Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 034575

   Библиографические данные
(11)034575    (13) B1
(21)201591992

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: C     


Документ опубликован 2020.02.21
Текущий бюллетень: 2020-02  
Все публикации: 034575  
Реестр евразийского патента: 034575  

(22)2014.04.18
(51) C07K 14/705 (2006.01)
C12N 15/86(2006.01)
(43)A1 2016.04.29 Бюллетень № 04  тит.лист, описание 
(45)B1 2020.02.21 Бюллетень № 02  тит.лист, описание  последовательности 
(31)61/813,342
(32)2013.04.18
(33)US
(86)EP2014/058000
(87)2014/170480 2014.10.23
(71)ФОНДАЦЬОНЕ ТЕЛЕТОН (IT)
(72)Ауриццио Альберто, Колелла Паскуалина, Трапани Ивана (IT)
(73)ФОНДАЦЬОНЕ ТЕЛЕТОН (IT)
(74)Медведев В.Н. (RU)
(54)ЭФФЕКТИВНАЯ ДОСТАВКА БОЛЬШИХ ГЕНОВ ПОСРЕДСТВОМ ДВОЙНЫХ AAV ВЕКТОРОВ
   Формула 
(57) 1. Система двойного конструкта для экспрессирования кодирующей последовательности гена, представляющего интерес, в клетке-хозяина, при этом указанная кодирующая последовательность состоит из участка 5'-конца и участка 3'-конца, при этом указанная система двойного конструкта содержит:
a) первую плазмиду, содержащую в 5'-3' направлении:
последовательность AAV 5'-инвертированного терминального повтора (5'-ITR);
последовательность промотора;
участок 5' конца указанной кодирующей последовательности, при этом указанный участок 5'-конца функционально связан с и находится под контролем указанного промотора;
последовательность нуклеиновой кислоты донорного сигнала сплайсинга; и
последовательность AAV 3'-инвертированного терминального повтора (3'-ITR); и
b) вторую плазмиду, содержащую в 5'-3' направлении:
последовательность AAV 5'-инвертированного терминального повтора (5'-ITR);
последовательность нуклеиновой кислоты акцепторного сигнала сплайсинга;
3'-конец указанной кодирующей последовательности;
последовательность нуклеиновой кислоты сигнала полиаденилирования; и
последовательность AAV 3'-инвертированного терминального повтора (3'-ITR),
где указанная первая плазмида дополнительно содержит последовательность нуклеиновой кислоты рекомбиногенной области в 5' положении 3'ITR AAV указанной первой плазмиды и в 3' положении последовательности нуклеиновой кислоты донорного сигнала сплайсинга и где указанная вторая плазмида дополнительно содержит последовательность нуклеиновой кислоты рекомбиногенной области в 3' положении 5'-ITR AAV указанной второй плазмиды и в 5' положении последовательности нуклеиновой кислоты акцепторного сигнала сплайсинга, где рекомбиногенная область является рекомбиногенной областью фага F1, которая состоит из последовательности
GGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAAT (SEQ ID NO. 3) или ее фрагмента, который сохраняет рекомбиногенное свойство SEQ ID No. 3, где при введении указанной первой плазмиды и указанной второй плазмиды в клетку-хозяина указанная кодирующая последовательность воссоздается посредством донорного сигнала сплайсинга и акцепторного сигнала сплайсинга,
где указанный ген, представляющий интерес, является геном, подходящим для лечения и/или профилактики патологии или заболевания, характеризуемых дегенерацией сетчатки.
2. Система двойного конструкта по п.1, в которой нуклеотидная последовательность ITR происходит из того же серотипа AAV или из разных серотипов AAV.
3. Система двойного конструкта по любому из пп.1, 2, в которой 3'-ITR первой плазмиды и 5'-ITR второй плазмиды происходят из одинакового серотипа AAV.
4. Система двойного конструкта по любому из пп.1-3, в которой 5'-ITR и 3'-ITR первой плазмиды и 5'-ITR и 3'-ITR второй плазмиды происходят соответственно из разных серотипов AAV.
5. Система двойного конструкта по любому из пп.1-4, в которой 5'-ITR первой плазмиды и 3'-ITR второй плазмиды происходят из разных серотипов AAV.
6. Система двойного конструкта по любому из пп.1-5, в которой последовательность нуклеиновой кислоты донорного сигнала сплайсинга состоит из последовательности GTAAGTATCAAGGTTAC AAGACAGGTTTAAGGAGACCAATAGAAACTGGGCTTGTCGAGACAGAGAAGACTCTTGCGTTTCT (SEQ ID No. 1) и/или в которой последовательность нуклеиновой кислоты акцепторного сигнала сплайсинга состоит из последовательности GATAGGCACCTATTGGTCTTACTGACATCCACTTTGCCTTTCT CTCCACAG (SEQ ID No. 2).
7. Система двойного конструкта по любому из пп.1-6, в которой кодирующая последовательность является нуклеотидной последовательностью, кодирующей белок, способный корректировать наследственную дегенерацию сетчатки.
8. Система двойного конструкта по п.7, в которой кодирующая последовательность выбрана из группы, состоящей из АВСА4, MYO7A, СЕР290, CDH23, EYS, USH2a, GPR98 или ALMS1.
9. Двойная вирусная векторная система для экспрессирования кодирующей последовательности гена, представляющего интерес, в клетке-хозяина, содержащая систему двойного конструкта по пп.1-8, где первый вирусный вектор содержит первую плазмиду системы двойного конструкта по пп.1-8 и второй вирусный вектор содержит вторую плазмиду системы двойного конструкта по пп.1-8.
10. Двойная вирусная векторная система по п.9, в которой векторы являются аденоассоциированными вирусными (AAV) векторами.
11. Двойная вирусная векторная система по п.9, в которой аденоассоциированные вирусные (AAV) векторы выбраны из одинаковых или различных серотипов AAV.
12. Двойная вирусная векторная система по п.9, в которой аденоассоциированный вирус выбран из серотипа 2, серотипа 8, серотипа 5, серотипа 7 или серотипа 9.
13. Клетка-хозяина для экспрессирования кодирующей последовательности гена, представляющего интерес, содержащая двойную вирусную векторную систему в соответствии с любым из пп.9-12.
14. Фармацевтическая композиция для лечения и/или профилактики патологии или заболевания, характеризуемых дегенерацией сетчатки, содержащая систему двойного конструкта по пп.1-8, двойную вирусную векторную систему в соответствии с любым из пп.9-12 или клетку-хозяина по п.13 и фармацевтически приемлемый носитель.
15. Способ лечения и/или профилактики патологии или заболевания, характеризуемых дегенерацией сетчатки, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества системы двойного конструкта по пп.1-8, двойной вирусной векторной системы в соответствии с любым из пп.9-12, клетки-хозяина по п.13 или фармацевтической композиции по п.14.
16. Способ по п.15, где сетчаточная дегенерация является наследственной.
17. Способ по п.15, где патология или заболевание выбраны из группы, состоящей из пигментного ретинита, Амавроза Лебера (LCA), Болезни Штаргардта, заболевания Ушера, синдрома Альстрема, заболевания, вызванного мутацией в гене АВСА4.
18. Нуклеиновая кислота, состоящая из SEQ ID No. 3 или ее фрагмент, который сохраняет рекомбиногенное свойство SEQ ID No. 3, являющаяся рекомбиногенной областью.
19. Способ для индуцирования генетической рекомбинации, содержащий использование последовательности, состоящей из SEQ ID No. 3, или ее фрагмента, который сохраняет рекомбиногенное свойство SEQ ID No. 3.