Бюллетень ЕАПВ "Изобретения (евразийские заявки и патенты)"
Бюллетень 11´2017

  

(11) 

028538 (13) B1       Разделы: A B C D E F G H    

(21) 

201500174

(22) 

2013.07.10

(51) 

C12N 9/00 (2006.01)
A61K 8/66
(2006.01)
A61Q 5/10
(2006.01)
C12N 9/02
(2006.01)

(31) 

12177945.8; 12184662.0

(32) 

2012.07.26; 2012.09.17

(33) 

EP

(43) 

2015.06.30

(86) 

PCT/EP2013/064555

(87) 

WO 2014/016118 2014.01.30

(71) 

(73) ЮНИЛЕВЕР Н.В. (NL)

(72) 

Чандрамоули Ганеш, Махапатра Самиран, Тхиммаиах Шриниваса, Дандекар Динешкумар Харибхау, Кришнан Ситха (IN)

(74) 

Саломатина И.С. (RU)

(54) 

СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОЙ ТИРОЗИНАЗЫ ЧЕЛОВЕКА

(57) 1. Способ получения рекомбинантной тирозиназы человека, включающий стадии:

(i) синтез полноразмерного гена тирозиназы человека, соответствующий которому белок простирается от N-конца до аминокислоты 473 или выше, кодон-оптимизированным образом при помощи ПЦР;

(ii) клонирование гена тирозиназы человека в бакуловирусной системе экспрессии для получения клонов;

(iii) получение бакмид из упомянутых клонов;

(iv) инфицирование клетки насекомого указанными бакмидами для получения титра вируса;

(v) оптимизация множественности заражения и моментов времени для экспрессионного скрининга желаемой тирозиназы человека.

2. Способ по п.1, в котором клеточная среда стадии (v) включает в себя соль меди.

3. Способ по п.1 или 2, в котором соль меди представляет собой хлорид меди или сульфат меди.

4. Способ по п.2 или 3, в котором соль меди содержится в концентрации в интервале от 0,1 до 25 мкмоль на 1 л клеточной среды.

5. Способ по п.1, в котором способ дополнительно включает стадию лизирования упомянутой клетки насекомого для получения тирозиназы человека.

6. Способ по п.3 или 4, где способ дополнительно включает стадию лизирования упомянутой клетки насекомого для получения тирозиназы человека или ее сбора из супернатанта культуральной среды клеток насекомого.

7. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором упомянутый ген на стадии (ii) клонируется в эукариотическом векторе.

8. Способ по п.7, в котором вектор представляет собой бакуловирусный экспрессионный вектор.


наверх