Бюллетень ЕАПВ "Изобретения (евразийские заявки и евразийские патенты)"
Бюллетень 07´2017

  

(11) 

027314 (13) B1       Разделы: A B C E F G H    

(21) 

201390638

(22) 

2011.11.09

(51) 

C12Q 1/68 (2006.01)
G01N 33/569
(2006.01)
G01N 33/68
(2006.01)

(31) 

PA 2010 01018

(32) 

2010.11.09

(33) 

DK

(43) 

2013.09.30

(86) 

PCT/DK2011/050423

(87) 

WO 2012/062325 2012.05.18

(71) 

(73) АРСЕДИ БАЙОТЕК АПС (DK)

(72) 

Эккельт Андреас, Кристенсен Бритта, Кельро Стен, Бринч Мари, Сингх Рипудаман, Хатт Лотте (DK)

(74) 

Медведев В.Н. (RU)

(54) 

СПОСОБЫ ВЫДЕЛЕНИЯ ФЕТАЛЬНОЙ КЛЕТКИ С ЭНДОТЕЛИАЛЬНЫМИ И ЭПИТЕЛИАЛЬНЫМИ СВОЙСТВАМИ И НАБОР ДЛЯ ИХ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

(57) 1. Способ выделения фетальной клетки с эндотелиальными и эпителиальными свойствами из пробы материнской крови, включающий стадии:

a) получения пробы материнской крови или ее фракции;

b) пермеабилизации клеток материнской крови;

c) контактирования пробы с гибридизационным зондом, включающим по меньшей мере 10 смежных нуклеотидов, комплементарных гену, кодирующему эндотелиальный клеточный маркер, или с лигандом, направленным на эндотелиальный клеточный маркер; и

d) отбора клеток, которые связываются с указанным зондом или лигандом эндотелиального клеточного маркера, обогащая таким образом пробу клетками с эндотелиальным фенотипом;

e) контактирования клеток, выбранных на стадии d), проявляющих эндотелиальный фенотип, с гибридизационным зондом, включающим по меньшей мере 10 смежных нуклеотидов, комплементарных гену, кодирующему эпителиальный клеточный маркер, или с лигандом, направленным на эпителиальный клеточный маркер;

f) обнаружения клеток с эндотелиальным фенотипом, которые также связываются с указанным зондом или лигандом указанного эпителиального клеточного маркера со стадии е),

где эндотелиальный клеточный маркер выбран из группы, состоящей из CD105, CD146 или CD141, виментина, VCAM, ICAM, VEGFR-1, VEGFR-2, VEGFR-3, ITGA5, ITGB5, CDH11 или CDH3, эпителиальный клеточный маркер выбран из группы, состоящей из CK1, CK2, CK3, CK4, CK5, CK6, CK7, CK8, CK9, CK10, CK13, CK14, CK15, CK16, CK17, CK18 или CK19.

2. Способ выделения фетальной клетки с эндотелиальными и эпителиальными свойствами из пробы материнской крови, включающий стадии:

a) получения пробы материнской крови или ее фракции;

b) пермеабилизации клеток материнской крови;

c) контактирования пробы с гибридизационным зондом, включающим по меньшей мере 10 смежных нуклеотидов, комплементарных гену, кодирующему эпителиальный клеточный маркер, или с лигандом, направленным на эпителиальный клеточный маркер;

d) отбора клеток, которые связываются с указанным зондом или лигандом эпителиального клеточного маркера, обогащая таким образом пробу клетками с эпителиальным фенотипом;

e) контактирования клеток, выбранных на стадии d), проявляющих эпителиальный фенотип, с гибридизационным зондом, включающим по меньшей мере 10 смежных нуклеотидов, комплементарных гену, кодирующему эндотелиальный клеточный маркер, или с лигандом, направленным на эндотелиальный клеточный маркер; и

f) обнаружения клеток с эпителиальным фенотипом, которые также связываются с указанным зондом или лигандом указанного эндотелиального клеточного маркера со стадии е), где эндотелиальный клеточный маркер выбран из группы, состоящей из CD105, CD146 или CD141, виментина, VCAM, ICAM, VEGFR-1, VEGFR-2, VEGFR-3, ITGA5, ITGB5, CDH11 или CDH3, эпителиальный клеточный маркер выбран из группы, состоящей из CK1, CK2, CK3, CK4, CK5, CK6, CK7, CK8, CK9, CK10, CK13, CK14, CK15, CK16, CK17, CK18 или CK19.

