Бюллетень ЕАПВ "Изобретения (евразийские заявки и евразийские патенты)"
Бюллетень 07´2018

  

(11) 

030252 (13) B1       Разделы: A B C D E F G H    

(21) 

201400772

(22) 

2012.12.28

(51) 

A61K 38/47 (2006.01)
A61K 31/337
(2006.01)
C12N 9/26
(2006.01)
A61K 38/43
(2006.01)

(31) 

61/631,313; 61/796,208

(32) 

2011.12.30; 2012.11.01

(33) 

US

(43) 

2015.07.30

(86) 

PCT/US2012/072182

(87) 

WO 2013/102144 2013.07.04

(71) 

(73) ГАЛОЗИМ, ИНК. (US)

(72) 

Вей Ги, Шепард Х. Майкл, Цхао Кипинг, Коннор Роберт Джеймс (US)

(74) 

Стояченко И.Л. (RU)

(54) 

ВАРИАНТЫ ПОЛИПЕПТИДОВ PH20, КОМПОЗИЦИИ НА ИХ ОСНОВЕ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

(57) 1. Модифицированный полипептид PH20, включающий аминокислотную замену в немодифицированном полипептиде PH20, где

немодифицированный полипептид PH20 состоит из последовательности аминокислот, приведенной в любой из SEQ ID NOS: 3, 7 и 32-66;

по меньшей мере одна аминокислотная замена представляет собой замену в аминокислотной позиции, выбранной из 10, 12, 20, 22, 26, 34, 36, 46, 50, 52, 58, 68, 70, 74, 82, 83, 84, 86, 97, 127, 131, 138, 142, 143, 144, 166, 169, 174, 193, 195, 196, 204, 205, 206, 213, 234, 237, 238, 240, 249, 261, 267, 277, 279, 291, 309, 310, 314, 315, 317, 318, 347, 367, 375, 376, 399, 401, 407, 416, 419, 421, 431, 433, 439, 440, 443 и 445 со ссылкой на позиции аминокислотных остатков, приведенные в SEQ ID NO: 3, при условии, что если модифицированный полипептид PH20 содержит только одну аминокислотную замену, эта замена не соответствует аминокислотным заменам V12A, N131А или E290Q со ссылкой на позиции аминокислотных остатков, приведенные в SEQ ID NO: 3;

соответствующие позиции аминокислот идентифицируют с помощью выравнивания полипептида PH20 с полипептидом, приведенным в SEQ ID NO: 3;

модифицированный полипептид PH20 проявляет повышенную стабильность в условиях, при которых происходит денатурация белка, по сравнению с немодифицированным полипептидом PH20, не содержащим аминокислотную замену; где по меньшей мере одна из аминокислотных замен придает повышенную стабильность; и

повышенная стабильность проявляется как повышенная гиалуронидазная активность в условиях, при которых происходит денатурация белка, по сравнению с гиалуронидазной активностью немодифицированного полипептида PH20, не содержащего аминокислотную замену, в тех же денатурирующих условиях, и активности сравнивают в одинаковых условиях.

2. Модифицированный полипептид PH20 по п.1, где аминокислотная замена (замены) представляет собой замену в немодифицированном полипептиде PH20, состоящем из последовательности аминокислот, приведенной в SEQ ID NOS: 3 или 32-66.

3. Модифицированный полипептид PH20 по п.1 или 2, где условия, при которых происходит денатурация белка, включают присутствие фенольного консерванта.

4. Модифицированный полипептид PH20 по п.3, где

модифицированный полипептид PH20 проявляет более чем 110% гиалуронидазной активности в присутствии фенольного консерванта по сравнению с немодифицированным полипептидом PH20, не содержащим аминокислотную замену (замены); или

модифицированный полипептид PH20 проявляет по меньшей мере 15, 20, 30, 40, 50, 60, 65, 70, 75, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или большую гиалуронидазную активность в присутствии фенольного консерванта (консервантов) по сравнению с его гиалуронидазной активностью в отсутствие фенольного консерванта.

5. Модифицированный полипептид PH20 по п.3 или 4, где модифицированный полипептид PH20 является стабильным в присутствии эффективного против микроорганизмов количества одного или более фенольных консервантов, где эффективное против микроорганизмов количество представляет собой общее количество одного или более фенольных консервантов в виде процента концентрации по массе (мас./об.), который составляет от 0,05 до 0,6%, от 0,1 до 0,4%, от 0,1 до 0,3%, от 0,15 до 0,325%, от 0,15 до 0,25%, от 0,1 до 0,2%, от 0,2 до 0,3% или от 0,3 до 0,4%, включая граничные значения.

6. Модифицированный полипептид PH20 по любому из пп.3-5, где фенольный консервант выбран из одного или более веществ, выбранных из фенола, метакрезола (м-крезола), бензилового спирта и парабена.

