Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 035163

   Библиографические данные
(11)035163    (13) B1
(21)201600026

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: C     


Документ опубликован 2020.05.08
Текущий бюллетень: 2020-05  
Все публикации: 035163  
Реестр евразийского патента: 035163  

(22)2014.06.13
(51) C07K 14/315 (2006.01)
C12N 9/26(2006.01)
(43)A1 2016.08.31 Бюллетень № 08  тит.лист, описание 
(45)B1 2020.05.08 Бюллетень № 05  тит.лист, описание  SEQL 
(31)MI2013A000992
(32)2013.06.17
(33)IT
(86)IB2014/062193
(87)2014/203133 2014.12.24
(71)ФИДИА ФАРМАЧЕУТИЧИ С.П.А. (IT)
(72)Мессина Лучиано, Музумечи Лука, Ваккаро Сюзанна (IT)
(73)ФИДИА ФАРМАЧЕУТИЧИ С.П.А. (IT)
(74)Бадаева Т.Н., Агуреев А.П., Фомичева Т.С., Фелицына С.Б. (RU)
(54)ПРЕПАРАТ ОЧИЩЕННОЙ РЕКОМБИНАНТНОЙ ГИАЛУРОНИДАЗЫ, СПОСОБ ЕГО ПРОИЗВОДСТВА И СОДЕРЖАЩИЕ ЕГО КОМПОЗИЦИИ
   Формула 
(57) 1. Препарат очищенной рекомбинантной гиалуронидазы Streptomyces koganeiensis ATCC 31394, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21, причем препарат содержит эндотоксин в количестве менее 0,5 ед./мг.
2. Способ получения препарата очищенной рекомбинантной гиалуронидазы Streptomyces koganeiensis ATCC 31394 по п.1, включающий следующие стадии:
a) засевают среду бактериальной культуры в биореакторе инокулятом рекомбинантных клеток, выбранных из клеток Escherichia coli и клеток Bacillus subtilis, которые трансформированы по меньшей мере одним вектором, содержащим кДНК последовательности SEQ ID NO: 41, кодирующую указанную в п.1 гиалуронидазу;
b) ферментируют содержимое биореактора при pH от 6,7 до 7,1 в присутствии питательного раствора;
c) добавляют индуктор лактозных генов в биореактор и инкубируют смесь в течение периода от 8 до 24 ч;
d) центрифугируют полученную суспензию бактериальных клеток и удаляют надосадочную жидкость, тем самым извлекая осадок, состоящий из указанных бактериальных клеток;
e) суспендируют полученный осадок и подвергают полученную суспензию осмотическому удару;
f) экстрагируют периплазматические белки из суспензии путем центрифугирования и выделяют белковую фракцию с ферментативной активностью гиалуронидазы;
g) очищают фракцию белка с ферментативной активностью гиалуронидазы с помощью методов, осуществляемых последовательно:
(i) сильной ионообменной хроматографии;
(ii) слабой катионообменной хроматографии и
(iii) хроматографии ароматического гидрофобного взаимодействия.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что в качестве питательного раствора на стадии b) используют раствор глицерина.
4. Полинуклеотид, содержащий последовательность нуклеотидов SEQ ID NO: 17, кодирующую рекомбинантную гиалуронидазу, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21.
5. Рекомбинантный вектор, содержащий полинуклеотид по п.4.
6. Вектор по п.5, представляющий собой плазмиду.
7. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п.5 или 6.
8. Фармацевтическая композиция, содержащая рекомбинантную гиалуронидазу, охарактеризованную в п.1, как единственный активный ингредиент или в сочетании с другим активным веществом, для лечения и/или предотвращения заболевания или нарушения, выбранного, по меньшей мере, из отеков, воспалительных состояний, обморожения, твердых опухолей, аллергических реакций, опосредованных IgE, заболеваний ротовой полости, внезапных кровоизлияний в стекловидное тело, артериосклероза, нарушений кровяного давления, сердечно-сосудистых заболеваний и нарушений мозгового кровообращения, таких как стеноз мозговых артерий или инсульт, или коровьего мастита.
9. Косметическая композиция, содержащая рекомбинантную гиалуронидазу, охарактеризованную в п.1, как единственный активный ингредиент или в сочетании с другим активным веществом, для эстетического улучшения внешнего вида у людей, пораженных целлюлитом или с небольшим количеством жировой массы.