Бюллетень ЕАПВ "Изобретения (евразийские заявки и патенты)"
Бюллетень 02´2017

  

(11) 

025894 (13) B1       Разделы: A B C D E F G H    

(21) 

201391492

(22) 

2012.04.25

(51) 

C12N 15/113 (2010.01)
A61P 35/00
(2006.01)

(31) 

61/478,767; 61/565,779

(32) 

2011.04.25; 2011.12.01

(33) 

US

(43) 

2014.04.30

(86) 

PCT/US2012/034880

(87) 

WO 2012/148952 2012.11.01

(71) 

(73) РЕГУЛУС ТЕРАПЬЮТИКС ИНК. (US)

(72) 

Бхат Балкришен (US)

(74) 

Поликарпов А.В. (RU)

(54) 

СОЕДИНЕНИЯ НА ОСНОВЕ МИКРО-РНК И СПОСОБЫ МОДУЛИРОВАНИЯ АКТИВНОСТИ MIR-21

(57) 1. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 16-22 связанных нуклеозидов, где нуклеотидная последовательность модифицированного олигонуклеотида комплементарна miR-21 (SEQ ID NO:1), и где модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере 16 смежных нуклеозидов следующего нуклеозидного паттерна I в ориентации 5'-3':

(R)x-NB-NQ-NQ-NB-(NQ-NQ-NQ-NB)3-NQ-NZ,

где каждый R независимо представляет собой небициклический нуклеозид;

X равен от 1 до 4;

каждый NB независимо представляет собой бициклический нуклеозид;

каждый NQ независимо представляет собой небициклический нуклеозид;

NZ представляет собой модифицированный нуклеозид, и

где

1) каждый бициклический нуклеозид содержит неметилированное нуклеиновое основание или

2) не более двух небициклических нуклеозидов представляют собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозиды и каждый другой небициклический нуклеозид представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид.

2. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 16-19 связанных нуклеозидов, где нуклеотидная последовательность модифицированного олигонуклеотида комплементарна miR-21 (SEQ ID NO:1) и где модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере 16 смежных нуклеозидов следующего нуклеозидного паттерна II в ориентации 5'-3':

NM-NB-NQ-NQ-NB-(NQ-NQ-NQ-NB)3-NQ-NZ,

где NM независимо представляет собой модифицированный нуклеозид, не являющийся бициклическим нуклеозидом;

каждый NB независимо представляет собой бициклический нуклеозид;

каждый NQ независимо представляет собой небициклический нуклеозид;

NZ представляет собой модифицированный нуклеозид, и

где

1) каждый бициклический нуклеозид содержит неметилированное нуклеиновое основание или

2) не более двух небициклических нуклеозидов представляют собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозиды и каждый другой небициклический нуклеозид представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид.

3. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 16-19 связанных нуклеозидов, где нуклеотидная последовательность модифицированного олигонуклеотида комплементарна miR-21 (SEQ ID NO:1) и где модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере 16 смежных нуклеозидов следующего нуклеозидного паттерна III в ориентации 5'-3':

(R)X-NB-NQ-NQ-NB-(NQ-NQ-NQ-NB)3-NY-NZ,

где каждый R представляет собой небициклический нуклеозид;

X равен от 1 до 4;

каждый NB представляет собой бициклический нуклеозид;

каждый NQ представляет собой небициклический нуклеозид;

NY представляет собой модифицированный нуклеозид или немодифицированный нуклеозид и

NZ представляет собой модифицированный нуклеозид, и

где

1) каждый бициклический нуклеозид содержит неметилированное нуклеиновое основание или

2) не более двух небициклических нуклеозидов представляют собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозиды, и каждый другой небициклический нуклеозид представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид.

4. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 16-19 связанных нуклеозидов, где нуклеотидная последовательность модифицированного олигонуклеотида комплементарна miR-21 (SEQ ID NO:1) и где модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере 16 смежных нуклеозидов следующего нуклеозидного паттерна IV в ориентации 5'-3':

NM-NB-NQ-NQ-NB-(NQ-NQ-NQ-NB)3-NY-NZ,

где NM представляет собой модифицированный нуклеозид, не являющийся бициклическим нуклеозидом;

каждый NB представляет собой бициклический нуклеозид;

каждый NQ представляет собой небициклический нуклеозид;

NY представляет собой модифицированный нуклеозид или немодифицированный нуклеозид и

NZ представляет собой модифицированный нуклеозид, и

где

1) каждый бициклический нуклеозид содержит неметилированное нуклеиновое основание, или

2) не более двух небициклических нуклеозидов представляют собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозиды и каждый другой небициклический нуклеозид представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид.

5. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 16-19 связанных нуклеозидов, где нуклеотидная последовательность модифицированного олигонуклеотида комплементарна miR-21 (SEQ ID NO:1) и где модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере 16 смежных нуклеозидов следующего нуклеозидного паттерна V в ориентации 5'-3':

NM-NB-(NQ-NQ-NB-NB)4-NZ,

где NM представляет собой модифицированный нуклеозид, не являющийся бициклическим нуклеозидом;

каждый NB представляет собой бициклический нуклеозид;

каждый NQ представляет собой небициклический нуклеозид и

NZ представляет собой модифицированный нуклеозид.

6. Соединение по любому из пп.1-5, где модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21 или 22 смежных нуклеозида нуклеозидного паттерна I, II, III, IV или V.

7. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где нуклеотидная последовательность модифицированного олигонуклеотида по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или на 100% комплементарна нуклеотидной последовательности miR-21 (SEQ ID NO:1).

8. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где каждый бициклический нуклеозид независимо выбран из LNA-нуклеозида, cEt-нуклеозида и ENA-нуклеозида.

9. Соединение по любому из пп.1-7, где каждый бициклический нуклеозид представляет собой S-cEt-нуклеозид.

10. Соединение по любому из пп.1-7, где каждый бициклический нуклеозид представляет собой LNA-нуклеозид.

11. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где каждый небициклический нуклеозид независимо выбран из β-D-дезоксирибонуклеозида и 2'-О-метоксиэтилнуклеозида.

12. Соединение по любому из пп.1-10, где каждый небициклический нуклеозид представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид.

13. Соединение по любому из пп.1-10, где каждый небициклический нуклеозид представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид.

14. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 связанных нуклеозидов нуклеозидного паттерна I, II, III, IV или V.

15. Соединение по любому из пп.1-14, где по меньшей мере один цитозин представляет собой 5-метилцитозин или где каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

16. Соединение по п.1, где:

a) R состоит из четырех связанных нуклеозидов NR1-NR2-NR3-NR4, где NR1 представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид, и каждый NR2-NR3-NR4 представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид;

каждый NB представляет собой S-cEt-нуклеозид;

каждый NQ представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид;

NZ представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

b) каждый R представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

X равен 1;

каждый NB представляет собой S-cEt-нуклеозид;

каждый NQ представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид;

NZ представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

c) каждый R представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

X равен 1;

каждый NB представляет собой S-cEt-нуклеозид;

каждый NQ представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

NZ представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

d) каждый R представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

X равен 1;

каждый NB представляет собой S-cEt-нуклеозид;

каждый NQ представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид;

NZ представляет собой S-cEt-нуклеозид;

e) каждый R представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

X равен 1;

каждый NB представляет собой LNA-нуклеозид;

каждый NQ представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид;

NZ представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид; или

f) каждый R представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

X равен 1;

каждый NB представляет собой LNA-нуклеозид;

каждый NQ представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид; и

NZ представляет собой LNA-нуклеозид.

17. Соединение по п.1, где модифицированный олигонуклеотид имеет структуру, выбранную из

TEMeCEAEAECSAETECSAEGETECSTEGEAEUSAEAEGECSTEAE и TEMeCAACSATCSAGTCSTGAUSAAGCSTAE,

где нуклеозиды без последующего нижнего индекса означают β-D-дезоксирибонуклеозиды; нуклеозиды с последующим нижним индексом "Е" означают 2'-МОЕ-нуклеозиды; нуклеозиды с последующим нижним индексом "S" означают S-cEt-нуклеозиды и верхний индекс "Me" означает 5-метильную группу при основании нуклеозида.

18. Соединение по п.2, где:

a) NM представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

каждый NB представляет собой S-cEt-нуклеозид;

каждый NQ представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид;

NZ представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

b) NM представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

каждый NB представляет собой S-cEt-нуклеозид;

каждый NQ представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

NZ представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

c) NM представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

каждый NB представляет собой S-cEt-нуклеозид;

каждый NQ представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид;

каждый N представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид;

NZ представляет собой S-cEt-нуклеозид;

d) NM представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

каждый NB представляет собой LNA-нуклеозид;

каждый NQ представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид;

NZ представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид; или

e) NM представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

каждый NB представляет собой LNA-нуклеозид;

каждый NQ представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид;

NZ представляет собой LNA-нуклеозид.

