Бюллетень ЕАПВ "Изобретения (евразийские заявки и патенты)"
Бюллетень 04´2019

  

(11) 

032089 (13) B1       Разделы: A B C D E F G H    

(21) 

201492014

(22) 

2013.05.10

(51) 

C12N 7/04 (2006.01)
A61K 39/15
(2006.01)
A61P 31/14
(2006.01)
A61P 37/04
(2006.01)
C07K 14/14
(2006.01)
C12N 15/46
(2006.01)
C12N 15/82
(2006.01)
C12N 7/01
(2006.01)

(31) 

61/646,058

(32) 

2012.05.11

(33) 

US

(43) 

2015.02.27

(86) 

PCT/CA2013/050364

(87) 

WO 2013/166609 2013.11.14

(71) 

(73) МЕДИКАГО ИНК. (CA); МИТСУБИШИ ТАНАБЕ ФАРМА КОРПОРЕЙШН (JP)

(72) 

Д'Ау Марк-Андре, Ландри Натали, Лавуа Пьер-Оливье (CA), Арай Масааки, Асахара Наоми (JP), Мутепфа Дэвид Леви Рутендо (GB), Хитзерот Инга Исабель, Рибики Эдвард Питер (ZA)

(74) 

Глухарёва А.О. (RU)

(54) 

ПОЛУЧЕНИЕ РОТАВИРУС-ПОДОБНЫХ ЧАСТИЦ В РАСТЕНИЯХ

(57) 1. Способ получения ротавирус-подобной частицы (RLP) в растении, части растения или клетке растения, включающий:

a) введение первой нуклеиновой кислоты, содержащей первую регуляторную область, активную в растении, функционально связанную с первой нуклеотидной последовательностью, кодирующей первый ротавирусный структурный белок, выбранный из одного из VP2, VP6 и VP7, второй нуклеиновой кислоты, содержащей вторую регуляторную область, активную в растении, функционально связанную со второй нуклеотидной последовательностью, кодирующей второй ротавирусный структурный белок, выбранный из одного из VP2, VP6 и VP7, и третьей нуклеиновой кислоты, содержащей третью регуляторную область, активную в растении, функционально связанную с третьей нуклеотидной последовательностью, кодирующей третий ротавирусный структурный белок, выбранный из одного из VP2, VP6 и VP7, где каждый из VP2, VP6 и VP7 введен в растение, часть растения или клетку растения, где первая, вторая или третья нуклеотидная последовательность, кодирующая VP7, содержит усеченный нативный сигнальный пептид или ненативный сигнальный пептид из растительного полипептида;

b) инкубирование растения, части растения или клетки растения, для временной экспрессии первой, второй и третьей нуклеиновой кислоты, получая таким образом RLP, где RLP содержит VP2, VP6 и VP7;

c) сбор растения, части растения или клетки растения и

d) экстракцию и очистку RLP от растения, части растения или клетки растения в присутствии иона кальция (Са2+).

2. Способ по п.1, при котором четвертую нуклеиновую кислоту, содержащую четвертую регуляторную область, активную в растении и оперативно связанную с четвертой нуклеотидной последовательностью, кодирующей четвертый ротавирусный структурный белок, вводят в растение, часть растения или клетку растения на стадии а) и экспрессируют при инкубировании растения, части растения или клетки растения на стадии b), причем четвертый ротавирусный структурный белок представляет собой VP4.

3. Способ по п.1, при котором первую, вторую и третью нуклеиновые кислоты вводят в растение, часть растения или клетку растения в пропорции 1:1:1.

4. Способ по п.2, при котором первую, вторую, третью и четвертую нуклеиновые кислоты вводят в растение, часть растения или клетку растения в пропорции 1:1:1:1.

5. Способ по п.1 или 2, при котором использование кодонов нуклеотидной последовательности доводят до предпочтительного использования кодонов человека, повышенного содержания GC или их комбинации.

6. Способ по п.1, в котором первая, вторая и третья нуклеотидная последовательность функционально связана с энхансером трансляции.

7. Способ по п.6, в котором энхансер трансляции включает регуляторную область вируса мозаики коровьего гороха (CPMV).

8. Способ по п.1, при котором первая, вторая или третья нуклеотидная последовательность или их комбинация функционально связана с регуляторной областью вируса мозаики коровьего гороха (CPMV).

9. Способ по п.2, при котором первая, вторая, третья или четвертая нуклеотидная последовательность или их комбинация функционально связана с регуляторной областью вируса мозаики коровьего гороха (CPMV).

10. Способ по п.1, при котором нуклеотидная последовательность, кодирующая VP2, на 80-100% идентична нуклеотидной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 45, нуклеотидная последовательность, кодирующая VP6, на 80-100% идентична нуклеотидной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 или SEQ ID NO: 46, нуклеотидная последовательность, кодирующая VP7, на 80-100% идентична нуклеотидной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 19, 20, 48, 49, 52, 53, 54 или 57.

