Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 034878

   Библиографические данные
(11)034878    (13) B1
(21)201690398

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: C     


Документ опубликован 2020.04.01
Текущий бюллетень: 2020-04  
Все публикации: 034878  
Реестр евразийского патента: 034878  

(22)2014.08.28
(51) C12N 5/071(2010.01)
(43)A1 2016.08.31 Бюллетень № 08  тит.лист, описание 
(45)B1 2020.04.01 Бюллетень № 04  тит.лист, описание 
(31)61/870,983
(32)2013.08.28
(33)US
(86)EP2014/068317
(87)2015/028577 2015.03.05
(71)ПРОМЕТЕРА БАЙОСАЙЕНСИЗ С.А./Н.В. (BE)
(72)Сокаль Этьенн, Сникерс Сара, Баран Тюба, Желленк Крис (BE)
(73)ПРОМЕТЕРА ТЕРАПЬЮТИКС СА (BE)
(74)Поликарпов А.В., Соколова М.В., Путинцев А.И., Черкас Д.А., Игнатьев А.В. (RU)
(54)СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КЛЕТОК-ПРЕДШЕСТВЕННИКОВ ЗРЕЛОЙ ПЕЧЕНИ
   Формула 
(57) 1. Выделенная популяция клеток человека, содержащая по меньшей мере 60% клеток-предшественников зрелой печени человека, для применения в постановке диагноза, предупреждении и/или лечении заболеваний печени, отличающаяся тем, что указанные клетки являются позитивными в отношении:
(a) по меньшей мере одного печеночного маркера, выбранного из альбумина, HNF-3B (гепатоцитарный ядерный фактор 3B), HNF-4, CYP1A2 (цитохром Р450 1A2), CYP2C9, CYP2E1 и CYP3A4;
(б) по меньшей мере одного мезенхимного маркера, выбранного из виментина, CD90, CD73, CD44 и CD29;
(в) по меньшей мере одной специфичной для печени активности, выбранной из секреции мочевины, конъюгирования билирубина, секреции альфа-1-антитрипсина и активности CYP3A4;
(г) по меньшей мере одной специфичной для печени активности, выбранной из сульфотрансферазной активности, триптофан-2,3-диоксигеназной активности, активности карбоксилазы печени, метаболизма аммиака и накопления гликогена;
(д) белка 2, содержащего домен Sushi (SUSD2);
(е) цитокератина-19 (CK-19) и
(ж) цитокератина-18 (CK-18) и/или альфа-актина гладких мышц (ASMA),
причем клетки негативны в отношении одного или более чем одного маркера, выбранного из CD140b, CD45, CD117, CD31, CD133 и CD326, и где указанные клетки имеют кубовидную мезо-эпителиальную морфологию.
2. Выделенная популяция клеток человека по п.1, где указанные клетки:
(a) позитивны в отношении альбумина, виментина, CD90, CD73, секреции мочевины, конъюгирования билирубина, секреции альфа-1-антитрипсина, активности CYP3A4, белка 2, содержащего домен Sushi, цитокератина-19 и активности карбоксилазы печени и
(б) негативны в отношении CD140b.
3. Выделенная популяция клеток человека по п.1 или 2, где указанные клетки способны образовывать трехмерные кластеры клеток в суспензии.
4. Выделенная популяция клеток человека по любому из пп.1-3, содержащая от 60 до 99% или от 70 до 90% указанных клеток.
5. Выделенная популяция клеток человека по п.4, в которой клетки способны к прикреплению к субстрату или способны образовывать трехмерные кластеры клеток в суспензии.
6. Способ получения выделенной популяции клеток человека по п.1, включающий:
(a) диссоциацию зрелой печени или ее части с получением популяции первичных клеток печени;
(б) культивирование первичных клеток печени в культуральной среде в условиях прикрепления на подложке, предоставляющей поверхность гидрофильного субстрата, которая обеспечивает прикрепление и рост на ней клеток и появление популяции клеток, имеющих кубовидную мезоэпителиальную морфологию;
(в) пассирование клеток со стадии (б) с кубовидной мезоэпителиальной морфологией по меньшей мере один раз в указанной на стадии (б) культуральной среде и
(г) выделение популяции клеток, полученных после пассирования на стадии (в), сохраняющих кубовидную мезоэпителиальную морфологию,
где клетки популяции клеток со стадии (г) позитивны в отношении
(1) по меньшей мере одного печеночного маркера, выбранного из альбумина, HNF-3B (гепатоцитарный ядерный фактор 3B), HNF-4, CYP1A2 (цитохром Р450 1A2), CYP2C9, CYP2E1 и CYP3A4;
(2) по меньшей мере одного мезенхимного маркера, выбранного из виментина, CD90, CD73, CD44 и CD29;
(3) по меньшей мере одной специфичной для печени активности, выбранной из секреции мочевины, конъюгирования билирубина, секреции альфа-1-антитрипсина и активности CYP3A4;
(4) по меньшей мере одной специфичной для печени активности, выбранной из сульфотрансферазной активности, триптофан-2,3-диоксигеназной активности, активности карбоксилазы печени, метаболизма аммиака и накопления гликогена;
(5) белка 2, содержащего домен Sushi (SUSD2);
(6) цитокератина-19 (CK-19) и
(7) цитокератина-18 (CK-18) и/или альфа-актина гладких мышц (ASMA),
(8) и негативны в отношении одного или более чем одного из CD140b, CD45, CD117, CD31, CD133 и CD326.
7. Способ по п.6, в котором популяция клеток со стадии (г) дополнительно поддерживается в условиях культуры клеток с ультраслабым прикреплением, которые обеспечивают образование трехмерных кластеров клеток в суспензии.
8. Композиция, содержащая выделенную популяцию клеток человека по любому из пп.1-5, для применения в постановке диагноза, предупреждении и/или лечении заболеваний печени.
9. Применение выделенной популяции клеток по любому из пп.1-5 для лечения заболевания печени.
10. Применение композиции по п.8 для лечения заболевания печени.
11. Применение по п.9 или 10, где заболевание печени представляет собой врожденную ошибку метаболизма печени, наследственное расстройство свертывания крови, прогрессирующий семейный внутрипеченочный холестаз типа 1/2/3, недостаточность альфа-1-антитрипсина, дефект транспортеров клеток печени, порфирию, жировую инфильтрацию печени или другое фиброзное заболевание печени, первичный билиарный цирроз, склерозирующий холангит, дегенеративное заболевание печени или острую либо хроническую недостаточность печени.
12. Набор, подходящий для применения по любому из пп.9-11, содержащий один или более чем один флакон с выделенной популяцией клеток человека по любому из пп.1-5 или композицией по п.8, и один или более чем один из следующих элементов: расходные материалы и/или инструкции для применения элементов указанного набора.