Бюллетень ЕАПВ "Изобретения (евразийские заявки и патенты)"
Бюллетень 11´2017

  

(11) 

028309 (13) B1       Разделы: A B C D E F G H    

(21) 

201491186

(22) 

2013.01.12

(51) 

A61K 38/37 (2006.01)

(31) 

61/586,099; 61/586,654; 61/667,901; 61/734,954

(32) 

2012.01.12; 2012.01.13; 2012.07.03; 2012.12.07

(33) 

US

(43) 

2015.05.29

(86) 

PCT/US2013/021330

(87) 

WO 2013/106787 2013.07.18

(71) 

(73) БАЙОДЖЕН ЭМЭЙ ИНК. (US)

(72) 

Чабра Экта Сет, Лю Туняо, Питерс Роберт, Цзян Хайянь (US)

(74) 

Нилова М.И. (RU)

(54) 

ПОЛИПЕПТИДЫ ХИМЕРНОГО ФАКТОРА VIII И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

(57) 1. Химерный белок, содержащий белок фактора VIII ("Ф-VIII") и фрагмент фактора Виллебранда (ФВ), которые связаны ковалентной связью, при этом указанный фрагмент ФВ содержит домен D' и домен D3 ФВ и связывается с белком Ф-VIII.

2. Химерный белок по п.1, отличающийся тем, что указанный домен D' содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичную аминокислотам 764-866 из SEQ ID NO: 2, и/или указанный домен D3 содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотам 867-1240 из SEQ ID NO: 2.

3. Химерный белок по любому из пп.1, 2, отличающийся тем, что указанный белок Ф-VIII содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичную SEQ ID NO: 18, при этом указанный белок Ф-VIII обладает активностью Ф-VIII.

4. Химерный белок по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что указанный белок Ф-VIII содержит тяжелую цепь фактора VIII и легкую цепь фактора VIII, при этом указанная тяжелая цепь фактора VIII содержит аминокислоты 1-740 SEQ ID NO: 16 и указанная легкая цепь фактора VIII содержит аминокислоты 1649-2332.

5. Химерный белок по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что ковалентная связь предотвращает диссоциацию фрагмента ФВ от белка Ф-VIII в присутствии эндогенного ФВ.

6. Химерный белок по любому из пп.1-5, отличающийся тем, что указанный фрагмент ФВ предотвращает выведение белка Ф-VIII в процессе выведения ФВ или указанный фрагмент ФВ подавляет или предотвращает связывание эндогенного ФВ с белком Ф-VIII, экранируя или блокируя ФВ-связывающий участок на белке Ф-VIII.

7. Химерный белок по п.6, отличающийся тем, что ФВ-связывающий участок является аминокислотной последовательностью, соответствующей аминокислотам 1669-1689 и 2303-2332 из SEQ ID NO: 16.

8. Химерный белок по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что время полужизни белка Ф-VIII продлевается за пределы ограничения времени полужизни белка Ф-VIII в присутствии эндогенного ФВ.

9. Химерный белок по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что фрагмент ФВ содержит по меньшей мере один гетерологичный компонент (Н1) и необязательный линкер между фрагментом ФВ и указанным гетерологичным компонентом (Н1).

10. Химерный белок по п.9, отличающийся тем, что гетерологичный компонент (Н1) содержит константную область иммуноглобулина или ее часть, альбумин или его фрагмент, связывающее альбумин вещество, последовательность PAS, последовательность НАР, трансферрин или его фрагмент, полиэтиленгликоль (ПЭГ), полисиаловую кислоту, гидроксиэтиловый крахмал (ГЭК), их производные или любые комбинации этих компонентов.

11. Химерный белок по п.10, отличающийся тем, что указанный гетерологичный компонент (Н1) содержит первую Fc-область.

12. Химерный белок по п.9, отличающийся тем, что химерный белок содержит линкер между фрагментом ФВ и гетерологичным компонентом (Н1), который является отщепляемым линкером.

13. Химерный белок по любому из пп.1-12, отличающийся тем, что белок Ф-VIII дополнительно содержит по меньшей мере один гетерологичный компонент (Н2).

14. Химерный белок по п.13, отличающийся тем, что гетерологичный компонент (Н2) способен продлевать время полужизни белка Ф-VIII.

15. Химерный белок по п.13 или 14, отличающийся тем, что указанный гетерологичный компонент (Н2) содержит константную область иммуноглобулина или ее часть, альбумин или его фрагмент, полиэтиленгликоль (ПЭГ), полисиаловую кислоту, гидроксиэтиловый крахмал (ГЭК), его производное, связывающее альбумин вещество, последовательность PAS, последовательность НАР, трансферрин или его фрагмент или любые комбинации этих компонентов.

16. Химерный белок по п.13, отличающийся тем, что указанный гетерологичный компонент (Н2) содержит вторую Fc-область.

