Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 035050

   Библиографические данные
(11)035050    (13) B1
(21)201491569

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: C     


Документ опубликован 2020.04.22
Текущий бюллетень: 2020-04  
Все публикации: 035050  
Реестр евразийского патента: 035050  

(22)2013.02.22
(51) C07K 16/00(2006.01)
(43)A1 2015.01.30 Бюллетень № 01  тит.лист, описание 
(45)B1 2020.04.22 Бюллетень № 04  тит.лист, описание  последовательности 
(31)1203051.6
(32)2012.02.22
(33)GB
(86)EP2013/053614
(87)2013/124450 2013.08.29
(71)ЮСБ ФАРМА С.А. (BE)
(72)Хамфриз Дэвид Пол, Питерс Ширли Джейн (GB)
(73)ЮСБ БИОФАРМА СРЛ (BE)
(74)Медведев В.Н. (RU)
(54)СИММЕТРИЧНОЕ БИСПЕЦИФИЧЕСКОЕ АНТИТЕЛО IgG4 С УЛУЧШЕННОЙ СТАБИЛЬНОСТЬЮ
   Формула 
(57) 1. Выделенное симметричное биспецифическое антитело класса IgG4 с улучшенной стабильностью по сравнению с диким типом антитела IgG4, содержащее две тяжелых цепи, каждая из которых содержит вариабельный домен, домен CH1 и шарнирную область, где в каждой тяжелой цепи
цистеин в домене CH1, образующий межцепочечную дисульфидную связь с цистеином в легкой цепи, заменен на аминокислоту, не содержащую тиольную группу; и
одна или несколько аминокислот, расположенных в верхней шарнирной области, заменены на цистеин, где последовательности константной области каждой тяжелой цепи идентичны по меньшей мере на 95%, а вариабельные области в каждой тяжелой цепи различаются, и
где одна или более аминокислот, расположенных в верхней шарнирной области первой тяжелой цепи, замененных на цистеин, находятся в положениях, выбранных из 226, 227, 228, 229, 230, 237 и 238, при нумерации по системе нумерации Kabat.
2. Симметричное биспецифическое антитело по п.1, где шарнирная область представляет собой шарнирную область типа IgG1.
3. Симметричное биспецифическое антитело по п.1 или 2, где межцепочечный цистеин в положении 127 при нумерации по системе нумерации Kabat в домене CH1 в одной или обеих тяжелых цепях заменен на аминокислоту, не содержащую тиольную группу.
4. Симметричное биспецифическое антитело по любому из пп.1-3, где одна или несколько аминокислот, расположенных в верхней шарнирной области первой тяжелой цепи, замененных на цистеин, находятся в положениях, выбранных из 227, 228, 229 и 230 при нумерации по системе нумерации Kabat.
5. Симметричное биспецифическое антитело по п.4, где глицин в положении 230 при нумерации по системе нумерации Kabat заменен на цистеин.
6. Симметричное биспецифическое антитело по п.4, где тирозин в положении 229 при нумерации по системе нумерации Kabat заменен на цистеин.
7. Симметричное биспецифическое антитело по п.4, где лизин в положении 228 при нумерации по системе нумерации Kabat заменен на цистеин.
8. Симметричное биспецифическое антитело по п.4, где серин в положении 227 при нумерации по системе нумерации Kabat заменен на цистеин.
9. Симметричное биспецифическое антитело по любому из пп.1-8, где цистеин в положении 239 и цистеин в положении 242 при нумерации по системе нумерации Kabat в одной или обеих тяжелых цепях заменен/заменены на аминокислоту, не содержащую тиольную группу.
10. Симметричное биспецифическое антитело по любому из пп.1-9, где цистеин в положении 239 при нумерации по системе нумерации Kabat в первой тяжелой цепи заменен на аминокислоту, не содержащую тиольную группу.
11. Симметричное биспецифическое антитело по любому из пп.1-10, где цистеин в положении 242 при нумерации по системе нумерации Kabat в первой тяжелой цепи заменен на аминокислоту, не содержащую тиольную группу.
12. Симметричное биспецифическое антитело по пп.1-11, где аминокислотой, не содержащей тиольную группу, является серин.
13. Симметричное биспецифическое антитело по любому из предшествующих пунктов, где три аминокислоты вставлены в одну или обе тяжелых цепи между аминокислотами 226-243 при нумерации по системе нумерации Kabat.
14. Симметричное биспецифическое антитело по п.13, где три аминокислоты встроены в одну или обе тяжелых цепи между положениями 238 и 239 при нумерации по системе нумерации Kabat.