7. Модифицированный полипептид PH20 по п.6, где

консервантом является парабен, который представляет собой метилпарабен или пропилпарабен, или

консервантом является фенольный консервант, который представляет собой м-крезол, фенол или м-крезол и фенол.

8. Модифицированный полипептид PH20 по любому из пп.1-7, содержащий по меньшей мере одну аминоислотную замену, выбранную из замен на G в позиции, соответствующей позиции 10; K в позиции, соответствующей позиции 12; S в позиции, соответствующей позиции 20; Т в позиции, соответствующей позиции 22; М в позиции, соответствующей позиции 26; W в позиции, соответствующей позиции 34; N в позиции, соответствующей позиции 36; L в позиции, соответствующей позиции 46; М в позиции, соответствующей позиции 50; Т в позиции, соответствующей позиции 52; S в позиции, соответствующей позиции 52; С в позиции, соответствующей позиции 58; K в позиции, соответствующей позиции 58; R в позиции, соответствующей позиции 58; N в позиции, соответствующей позиции 58; Y в позиции, соответствующей позиции 58; Р в позиции, соответствующей позиции 58; Н в позиции, соответствующей позиции 58; Р в позиции, соответствующей позиции 68; V в позиции, соответствующей позиции 70; Е в позиции, соответствующей позиции 74; L в позиции, соответствующей позиции 82; N в позиции, соответствующей позиции 82; V в позиции, соответствующей позиции 83; Q в позиции, соответствующей позиции 83; S в позиции, соответствующей позиции 83; G в позиции, соответствующей позиции 83; N в позиции, соответствующей позиции 84; А в позиции, соответствующей позиции 86; K в позиции, соответствующей позиции 86; Е в позиции, соответствующей позиции 97; L в позиции, соответствующей позиции 97; R в позиции, соответствующей позиции 127; R в позиции, соответствующей позиции 131; L в позиции, соответствующей позиции 138; K в позиции, соответствующей позиции 142; N в позиции, соответствующей позиции 142; Р в позиции, соответствующей позиции 142; S в позиции, соответствующей позиции 142; Т в позиции, соответствующей позиции 142; G в позиции, соответствующей позиции 143; K в позиции, соответствующей позиции 143; Т в позиции, соответствующей позиции 144; Q в позиции, соответствующей позиции 166; Т в позиции, соответствующей позиции 166; L в позиции, соответствующей позиции 169; G в позиции, соответствующей позиции 174; N в позиции, соответствующей позиции 174; Q в позиции, соответствующей позиции 193; Т в позиции, соответствующей позиции 195; N в позиции, соответствующей позиции 195; Е в позиции, соответствующей позиции 196; R в позиции, соответствующей позиции 196; Р в позиции, соответствующей позиции 204; А в позиции, соответствующей позиции 205; Е в позиции, соответствующей позиции 205; I в позиции, соответствующей позиции 206; А в позиции, соответствующей позиции 213; М в позиции, соответствующей позиции 234; Т в позиции, соответствующей позиции 237; Н в позиции, соответствующей позиции 238; Q в позиции, соответствующей позиции 240; V в позиции, соответствующей позиции 249; А в позиции, соответствующей позиции 261; K в позиции, соответствующей позиции 261; Т в позиции, соответствующей позиции 267; K в позиции, соответствующей позиции 277; Н в позиции, соответствующей позиции 279; V в позиции, соответствующей позиции 279; V в позиции, соответствующей позиции 291; Е в позиции, соответствующей позиции 309; Q в позиции, соответствующей позиции 310; Y в позиции, соответствующей позиции 314; Y в позиции, соответствующей позиции 315; N в позиции, соответствующей позиции 317; W в позиции, соответствующей позиции 317; D в позиции, соответствующей позиции 318; G в позиции, соответствующей позиции 347; А в позиции, соответствующей позиции 367; R в позиции, соответствующей позиции 375; R в позиции, соответствующей позиции 376; V в позиции, соответствующей позиции 399; Е в позиции, соответствующей позиции 401; А в позиции, соответствующей позиции 407; L в позиции, соответствующей позиции 416; K в позиции, соответствующей позиции 419; Н в позиции, соответствующей позиции 421; Е в позиции, соответствующей позиции 431; Т в позиции, соответствующей позиции 433; V в позиции, соответствующей позиции 433; С в позиции, соответствующей позиции 439; Р в позиции, соответствующей позиции 440; G в позиции, соответствующей позиции 443; и N в позиции, соответствующей позиции 445, со ссылкой на позиции аминокислотных остатков, приведенные в SEQ ID NO: 3.