17. Химерный белок по любому из пп.1-16, который содержит первый полипептид, содержащий фрагмент ФВ, первый гетерологичный компонент и линкер, и второй полипептид, содержащий белок Ф-VIII и второй гетерологичный компонент, при этом первый полипептид и второй полипептид связаны друг с другом ковалентной связью.

18. Химерный белок по п.17, отличающийся тем, что указанные первый гетерологичный компонент и второй гетерологичный компонент связаны друг с другом ковалентной связью, при этом ковалентная связь препятствует замещению фрагмента ФВ в первом полипептиде эндогенным ФВ in vivo.

19. Химерный белок по любому из пп.13-18, отличающийся тем, что линкер между белком Ф-VIII и вторым гетерологичным компонентом является отщепляемым линкером.

20. Химерный белок по любому из пп.1-19, содержащий формулу, выбранную из:

(a) V-L1-H1-L3-C-L2-H2,

(b) H2-L2-C-L3-H1-L1-V,

(c) C-L2-H2-L3-V-L1-H1,

(d) H1-L1-V-L3-H2-L2-C,

(e) H1-L1-V-L3-C-L2-H2,

(f) H2-L2-C-L3-V-L1-H1,

(g) V-L1-H1-L3-H2-L2-C,

(h) C-L2-H2-L3-H1-L1-V,

(i) H2-L3-H1-L1-V-L2-C,

(j) C-L2-V-L1-H1-L3-H2,

(k) V-L2-C-L1-H1-L3-H2 и

(l) H2-L3-H1-L1-C-L2-V,

где V содержит указанный фрагмент ФВ, содержащий домен D' и домен D3 ФВ;

L1 является необязательным линкером;

L2 является необязательным линкером;

L3 в (a)-(f) является необязательным линкером,

L3 в (g)-(l) является необязательным scFc линкером,

каждый из Н1 или Н2 содержит необязательный гетерологичный компонент;

С содержит указанный белок Ф-VIII;

(-) представляет пептидную связь либо одну или более аминокислот.

21. Химерный белок по любому из пп.1-19, содержащий формулу, выбранную из:

(m) V-L1-H1:H2-L2-C,

(n) V-L1-H1:C-L2-H2;

(о) H1-L1-V:H2-L2-C;

(р) H1-L1-V:C-L2-H2;

(q) V:C-L1-H1:H2;

(r) V:H1-L1-C:H2;

(s) H2:H1-L1-C:V,

(t) C:V-L1-H1:H2 и

(u) C:H1-L1-V:H2,

где V является указанным фрагментом ФВ, содержащим домен D' и домен D3 ФВ;

L1 является необязательным линкером;

L2 является необязательным линкером;

Н1 является первым гетерологичным компонентом;

Н2 является вторым гетерологичным компонентом;

С является указанным белком Ф-VIII;

(-) представляет пептидную связь либо одну или более аминокислот;

(:) представляет ковалентную связь между Н1 и Н2.

22. Химерный белок по любому из пп.20-22, отличающийся тем, что Н1 содержит первую Fc-область, Н2 содержит вторую Fc-область или Н1 содержит первую Fc-область и Н2 содержит вторую Fc-область.

23. Химерный белок по любому из пп.1-22, отличающийся тем, что белок Ф-VIII содержит третий гетерологичный компонент (Н3), четвертый гетерологичный компонент (Н4), пятый гетерологичный компонент (Н5) или шестой гетерологичный компонент (Н6).

24. Химерный белок по пп.1-23, который дополнительно содержит линкер между белком Ф-VIII и указанным фрагментом ФВ.

25. Химерный белок по п.24, отличающийся тем, что линкер представляет собой распознающий сортазу мотив.

26. Химерный белок по любому из пп.1-25, отличающийся тем, что указанный фрагмент ФВ, по существу, состоит из домена D' и домена D3 ФВ.

27. Химерный белок по любому из пп.1-26, отличающийся тем, что указанный фрагмент ФВ содержит по меньшей мере одну аминокислотную замену в остатке, соответствующем остатку 1099, остатку 1142 либо обоим остаткам 1099 и 1142 из SEQ ID NO: 2.

28. Химерный белок по любому из пп.1-27, отличающийся тем, что последовательность указанного фрагмента ФВ содержит аминокислоты 764-1240 из SEQ ID NO: 2.

29. Химерный белок по любому из пп.1-28, отличающийся тем, что указанный фрагмент ФВ дополнительно содержит домен D1, домен D2 или домены D1 и D2 ФВ.

30. Химерный белок по любому из пп.1-29, отличающийся тем, что белок Ф-VIII содержит домен В или его часть.

31. Химерный белок по любому из пп.1-30, отличающийся тем, что белок Ф-VIII содержит одноцепочечный Ф-VIII или Ф-VIII с двумя цепями.

32. Химерный белок по любому из пп.1-31, отличающийся тем, что химерный белок не содержит фактор, ограничивающий время полужизни белка Ф-VIII.

33. Полинуклеотид или набор полинуклеотидов, которые кодируют химерный белок по любому из пп.1-32.

