Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 034886

   Библиографические данные
(11)034886    (13) B1
(21)201691669

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: C     


Документ опубликован 2020.04.02
Текущий бюллетень: 2020-04  
Все публикации: 034886  
Реестр евразийского патента: 034886  

(22)2015.03.19
(51) C07K 14/765 (2006.01)
A61K 38/39 (2006.01)
A61K 47/48 (2006.01)
C07K 14/78 (2006.01)
C12N 15/62(2006.01)
(43)A1 2017.01.30 Бюллетень № 01  тит.лист, описание 
(45)B1 2020.04.02 Бюллетень № 04  тит.лист, описание  последовательности 
(31)61/968,181
(32)2014.03.20
(33)US
(86)US2015/021535
(87)2015/143199 2015.09.24
(71)БРИСТОЛ-МАЙЕРС СКВИББ КОМПАНИ (US)
(72)Митчелл Трейси С., Госселин Майкл Л., Липовсек Даса, Паркер Рекс, Камфаузен Рэй, Дэвис Джонатан, Фабрицио Давид (US)
(73)БРИСТОЛ-МАЙЕРС СКВИББ КОМПАНИ (US)
(74)Угрюмов В.М., Карпенко О.Ю., Гизатуллина Е.М., Лыу Т.Н., Дементьев В.Н., Глухарёва А.О., Строкова О.В. (RU)
(54)СВЯЗЫВАЮЩИЕ СЫВОРОТОЧНЫЙ АЛЬБУМИН ДОМЕНЫ ФИБРОНЕКТИНА III ТИПА
   Формула 
(57) 1. Полипептид, содержащий десятый домен фибронектина III типа (10Fn3), причем 10Fn3 домен содержит:
а) петли АВ, ВС, CD, DE, EF и FG и содержит аминокислотную последовательность VSDVPRDLEVVAA(X)uLLISW(X)vYRITY(X)wFTV(X)xATISGL(X)yYTITVYA(X)zISINYRT (SEQ ID NO: 2), где петля АВ представлена (Х)u, петля ВС представлена (X)v, петля CD представлена (X)w, петля DE представлена (Х)х, петля EF представлена (Х)у и петля FG представлена Xz, X представляет собой любую аминокислоту, а нижние индексы u, v, w, x, у и z, каждый независимо, представляют собой число аминокислот в каждой петле;
b) где петля CD содержит аминокислотную последовательность, соответствующую формуле G-X1-X2-V-X3-X4-X5-S-X6-X7-G-X8-X9-Y-X10-X11-X12-E, где:
(a) X1 выбран из группы, состоящей из R или W;
(b) Х2 выбран из группы, состоящей из Н, Е, D, Y или Q;
(c) Х3 выбран из группы, состоящей из Q или Н;
(d) X4 выбран из группы, состоящей из I, K, М, Q, L или V;
(e) Х5 выбран из группы, состоящей из Y, F или N;
(f) Х6 выбран из группы, состоящей из D, V или Е;
(g) X7 выбран из группы, состоящей из L, W или F;
(h) X8 выбран из группы, состоящей из P или Т;
(i) X9 выбран из группы, состоящей из L или М;
(j) X10 выбран из группы, состоящей из I или V;
(k) Х11 выбран из группы, состоящей из Y или F; и
(l) X12 выбран из группы, состоящей из Т, S, Q, N или А;
c) причем полипептид связывается с сывороточным альбумином человека с KD менее 500 нМ, и
d) причем 10Fn3 домен дополнительно связывается с одним или несколькими из сывороточного альбумина макака-резус, сывороточного альбумина яванского макака, сывороточного альбумина мыши и сывороточного альбумина крысы с KD менее 500 нМ, например менее 100 нМ или менее 10 нМ.
2. Полипептид по п.1, причем 10Fn3 домен связывается с:
а) сывороточным альбумином макака-резус и сывороточным альбумином яванского макака,
b) сывороточным альбумином мыши и сывороточным альбумином крысы или
c) сывороточным альбумином макака-резус, сывороточным альбумином яванского макака, сывороточным альбумином мыши и сывороточным альбумином крысы.
3. Полипептид по любому из предыдущих пунктов, причем 10Fn3 домен связывает сывороточный альбумин в диапазоне pH от 5,5 до 7,4.
4. Полипептид по любому из предыдущих пунктов, причем 10Fn3 домен связывается с доменом I-II HSA.
5. Полипептид по п.1, причем петля CD 10Fn3 домена содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 101-125.
6. Полипептид по п.5, причем петля CD 10Fn3 домена содержит аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 106.
7. Полипептид по п.5, причем петля CD 10Fn3 домена содержит аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 113.