9. Модифицированный полипептид PH20 по п.8, включающий по меньшей мере одну аминокислотную замену, выбранную из замен на Т в позиции, соответствующей позиции 52, K в позиции, соответствующей позиции 58, R в позиции, соответствующей позиции 58, V в позиции, соответствующей позиции 83, Р в позиции, соответствующей позиции 204, М в позиции, соответствующей позиции 234, А в позиции, соответствующей позиции 261, Q в позиции, соответствующей позиции 310, и Н в позиции, соответствующей позиции 421, со ссылкой на позиции аминокислотных остатков, приведенные в SEQ ID NO: 3.

10. Модифицированный полипептид PH20 по любому из пп.1-9, включающий замену на Р в позиции, соответствующей позиции 204 в полипептиде PH20, со ссылкой на позиции аминокислотных остатков, приведенные в SEQ ID NO: 3.

11. Модифицированный полипептид PH20 по любому из пп.1-9, включающий замену на R в позиции, соответствующей позиции 58 в полипептиде PH20, со ссылкой на позиции аминокислотных остатков, приведенные в SEQ ID NO: 3.

12. Модифицированный полипептид PH20 по любому из пп.1-11, содержащий последовательность аминокислот, приведенную в любой из SEQ ID NOS: 83, 88, 93, 94, 101, 144, 148, 158, 171, 175, 176, 177, 178, 180, 182, I83, 184, 185, 194, 240, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 268, 270, 272, 307, 309, 327, 334, 341, 351, 352, 353, 356, 357, 358, 359, 361, 424, 426, 430, 434, 436, 443, 444, 445, 446, 447, 449, 450, 451, 454, 461, 480, 487, 489, 492, 495, 504, 505, 509, 527, 544, 551, 576, 589, 600, 603, 607, 612, 614, 647, 658, 683, 687, 733, 736, 741, 754, 763, 768, 781, 796, 797, 809, 818, 829 или 837, или последовательность аминокислот, которая обладает по меньшей мере 98%, 99% или большей идентичностью последовательности с любой из SEQ ID NOS: 83, 88, 93, 94, 101, 144, 148, 158, 171, 175, 176, 177, 178, 180, 182, I83, 184, 185, 194, 240, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 268, 270, 272, 307, 309, 327, 334, 341, 351, 352, 353, 356, 357, 358, 359, 361, 424, 426, 430, 434, 436, 443, 444, 445, 446, 447, 449, 450, 451, 454, 461, 480, 487, 489, 492, 495, 504, 505, 509, 527, 544, 551, 576, 589, 600, 603, 607, 612, 614, 647, 658, 683, 687, 733, 736, 741, 754, 763, 768, 781, 796, 797, 809, 818, 829 или 837 и содержит аминокислотную замену.

13. Модифицированный полипептид PH20 по любому из пп.1-11, включающий вплоть до десяти замен аминокислот.

14. Модифицированный полипептид по п.10, включающий замену на Р в позиции, соответствующей позиции 204 в полипептиде PH20, и до 5 дополнительных аминокислотных замен, где аминокислотная замена (замены) представляет собой замену (замены) в немодифицированном полипептиде PH20, состоящем из последовательности аминокислот, приведенной в SEQ ID NOS: 3 или 32-66.

15. Модифицированный полипептид PH20 по любому из пп.1-14, где модифицированный полипептид PH20 является гликозилированным.

16. Модифицированный полипептид PH20 по любому из пп.1-15, который модифицирован путем конъюгации с полимером.

17. Модифицированный полипептид PH20 по п.16, где полимер представляет собой декстран или PEG.

18. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая модифицированный полипептид PH20 по любому из пп.1-17.

19. Вектор, включающий молекулу нуклеиновой кислоты по п.18.

20. Клетка, включающая вектор по п.19.

21. Фармацевтическая композиция, включающая модифицированный полипептид PH20 по любому из пп.1-17 и фармацевтически приемлемый эксципиент.

22. Фармацевтическая композиция по п.21, включающая эффективное против микроорганизмов количество фенольного консерванта (консервантов).

23. Фармацевтическая композиция по п.21 или 22, включающая терапевтически активный агент.

24. Фармацевтическая композиция по п.23, где терапевтический агент представляет собой полипептид, белок, нуклеиновую кислоту, лекарство, низкомолекулярное соединение или органическую молекулу.

25. Фармацевтическая композиция по п.23 или 24, где терапевтический агент выбран из антитела, иммуноглобулина, цитокина, химиотерапевтического агента, фактора коагуляции и инсулина.

26. Фармацевтическая композиция по любому из пп.23-25, где терапевтический агент представляет собой инсулин, который представляет собой быстродействующий инсулин.

27. Фармацевтическая композиция по любому из пп.23-25, где терапевтический агент представляет собой антитело, которое представляет собой моноклональное антитело.