11. Способ по п.2, при котором нуклеотидная последовательность, кодирующая VP2, на 80-100% идентична нуклеотидной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 45, нуклеотидная последовательность, кодирующая VP6, на 80-100% идентична нуклеотидной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 или SEQ ID NO: 46, нуклеотидная последовательность, кодирующая VP7, на 80-100% идентична нуклеотидной последовательности, выбран­ной из SEQ ID NO: 19, 20, 48, 49, 52, 53, 54 или 57, нуклеотидная последовательность, кодирующая VP4, на 80-100% идентична нуклеотидной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 15, 16, 47, 50 или 51.

12. Ротавирус-подобная частица (RLP), полученная способом по п.1 или 2, причем размер RLP находится в диапазоне размеров 70-100 нм.

13. Композиция, содержащая эффективную дозу ротавирус-подобных частиц (RLP) по п.12 для индуци­рования иммунного ответа к ротавирусной инфекции у субъекта и фармацевтически приемлемый носитель.

14. Способ получения ротавирус-подобной частицы (RLP) в растении, части растения или клетке растения, включающий:

а) обеспечение растения, части растения или клетки растения, содержащей первую нуклеиновую кислоту, содержащую первую регуляторную область, активную в растении, функционально связанную с первой нуклеотидной последовательностью, кодирующей первый ротавирусный структурный белок, вторую нуклеиновую кислоту, содержащую вторую регуляторную область, активную в растении, функционально связанную со второй нуклеотидной последовательностью, кодирующей второй ротавирусный структурный белок, и третью нуклеиновую кислоту, содержащую третью регуляторную область, активную в растении, функционально связанную с третьей нуклеотидной последовательностью, кодирующей третий ротавирусный структурный белок, в растении, части растения или клетке растения;

причем первый ротавирусный структурный белок представляет собой VP2, второй ротавирусный структурный белок представляет собой VP6 и третий ротавирусный структурный белок представляет собой VP7, причем VP7 содержит усеченный нативный сигнальный пептид или ненативный сигнальный пептид из растительного полипептида;

b) инкубирование растения, части растения или клетки растения для временной экспрессии первой, второй и третьей нуклеиновой кислоты, получая таким образом RLP, где RLP содержит VP2, VP6 и VP7;

c) сбор растения, части растения или клетки растения и

d) экстракцию и очистку RLP от растения, части растения или клетки растения в присутствии иона кальция (Са2+).

15. Способ по п.14, где растение, часть растения или клетка растения включает четвертую нуклеиновую кислоту, содержащую четвертую регуляторную область, активную в растении и функционально связанную с четвертой нуклеотидной последовательностью, кодирующей четвертый ротавирусный структурный белок, причем четвертый ротавирусный структурный белок экспрессируется при инкубации растения, части растения или клетки растения на стадии b), причем четвертый ротавирусный структурный белок представляет собой VP4.

16. Ротавирус-подобная частица (RLP), полученная способом по п.14 или 15, причем размер RLP находится в диапазоне размеров 70-100 нм.

17. Композиция, содержащая эффективную дозу ротавирус-подобных частиц (RLP) по п.16 для индуцирования иммунного ответа к ротавирусной инфекции у субъекта и фармацевтически приемлемый носитель.

18. Способ индуцирования иммунитета к ротавирусной инфекции у субъекта, предусматривающий введение композиции по п.17.

19. Способ индуцирования иммунитета к ротавирусной инфекции у субъекта, предусматривающий введение композиции по п.13.

20. Способ по п.1 или 2, где ненативный сигнальный пептид представляет собой сигнальный пептид протеиндисульфидизомеразы люцерны (PDI).

21. Способ по п.14 или 15, где ненативный сигнальный пептид представляет собой сигнальный пептид протеиндисульфидизомеразы люцерны (PDI).

22. Способ получения ротавирус-подобной частицы (RLP) в растении, части растения или клетке растения, включающий:

a) введение первой нуклеиновой кислоты, содержащей первую регуляторную область, активную в растении, функционально связанную с первой нуклеотидной последовательностью, кодирующей первый ротавирусный структурный белок, выбранный из одного из VP2, VP6 и VP7, второй нуклеиновой кислоты, содержащей вторую регуляторную область, активную в растении, функционально связанную со второй нуклеотидной последовательностью, кодирующей второй ротавирусный структурный белок, выбранный из одного из VP2, VP6 и VP7, и третьей нуклеиновой кислоты, содержащей третью регуляторную область, активную в растении, функционально связанную с третьей нуклеотидной последовательностью, кодирующей третий ротавирусный структурный белок, выбранный из одного из VP2, VP6 и VP7, где каждый из VP2, VP6 и VP7 введен в растение, часть растения или клетку растения, где первая, вторая или третья нуклеотидная последовательность, кодирующая VP7, содержит усеченный нативный сигнальный пептид или ненативный сигнальный пептид;

b) инкубирование растения, части растения или клетки растения в условиях, которые позволяют временную экспрессию первой, второй и третьей нуклеиновой кислоты, получая таким образом RLP, где RLP содержит VP2, VP6 и VP7;

c) сбор растения, части растения или клетки растения и

d) экстракцию и очистку RLP от растения, части растения или клетки растения.


наверх