Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 035066

   Библиографические данные
(11)035066    (13) B1
(21)201390080

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: C     


Документ опубликован 2020.04.23
Текущий бюллетень: 2020-04  
Все публикации: 035066  
Реестр евразийского патента: 035066  

(22)2011.07.08
(51) C07K 14/755 (2006.01)
C12N 5/00 (2006.01)
A61K 38/36 (2006.01)
C12N 5/10(2006.01)
(43)A1 2013.06.28 Бюллетень № 06  тит.лист, описание 
(45)B1 2020.04.23 Бюллетень № 04  тит.лист, описание 
(31)61/362,635
(32)2010.07.08
(33)US
(86)US2011/043455
(87)2012/006591 2012.01.12
(71)БАКСАЛТА ИНКОРПОРЕЙТИД (US); БАКСАЛТА ГМБХ (CH)
(72)Грилльбергер Леопольд, Райтер Манфред, Мундт Вольфганг (AT)
(73)ТАКЕДА ФАРМАСЬЮТИКАЛ КОМПАНИ ЛИМИТЕД (JP)
(74)Медведев В.Н. (RU)
(54)СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ КЛЕТОК МЛЕКОПИТАЮЩЕГО, СОДЕРЖАЩЕЙ ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНЫЙ РЕКОМБИНАНТНЫЙ ФАКТОР ФОН ВИЛЛЕБРАНДА (rVWF)
   Формула 
(57) 1. Способ получения культуральной жидкости клеток млекопитающего, содержащей высокомолекулярный рекомбинантный фактор фон Виллебранда (rVWF), отличающийся тем, что указанный способ включает этапы:
a) обеспечения основной среды для культивирования клеток;
b) добавления в указанную основную среду соли меди до конечной концентрации меди от 2,4 до 20 мкг/л;
c) обеспечения клеток млекопитающего, содержащих нуклеиновую кислоту, кодирующую rVWF;
d) непрерывного культивирования указанных клеток в среде, полученной на этапе b), в результате чего происходит экспрессия и секретирование rVWF указанными клетками в культуральную жидкость, причем концентрацию NH4+ в указанной культуральной жидкости поддерживают на уровне ниже 4 мМ, а плотность клеток поддерживают на уровне менее чем 2,5´106 клеток/мл на протяжении всего этапа культивирования; и
e) выделения по меньшей мере части указанной культуральной жидкости клеток, причем указанная выделенная культуральная жидкость клеток имеет удельную ристоцетин-кофакторную активность rVWF, составляющую по меньшей мере 30 мЕ/мкг rVWF.
2. Способ по п.1, дополнительно включающий добавление растительного гидролизата в основную среду на этапе а).
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что указанный гидролизат представляет собой соевый гидролизат.
4. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что указанная основная среда представляет собой не содержащую животных белков культуральную среду.
5. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что указанная основная среда представляет собой не содержащую белков культуральную среду.
6. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что указанная основная среда представляет собой культуральную среду с заданным химическим составом.
7. Способ по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что конечная концентрация меди в основной среде составляет по меньшей мере 4 мкг/л.
8. Способ по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что конечная концентрация меди в основной среде составляет от 2,4 до 6 мкг/л меди.
9. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что клетки млекопитающего представляют собой клетки CHO.
10. Способ по п.1, отличающийся тем, что непрерывное культивирование клеток осуществляют в хемостатическом режиме или в режиме перфузии.
11. Способ по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что клетки культивируют по меньшей мере в 100 л среды, полученной на этапе b).
12. Способ по любому из пп.1-11, отличающийся тем, что плотность клеток поддерживают на уровне менее чем 2,0´106 клеток/мл на протяжении всего этапа культивирования.
13. Способ по любому из пп.1-11, отличающийся тем, что плотность клеток поддерживают на уровне менее чем 1,5´106 клеток/мл на протяжении всего этапа культивирования.
14. Способ по любому из пп.1-11, отличающийся тем, что отделенная культуральная жидкость имеет удельную ристоцетин-кофакторную активность rVWF, составляющую по меньшей мере 40 мЕ/мкг rVWF.
15. Способ по любому из пп.1-11, отличающийся тем, что отделенная культуральная жидкость имеет удельную ристоцетин-кофакторную активность rVWF, составляющую по меньшей мере 50 мЕ/мкг rVWF.
16. Способ по любому из пп.1-11, отличающийся тем, что отделенная культуральная жидкость имеет удельную ристоцетин-кофакторную активность rVWF, составляющую по меньшей мере 60 мЕ/мкг rVWF.
17. Способ по любому из пп.1-11, отличающийся тем, что отделенная культуральная жидкость имеет удельную ристоцетин-кофакторную активность rVWF, составляющую по меньшей мере 70 мЕ/мкг rVWF.
18. Способ по любому из пп.1-11, отличающийся тем, что отделенная культуральная жидкость имеет удельную ристоцетин-кофакторную активность rVWF, составляющую по меньшей мере 80 мЕ/мкг rVWF.
19. Способ по любому из пп.1-14, отличающийся тем, что культуральная жидкость содержит по меньшей мере 30% высокомолекулярных мультимеров VWF, состоящих более чем из 10 димеров, или содержит высокомолекулярные мультимеры VWF, состоящие из 14-22 димеров.
20. Способ по любому из пп.1-19, отличающийся тем, что rVWF соэкспрессируется с рекомбинантным фактором VIII (rFVIII).
21. Способ по п.20, дополнительно включающий этап очистки rVWF по меньшей мере от 50% rFVIII, присутствующего в отделенной культуральной жидкости.
22. Способ по п.21, отличающийся тем, что отношение rVWF к rFVIII после очистки составляет по меньшей мере 10:1.
23. Способ по любому из пп.1-22, где указанная соль меди выбрана из сульфата меди, ацетата меди, карбоната меди, хлорида меди, гидроксида меди, нитрата меди и оксида меди.
24. Способ по п.23, где указанная соль меди представляет собой CuSO4×5H2O.
25. Культуральная жидкость клеток млекопитающего, содержащая rVWF и обладающая удельной ристоцетин-кофакторной активностью rVWF, составляющей по меньшей мере 30 мЕ/мкг rVWF, которая получена способом по любому из предыдущих пунктов.
26. Культуральная жидкость по п.25, отличающаяся тем, что содержит рекомбинантный фактор VIII (rFVIII).
27. Культуральная жидкость по п.26 в форме для фармацевтического введения.
Zoom in