28. Способ лечения ассоциированного с гиалуронаном заболевания или состояния, включающий введение субъекту модифицированного полипептида PH20 по любому из пп.1-17 или фармацевтической композиции по любому из пп.21-27.

29. Способ по п.28, где ассоциированное с гиалуронаном заболевание или состояние представляет собой опухоль или рак.

30. Способ по п.28, где ассоциированное с гиалуронаном заболевание или состояние выбрано из сердечно-сосудистого расстройства, офтальмологического расстройства, легочного заболевания, целлюлита, внутридискового давления, отека и пролиферативного расстройства.

31. Способ лечения диабета, включающий введение субъекту фармацевтической композиции по п.26.

32. Способ усиления доставки терапевтического агента субъекту, включающий введение субъекту модифицированного полипептида PH20 по любому из пп.1-17 или фармацевтической композиции по любому из пп.21-27 и введение терапевтического агента.

33. Применение фармацевтической композиции по любому из пп.21-27 для лечения ассоциированного с гиалуронаном заболевания или состояния или для доставки терапевтического агента субъекту.

34. Применение по п.33, где ассоциированное с гиалуронаном заболевание или состояние представляет собой опухоль или рак.

35. Применение по п.33, где ассоциированное с гиалуронаном заболевание или состояние выбрано из сердечно-сосудистого расстройства, офтальмологического расстройства, легочного заболевания, целлюлита, внутридискового давления, отека и пролиферативного расстройства.

36. Применение фармацевтической композиции по п.26 для лечения диабета.

37. Способ идентификации или отбора модифицированного полипептида PH20, который проявляет стабильность в денатурирующих условиях, где способ включает:

a) тестирование гиалуронидазной активности модифицированного полипептида PH20 в композиции, включающей денатурирующий агент, и/или в денатурирующих условиях;

b) тестирование гиалуронидазной активности модифицированного полипептида PH20 в такой же композиции и/или в тех же условиях, как на стадии а), но в отсутствие денатурирующего агента или денатурирующего условия; и

c) отбор или идентификацию модифицированного полипептида PH20, который проявляет активность на стадии а), которая составляет по меньшей мере 5% активности, проявляемой на стадии b); и/или

способ включает:

a) тестирование активности модифицированного полипептида PH20 в композиции, включающей денатурирующий агент, и/или в денатурирующих условиях;

b) тестирование активности соответствующего немодифицированного полипептида PH20 в композиции, содержащей такой же денатурирующий агент, и/или в таких же денатурирующих условиях, как на стадии а), за счет чего активность тестируют в таких же условиях, как на стадии а); и

c) отбор или идентификацию модифицированного полипептида PH20, который проявляет большую активность, составляющую по меньшей мере 120% активности по сравнению с немодифицированным деградирующим гиалуронан ферментом.

38. Способ по п.37, включающий:

d) сравнение активности на стадии а) для выбранного или идентифицированного модифицированного полипептида PH20 с активностью немодифицированного полипептида PH20, протестированного в тех же условиях; и

e) идентификацию или отбор модифицированного полипептида PH20, проявляющего по меньшей мере 120, 130, 135, 140, 145, 150, 160, 170, 180, 200, 250, 300, 350, 400, 500, 1500, 2000, 3000, 4000, 5000% или большую гиалуронидазную активность по сравнению с немодифицированным деградирующим гиалуронан ферментом.

39. Способ по п.37 или 38, где денатурирующий агент или денатурирующие условия созданы температурой, перемешиванием, отсутствием или низким содержанием соли или присутствием эксципиента.

40. Способ по любому из пп.37-39, где денатурирующий агент или условие представляет собой денатурирующий эксципиент, выбранный из антиадгезионных агентов, связующих, агентов для покрытия оболочкой, наполнителей и разбавителей, вкусоароматичеких агентов, красителей, смазывающих веществ, глидантов, консервантов, сорбентов и подсластителей.

41. Способ по п.40, где денатурирующий агент или условие представляет собой консервант.

42. Способ по п.41, где консервант представляет собой фенольный консервант.

43. Способ по любому из пп.37-42, где модифицированный полипептид PH20 содержит аминокислотную замену, вставку или делецию аминокислот по сравнению с немодифицированным деградирующим гиалуронан ферментом.

44. Способ по любому из пп.37-43, где немодифицированный полипептид PH20 представляет собой гиалуронидазу PH20 или ее укороченную форму, у которой отсутствует С-концевой участок присоединения гликозилфосфатидилинозитольного (GPI) якоря или часть участка присоединения GPI якоря, где укороченная форма проявляет гиалуронидазную активность.

45. Способ по п.44, где немодифицированный полипептид PH20 представляет собой PH20 человека или ее укороченную с С-конца форму.


наверх