34. Вектор или набор векторов, которые содержат полинуклеотид или набор полинуклеотидов по п.33 и один или более промоторов, функционально связанных с полинуклеотидом или набором полинуклеотидов.

35. Клетка-хозяин, содержащая полинуклеотид или набор полинуклеотидов по п.39 или вектор или набор векторов по п.34.

36. Клетка-хозяин по п.35, которая является клеткой млекопитающего.

37. Клетка-хозяин по п.36, отличающаяся тем, что клетка млекопитающего выбрана из группы, состоящей из клетки HEK293, клетки СНО и клетки BHK.

38. Фармацевтический состав, содержащий химерный белок по любому из пп.1-32 и фармацевтически приемлемый носитель.

39. Фармацевтический состав, содержащий полинуклеотид или набор полинуклеотидов по п.33 и фармацевтически приемлемый носитель.

40. Способ предотвращения или подавления взаимодействия белка Ф-VIII с эндогенным ФВ, включающий введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества химерного белка по любому из пп.1-32, при этом указанный фрагмент ФВ предотвращает или подавляет взаимодействие белка Ф-VIII с эндогенным ФВ.

41. Способ предотвращения или подавления взаимодействия белка Ф-VIII с эндогенным ФВ, включающий введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества полинуклеотида или набора полинуклеотидов по п.33, при этом указанный фрагмент ФВ предотвращает или подавляет взаимодействие белка Ф-VIII с эндогенным ФВ.

42. Способ устранения или снижения фактора, ограничивающего время полужизни белка Ф-VIII, при этом данный способ включает введение эффективного количества химерного белка по любому из пп.1-32, при этом указанный химерный белок предотвращает или подавляет взаимодействие белка Ф-VIII с эндогенным ФВ.

43. Способ устранения или снижения фактора, ограничивающего время полужизни белка Ф-VIII, при этом указанный способ включает введение эффективного количества полинуклеотида или набора полинуклеотидов по п.33, при этом указанный химерный белок, кодируемый полинуклеотидом, предотвращает или подавляет взаимодействие белка Ф-VIII с эндогенным ФВ.

44. Способ продления или увеличения времени полужизни белка Ф-VIII, при этом указанный способ включает введение эффективного количества химерного белка по любому из пп.1-32, при этом фрагмент ФВ химерного белка предотвращает или подавляет взаимодействие белка Ф-VIII с эндогенным ФВ.

45. Способ продления или увеличения времени полужизни белка Ф-VIII, при этом указанный способ включает введение эффективного количества полинуклеотида или набора полинуклеотидов по п.33, при этом фрагмент ФВ химерного белка предотвращает или подавляет взаимодействие белка Ф-VIII с эндогенным ФВ.

46. Способ лечения заболевания или болезненного состояния, связанного с кровотечением, у нуждающегося в этом пациента, включающий введение эффективного количества химерного белка по любому из пп.1-32, при этом указанное заболевание или болезненное состояние, связанное с кровотечением, выбрано из группы, состоящей из нарушения свертываемости крови, гемартроза, мышечного кровотечения, кровотечения в полости рта, кровоизлияния, кровоизлияния в мышцы, кровоизлияния в полость рта, травмы, травмы головы, желудочно-кишечного кровотечения, внутричерепного кровоизлияния, кровоизлияния в брюшную полость, внутригрудного кровоизлияния, перелома кости, кровотечения в центральной нервной системе, кровотечения в заглоточном пространстве, кровотечения в забрюшинном пространстве, кровотечения во влагалище подвздошно-поясничной мышцы и любых их комбинаций.

47. Способ лечения заболевания или болезненного состояния, связанного с кровотечением, у нуждающегося в этом пациента, включающий введение эффективного количества полинуклеотида или набора полинуклеотидов по п.33, при этом указанное заболевание или болезненное состояние, связанное с кровотечением, выбрано из группы, состоящей из нарушения свертываемости крови, гемартроза, мышечного кровотечения, кровотечения в полости рта, кровоизлияния, кровоизлияния в мышцы, кровоизлияния в полость рта, травмы, травмы головы, желудочно-кишечного кровотечения, внутричерепного кровоизлияния, кровоизлияния в брюшную полость, внутригрудного кровоизлияния, перелома костей, кровотечения в центральной нервной системе, кровотечения в заглоточном пространстве, кровотечения в забрюшинном пространстве, кровотечения во влагалище подвздошно-поясничной мышцы и любых их комбинаций.

48. Способ получения химерного белка, включающий трансфекцию одной или более клеток-хозяев полинуклеотидом или набором нуклеотидов по п.33 или вектором или набором векторов по п.34 и экспрессию фрагмента ФВ или химерного белка в клетке-хозяине.

49. Способ конструирования химерного белка по любому из пп.1-32, включающий лигирование фрагмента ВФ с белком Ф-VIII ковалентной связью в присутствии фермента сортазы.

Увеличить масштаб


наверх