы между первым GOI и вторым GOI.
9. Выделенная клетка по п.5, дополнительно содержащая сайт распознавания для рекомбиназы, расположенный в направлении 5' от первого GOI, и сайт распознавания для рекомбиназы в направлении 3' от второго GOI.
10. Выделенная клетка по п.1, где клетка выбрана из группы, состоящей из CHO-K1, COS-7, HEK293, опухолевой клетки, лимфоцита, клетки сетчатки и стволовой клетки.
11. Способ получения представляющего интерес рекомбинантного белка (POI), где способ включает:
a) обеспечение клетки млекопитающего по п.1;
b) культивирование клетки в присутствии первой концентрации Tn;
c) выделение клеточной популяции, экспрессирующей по меньшей мере одну копию гена, придающего устойчивость к Tn;
d) культивирование клеточной популяции в присутствии второй концентрации Tn, где вторая концентрация Tn превышает первую концентрацию Tn; и
e) выделение первого POI из культуры клеток.
12. Способ по п.11, где ген млекопитающего, придающий устойчивость к Tn, содержит последовательность нуклеиновой кислоты, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 2.
13. Способ по п.11, где ген млекопитающего, придающий устойчивость к Tn, содержит ген китайского хомячка (Cricetulus griseus), придающий устойчивость к Tn.
14. Способ по п.12, где ген млекопитающего, придающий устойчивость к Tn, содержит последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 и SEQ ID NO: 17.
15. Способ по п.11, где по меньшей мере один регуляторный элемент выбран из группы, состоящей из промотора, сайта связывания рибосомы и энхансера.
16. Способ по п.11, где клетка дополнительно содержит второй ген, кодирующий второй POI.
17. Способ по п.11, где первый POI выбран из группы, состоящей из легкой цепи антитела или ее антиген-специфического фрагмента, тяжелой цепи антитела или ее антиген-специфического фрагмента, слитого белка, содержащего Fc-фрагмент, или его фрагмента и рецептора или его лиганд-специфического фрагмента.
18. Способ по п.16, где второй POI выбран из группы, состоящей из легкой цепи антитела или ее антиген-специфического фрагмента, тяжелой цепи антитела или ее антиген-специфического фрагмента, слитого белка, содержащего Fc-фрагмент, или его фрагмента и рецептора или его лиганд-специфического фрагмента.
19. Способ по п.11, где первая концентрация Tn составляет 1 мкг/мл.
20. Способ по п.11, дополнительно включающий после стадии d) и до стадии е) культивирование клеточной популяции в присутствии третьей концентрации Tn, где третья концентрация Tn превышает вторую концентрацию Tn.
21. Способ по п.20, где вторая концентрация Tn составляет 2,5 мкг/мл, и третья концентрация составляет 5 мкг/мл.
22. Способ по п.12, где первый POI, выделенный из культуры клеток, содержит N-гликан.
Zoom in