3. Способ выделения фетальной клетки с эндотелиальными и эпителиальными свойствами из пробы материнской крови, включающий стадии:

a) получения пробы материнской крови или ее фракции;

b) пермеабилизации клеток материнской крови;

c) контактирования пробы с

i) с гибридизационным зондом, включающим по меньшей мере 10 смежных нуклеотидов, комплементарных гену, кодирующему эндотелиальный клеточный маркер, или с лигандом, направленным на эндотелиальный клеточный маркер; и

ii) с гибридизационным зондом, включающим по меньшей мере 10 смежных нуклеотидов, комплементарных гену, кодирующему эпителиальный клеточный маркер, или с лигандом, направленным на эпителиальный клеточный маркер;

d) отбора клеток, которые связываются с

i) указанным зондом или лигандом эндотелиального клеточного маркера и

ii) указанным зондом или лигандом указанного эпителиального клеточного маркера,

обогащая таким образом пробу клетками, как с эндотелиальным, так и с эпителиальным фенотипом,

где эндотелиальный клеточный маркер выбран из группы, состоящей из CD105, CD146 или CD141, виментина, VCAM, ICAM, VEGFR-1, VEGFR-2, VEGFR-3, ITGA5, ITGB5, CDH11 или CDH3, эпителиальный клеточный маркер выбран из группы, состоящей из CK1, CK2, CK3, CK4, CK5, CK6, CK7, CK8, CK9, CK10, CK13, CK14, CK15, CK16, CK17, CK18 или CK19.

4. Способ по любому из пп.1-3, в котором мишень эндотелиального маркера располагается на поверхности идентифицируемой клетки.

5. Способ по любому из пп.1-3, в котором мишень эпителиального маркера располагается внутри идентифицируемой клетки.

6. Способ по любому из пп.1-2, который дополнительно включает стадию диагностирования генетического содержания клеток, обнаруженных на стадии f).

7. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором проба материнской крови представляет собой цельную кровь.

8. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором клетки в пробе подвергают стадии фиксирования после стадии d).

9. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором эндотелиальный клеточный маркер выбран из группы, состоящей из CD105, CD146 или CD141.

10. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором эндотелиальный клеточный маркер представляет собой CD105.

11. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором эпителиальный клеточный маркер выбран из группы, состоящей из CK8, CK18, CK19 или CK7.

12. Набор для выделения фетальной клетки с эндотелиальными и эпителиальными свойствами из пробы материнской крови, где указанный набор включает:

а)

i) гибридизационный зонд, включающий по меньшей мере 10 смежных нуклеотидов, комплементарных гену, кодирующему эпителиальный клеточный маркер, или

ii) лиганд, направленный на эпителиальный клеточный маркер;

b)

i) гибридизационный зонд, включающий по меньшей мере 10 смежных нуклеотидов, комплементарных гену, кодирующему эндотелиальный клеточный маркер, или

ii) лиганд, направленный на эндотелиальный клеточный маркер; и

с) инструкции по применению, где эндотелиальный клеточный маркер выбран из группы, состоящей из CD105, CD146 или CD141, виментина, VCAM, ICAM, VEGFR-1, VEGFR-2, VEGFR-3, ITGA5, ITGB5, CDH11 или CDH3, эпителиальный клеточный маркер выбран из группы, состоящей из CK1, CK2, CK3, CK4, CK5, CK6, CK7, CK8, CK9, CK10, CK13, CK14, CK15, CK16, CK17, CK18 или CK19.


наверх