15. Симметричное биспецифическое антитело по п.14, где три остатка аланина встроены между положениями 238 и 239 первой тяжелой цепи при нумерации по системе нумерации Kabat.
16. Симметричное биспецифическое антитело по п.14, где треонин, гистидин и дополнительный треонин встроены между положениями 238 и 239 одной или обеих из тяжелых цепей при нумерации по системе нумерации Kabat.
17. Симметричное биспецифическое антитело по любому из предшествующих пунктов, где серин в положении 241 одной или обеих тяжелых цепей при нумерации по системе нумерации Kabat заменен/ заменены на пролин.
18. Симметричное биспецифическое антитело по любому из предшествующих пунктов, где в одной или обеих тяжелых цепях глицин в положении 230 заменен на цистеин, серин в положении 227 заменен на пролин, тирозин в положении 229 заменен на серин, пролин в положении 237 заменен на аспарагиновую кислоту, пролин в положении 238 заменен на лизин, аминокислотная последовательность треонин-гистидин-треонин встроена между положениями 238 и 239 и серин в положении 241 заменен на пролин.
19. Симметричное биспецифическое антитело по любому из предшествующих пунктов, где обе тяжелых цепи содержат домен CH2 и/или домен CH3.
20. Симметричное биспецифическое антитело по любому из предшествующих пунктов, где шарнирные области в каждой тяжелой цепи являются идентичными.
21. Симметричное биспецифическое антитело по любому из пп.1-20, где каждая тяжелая цепь содержит верхнюю шарнирную область и центральную область длиной 12-17 аминокислот.
22. Симметричное биспецифическое антитело по любому из пп.1-20, где каждая тяжелая цепь содержит верхнюю шарнирную область и центральную область длиной 15 аминокислот.
23. Симметричное биспецифическое антитело по любому из предшествующих пунктов, которое дополнительно содержит одну или две легких цепи.
24. Вектор экспрессии, содержащий последовательность, которая кодирует антитело по любому из пп.1-23.
25. Клетка-хозяин для экспрессии антитела по любому из пп.1-23, содержащая вектор по п.24.
26. Применение антитела по любому из пп.1-23 для лечения заболевания или нарушения, патоген которого связан с антигенами, с которыми связывается антитело по пп.1-23.
27. Применение по п.26, где заболевание или нарушение выбрано из группы, состоящей из ревматоидного артрита, псориатического артрита, болезни Стилла, болезни Макла-Уэлса, псориаза, болезни Крона, язвенного колита, SLE (системной красной волчанки), астмы, аллергического ринита, атопического дерматита, рассеянного склероза, васкулита, сахарного диабета типа I, трансплантации и реакции "трансплантат против хозяина", идиопатического фиброза легких (IPF), системного склероза (или склеродермии), фиброза почек, диабетической нефропатии, IgA-нефропатии, гипертензии, заболевания почек конечной стадии, перитонеального фиброза (непрерывного амбулаторного перитонеального диализа), цирроза печени, связанной со старением дегенерации желтого пятна (ARMD), ретинопатии, реактивного фиброза сердца, образования рубцов, келоидов, ожогов, изъязвлений кожи, ангиопластики, хирургической операции коронарного шунтирования, артропластики и хирургической операции по удалению катаракты, рака молочной железы, рака яичника, рака предстательной железы, рака легкого, рака почки, рака поджелудочной железы, рака желудка, рака мочевого пузыря или рака кишечника.
28. Способ получения симметричного биспецифического антитела по любому из пп.1-23, включающий стадию смешения первого IgG4-антитела и второго IgG4-антитела ex vivo, где и первое IgG4-антитело, и второе IgG4-антитело содержит домен CH1 и шарнирную область по любому одному из пп.1-23, в присутствии подходящего восстановителя, такого как GSH, 2-меркаптоэтанол, 2-меркаптоэтиламин, ТВР, ТСЕР, цистеин-HCl и DTT или окислительно-восстановительные буферы, где антигенная специфичность вариабельных областей в первом антителе отличается от антигенной специфичности вариабельных областей во втором антителе.
29. Способ по п.28, где восстановители присутствуют в интервале от 0,01 до 10 мМ.
30. Способ по п.28 или 29, где первое и второе антитела смешивают в соотношении от 0,5:5 до 5:0,5.
31. Способ по любому из пп.28-30, где способ осуществляют при температуре от 15 до 40°C.
Zoom in