Бюллетень ЕАПВ "Изобретения (евразийские заявки и патенты)"
Бюллетень 05´2019

  

(21) 

201792179 (13) A1       Разделы: A B C D E F G H    

(22) 

2017.10.30

(51) 

C12P 21/02 (2006.01)
C12N 15/70
(2006.01)
C12N 1/21
(2006.01)
C12R 1/19
(2006.01)

(96) 

2017000117 (RU) 2017.10.30

(71) 

ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ "АКТИВНЫЕ БИОСИСТЕМЫ" (ООО "АБС") (RU)

(72) 

Духовлинов Илья Владимирович, Орлов Антон Иосифович (RU)

(74) 

Федорова Е.А. (RU)

(54) 

ТЕХНОЛОГИЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ РЕКОМБИНАНТНОГО ФЛАГЕЛЛИНА

(57) Изобретение относится к молекулярной биологии и биотехнологии и может быть использовано для производства рекомбинантного флагеллина. Предложен способ получения активного высокоочищенного рекомбинантного усеченного флагеллина, охарактеризованного последовательностью аминокислот SEQ ID NO:1, заключающийся в том, что используют субклон штамма-продуцента E.coli BL21(DE3)/pET151D-TOPO F27, содержащего ген, кодирующий такой флагеллин, оптимизированный по кодонному составу для экспрессии в клетках E.coli, обеспечивающий выход целевого белка до 45% от общего белка, культивируют клетки такого субклона с использованием индуктора экспрессии целевого гена 0,5 мМ ИПТГ, лизируют клетки, осаждают клеточные осадки, осуществляют выделение и очистку белка из супернатанта в денатурирующих условиях с использованием Ni-NTA сефарозы. Данная технология позволяет получить флагеллин с чистотой 98%, выход - 800 мг с 1 л питательной среды. Полученный с использованием предложенной технологии флагеллин демонстрирует эффективность в модели лабораторных животных как при введении до, так и после облучения.


наверх