8. Полипептид по любому из предыдущих пунктов, причем 10Fn3 домен содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23-100, 184-209 и 235-260.
9. Полипептид по п.8, где 10Fn3 домен содержит аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 81.
10. Полипептид по п.8, где 10Fn3 домен содержит аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 88.
11. Гибридный полипептид, содержащий первый (10Fn3) десятый домен фибронектина III типа и гетерологичный белок, содержащий второй домен 10Fn3, причем первый 10Fn3 домен содержит:
а) петли АВ, ВС, CD, DE, EF и FG и содержит аминокислотную последовательность VSDVPRDLEVVAA(X)uLLISW(X)vYRITY(X)wFTV(X)xATISGL(X)yYTITVYA(X)zISINYRT (SEQ ID NO: 2), где петля АВ представлена (Х)u, петля ВС представлена (X)v, петля CD представлена (X)w, петля DE представлена (Х)х, петля EF представлена (Х)у и петля FG представлена Xz, X представляет собой любую аминокислоту, а нижние индексы u, v, w, x, у и z, каждый независимо, представляют собой число аминокислот в каждой петле;
b) где петля CD содержит аминокислотную последовательность, соответствующую формуле G-X1-X2-V-X3-X4-X5-S-X6-X7-G-X8-X9-Y-X10-X11-X12-E, где:
(a) X1 выбран из группы, состоящей из R или W;
(b) Х2 выбран из группы, состоящей из Н, Е, D, Y или Q;
(c) Х3 выбран из группы, состоящей из Q или Н;
(d) X4 выбран из группы, состоящей из I, K, М, Q, L или V;
(e) Х5 выбран из группы, состоящей из Y, F или N;
(f) Х6 выбран из группы, состоящей из D, V или Е;
(g) X7 выбран из группы, состоящей из L, W или F;
(h) X8 выбран из группы, состоящей из P или Т;
(i) X9 выбран из группы, состоящей из L или М;
(j) X10 выбран из группы, состоящей из I или V;
(k) Х11 выбран из группы, состоящей из Y или F; и
(l) X12 выбран из группы, состоящей из Т, S, Q, N или А;
причем полипептид связывается с сывороточным альбумином человека с KD менее 500 нМ и дополнительно связывается с одним или несколькими из сывороточного альбумина макака-резус, сывороточного альбумина яванского макака, сывороточного альбумина мыши и сывороточного альбумина крысы с KD менее 500 нМ, например менее 100 нМ или менее 10 нМ.
12. Гибридный полипептид по п.11, причем петля CD первого 10Fn3 домена содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 101-125.
13. Гибридный полипептид по п.11 или 12, причем второй 10Fn3 домен связывается с целевым белком, отличным от сывороточного альбумина.
14. Гибридный полипептид по любому из пп.11-13, причем первый 10Fn3 домен содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23-100, 184-209 и 235-260.
15. Гибридный полипептид по любому из пп.11-14, причем первый 10Fn3 домен содержит аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 81 или SEQ ID NO: 88.
16. Гибридный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23-100, 168-169, 184-209 и 235-261, где полипептид связывается с сывороточным альбумином человека.
17. Композиция, содержащая полипептид по любому из предыдущих пунктов и носитель, где полипептид связывается с сывороточным альбумином человека.
18. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид по любому из пп.1-16.
19. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п.18, причем молекула нуклеиновой кислоты имеет последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 126-151 и 172, или последовательность, которая по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична ей.
20. Вектор экспрессии, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид по любому из пп.1-16.
21. Клетка, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.18 или 19 или вектор экспрессии по п.20.
22. Способ получения полипептидов по любому из пп.1-16, предусматривающий культивирование клетки по п.21 в условиях, подходящих для экспрессии полипептида, и очистку полипептида.