Бюллетень ЕАПВ "Изобретения (евразийские заявки и патенты)"
Бюллетень 06´2019

  

(11) 

032507 (13) B1       Разделы: A B C E F G H    

(21) 

201700521

(22) 

2017.11.23

(51) 

A61K 38/17 (2006.01)
A61K 47/30
(2006.01)
A61K 9/50
(2006.01)
B82Y 5/00
(2011.01)
B82Y 40/00
(2011.01)

(31) 

2016147241

(32) 

2016.12.01

(33) 

RU

(43) 

2018.08.31

(71) 

(73) ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ "САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ" (СПбГУ) (RU)

(72) 

Ноздрачёв Александр Данилович, Горюхина Ольга Александровна, Мартюшин Сергей Васильевич, Мищенко Илья Владимирович (RU)

(74) 

Матвеев А.А., Матвеева Т.И., Леонов И.Ф. (RU)

(54) 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НАТИВНОГО БЕЛКА ПРОЛОНГИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ В СОСТАВЕ ПОЛИМЕРНЫХ НАНОСФЕР И РЕЗОРБИРУЕМЫХ МИКРОСФЕР ДЛЯ ДОСТАВКИ

(57) Способ получения нативного белка, как основы пролонгации действия, в составе полимерных наносфер и резорбируемых микросфер, заключающийся в приготовлении водного раствора декстрана и водного раствора белка, получении суспензии, центрифугировании суспензии, высушивании осадка при комнатной температуре и получении наносфер, содержащих белок, отличающийся тем, что используют белок животного происхождения, представляющий собой сублимационно высушенный гистон, который растворяют до 1,0%-ной концентрации в дистиллированной воде, затем водный раствор гистона добавляют в равном объеме к водному раствору декстрана 6%-ной концентрации с молекулярной массой от 50 до 70 кДа, затем раствор, содержащий декстран и гистон, выдерживают в течение 30±5 мин при температуре 6±2°C, затем этот раствор добавляют в органическую жидкость, представляющую собой растительное масло, в количестве 3,5 объема от объема исходного раствора, и получают смесь двух несмешивающихся жидкостей, которую перемешивают и повторно выдерживают в течение 30±5 мин при температуре 6±2°C и получают суспензию, затем суспензию подвергают ультразвуковой обработке в течение 45±5 с при мощности излучения 100 Вт, затем полученную суспензию центрифугируют в течение 5±1 мин при 2000´g, затем осадок высушивают при комнатной температуре и получают наносферы диаметром не более 1000 нм, содержащие гистон, после чего приготавливают первичную суспензию наносфер в предварительно приготовленном растворе полимера, представляющем собой резорбируемый сополимер полилактид-гликолид с молекулярной массой от 50 до 80 кДа при молярном соотношении мономеров, равном 75:25, который растворяют до 10%-ной концентрации в гидрофобном органическом растворителе, представляющем собой хлористый метилен, перемешивают в течение 60±5 мин при температуре 6±2°C, причем в раствор полимера добавляют наносферы с гистоном при весовом соотношении наносфер и полимера, равном 1:50, затем к раствору добавляют этиловый спирт в количестве 10 объемов по отношению к объему исходного раствора, затем смесь перемешивают и получают вторичную суспензию, которую диспергируют при перемешивании в течение 10 мин при комнатной температуре для равномерного распределения полимера в органическом растворителе и формирования микросфер, затем микросферы осаждают из суспензии при добавлении охлажденного этилового спирта, который добавляют в 100-кратном объеме по отношению к объему суспензии, затем осадок микросфер помещают на мелкопористый стеклянный фильтр и отфильтровывают, затем осадок собирают и высушивают при комнатной температуре в течение 8±2 ч и полученные резорбируемые микросферы, содержащие в своем составе наносферы с гистоном с содержанием белка от 2,0 до 4,0 мкг на 1,0 мг микросфер, вносят в модельную среду инкубации, в качестве которой используют фосфатно-солевой буферный раствор с pH 7,2 и подвергают инкубации при 21°C в течение 2 месяцев, отслеживая при этом через каждые сутки в течение не менее 50 суток концентрацию белка в инкубационной среде с получением нативного белка в составе резорбируемых микросфер, пригодного для пролонгированного высвобождения.


наверх