Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 035117

   Библиографические данные
(11)035117    (13) B1
(21)201791118

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: C     


Документ опубликован 2020.04.29
Текущий бюллетень: 2020-04  
Все публикации: 035117  
Реестр евразийского патента: 035117  

(22)2015.11.17
(51) C07K 14/34 (2006.01)
C12N 15/10 (2006.01)
C12N 15/70(2006.01)
(43)A1 2017.10.31 Бюллетень № 10  тит.лист, описание 
(45)B1 2020.04.29 Бюллетень № 04  тит.лист, описание  последовательности 
(31)4045/CHE/2014
(32)2014.11.20
(33)IN
(86)IN2015/000427
(87)2016/079755 2016.05.26
(71)БАЙОЛОДЖИКАЛ И ЛИМИТЕД (IN)
(72)Акшай Гоэл, Рави Пратар Нараян Мишра, Нарендер Дев Мантена, Махима Датла (IN)
(73)БАЙОЛОДЖИКАЛ И ЛИМИТЕД (IN)
(74)Медведев В.Н. (RU)
(54)КОДОН-ОПТИМИЗИРОВАННЫЙ ПОЛИНУКЛЕОТИД ДЛЯ ЭКСПРЕССИИ CRM197 НА ВЫСОКОМ УРОВНЕ
   Формула 
(57) 1. Оптимизированная полинуклеотидная последовательность, кодирующая Cross Reacting Material 197 (CRM197), содержащая SEQ ID NO: 2, и ее варианты, которые по меньшей мере на 88% гомологичны указанной оптимизированной полинуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 2.
2. Варианты SEQ ID NO: 2 по п.1, выбранные из SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 8 и 9.
3. Способ получения CRM197, включающий стадии:
a) выбора оптимизированной полинуклеотидной последовательности, кодирующей CRM197, по существу состоящей из SEQ ID NO: 2, или ее вариантов, которые по меньшей мере на 88% гомологичны SEQ ID NO: 2,
b) лигирования полинуклеотидных последовательностей стадии (а) в подходящий вектор,
c) встраивания или трансформации полинуклеотидной последовательности в клетку-хозяина Escherichia coli,
d) культивирования трансформированной клетки в культуральной среде для экспресии CRM197 на высоком уровне,
e) поддержания индуцирующей температуры между 10 и 40°С для продукции CRM197,
f) экстракции CRM197 из клетки-хозяина с последующей очисткой для получения чистого CRM197 с высоким выходом.
4. Способ по п.3, в котором подходящий вектор представляет собой плазмидный вектор, выбранный из pET9а, pET3a, pET3b, pET3c, pET5а, pET5b, pET5c, pET9b, pET9c, pET12a, pTWIN1, pTWIN2, pET12b, pET12c, pET17b.
5. Способ по п.3, в котором штамм Escherichia coli выбран из BL21 (DE3), BL21 A1, HMS174 (DE3), DH5a, W3110, В834, origami, Rosetta, NovaBlue (DE3), Lemo21 (DE3), T7, ER2566 и С43 (DE3).
6. Способ по п.3, в котором выход CRM197 составляет приблизительно 0,1 г/л, 0,25 г/л, 0,5 г/л, приблизительно 1 г/л, приблизительно 1,5 г/л, приблизительно 2 г/л, приблизительно 2,5 г/л, приблизительно 3 г/л, приблизительно 3,5 г/л, приблизительно 4 г/л, приблизительно 4,5 г/л, приблизительно 4,5 г/л, приблизительно 5 г/л.
7. Способ по п.3, в котором периплазматической экспрессии достигают путем обеспечения подходящей температуры индукции экспрессии полинуклеотида без какой-либо гетерологичной последовательности для направленного транспорта в периплазматическое пространство.
8. Способ по п.7, в котором температура индукции находится в диапазоне от 10 до 40°С.
9. Способ по п.6, в котором указанный CRM197 конъюгирован с полисахаридными молекулами, выделенными из Salmonella typhi, Salmonella paratyphi, Pneumococcus, Haemophilus influenzae, Meningococcus, Streptococcus pneumoniae и других патогенных бактерий.
10. Способ по п.6, в котором указанный CRM197 используют в качестве конъюгированного носителя для вакцин, таких как вакцины против Salmonella typhi, Salmonella paratyphi, Pneumococcus, Haemophilus influenzae, Meningococcus, Streptococcus pneumoniae и других патогенных бактерий.