19. Соединение по п.2, где модифицированный олигонуклеотид имеет структуру, выбранную из

AECSATCSAGTCSTGAUSAAGCSTAE,

AECSAETECSAEGETECSTEGEAEUSAEAEGECSTEAE,

AEMeCSATMeCSAGTMeCSTGATSAAGMeCSTAE,

AECSATCSAGTCSTGAUSAAGCSTAS и

AEMeCSATMeCSAGTMeCSTGATSAAGMeCSTAS,

где нуклеозиды без последующего нижнего индекса означают β-D-дезоксирибонуклеозиды; нуклеозиды с последующим нижним индексом "Е" означают 2'-МОЕ-нуклеозиды; нуклеозиды с последующим нижним индексом "S" означают S-cEt-нуклеозиды и верхний индекс "Me" означает 5-метильную группу при основании нуклеозида.

20. Соединение по п.19, где модифицированный олигонуклеотид имеет структуру

AECSATCSAGTCSTGAUSAAGCSTAE,

где нуклеозиды без последующего нижнего индекса означают β-D-дезоксирибонуклеозиды; нуклеозиды с последующим нижним индексом "Е" означают 2'-МОЕ-нуклеозиды и нуклеозиды с последующим нижним индексом "S" означают S-cEt-нуклеозиды.

21. Соединение по п.3, где:

a) каждый R представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

X равен 1;

каждый NB представляет собой S-cEt-нуклеозид;

каждый NQ представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид;

NY представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид;

NZ представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

b) каждый R представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

X равен 1;

каждый NB представляет собой S-cEt-нуклеозид;

каждый NQ представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид;

NY представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид;

NZ представляет собой S-cEt-нуклеозид; или

c) каждый R представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

X равен 1;

каждый NB представляет собой S-cEt-нуклеозид;

каждый NQ представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид;

NY представляет собой S-cEt-нуклеозид;

NZ представляет собой S-cEt-нуклеозид.

22. Соединение по п.4, где:

a) NM представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

каждый NB представляет собой S-cEt-нуклеозид;

каждый NQ представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид;

NY представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид;

NZ представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

b) NM представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

каждый NB представляет собой S-cEt-нуклеозид;

каждый NQ представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид;

NY представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид;

NZ представляет собой S-cEt-нуклеозид;

c) NM представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

каждый NB представляет собой S-cEt-нуклеозид;

каждый NQ представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид;

NY представляет собой S-cEt-нуклеозид; и

NZ представляет собой S-cEt-нуклеозид.

23. Соединение по п.5, где

NM представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид;

каждый NB представляет собой S-cEt-нуклеозид;

каждый NQ представляет собой β-D-дезоксирибонуклеозид;

NZ представляет собой 2'-О-метоксиэтилнуклеозид.

24. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где модифицированный олигонуклеотид имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:3 или где модифицированный олигонуклеотид имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:4 и где каждый Т в последовательности независимо выбран из Т и U.

25. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где по меньшей мере одна межнуклеозидная связь является модифицированной межнуклеозидной связью или где каждая межнуклеозидная связь представляет собой модифицированную межнуклеозидную связь и где модифицированная межнуклеозидная связь возможно представляет собой фосфотиоатную межнуклеозидную связь.

26. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид

AECSATCSAGTCSTGAUSAAGCSTAE,

где нуклеозиды без последующего нижнего индекса означают β-D-дезоксирибонуклеозиды; нуклеозиды с последующим нижним индексом "Е" означают 2'-МОЕ-нуклеозиды и нуклеозиды с последующим нижним индексом "S" означают S-cEt-нуклеозиды и где каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь.

27. Соединение, состоящее из модифицированного олигонуклеотида

AECSATCSAGTCSTGAUSAAGCSTAE,

где нуклеозиды без последующего нижнего индекса означают β-D-дезоксирибонуклеозиды; нуклеозиды с последующим нижним индексом "Е" означают 2'-МОЕ-нуклеозиды; нуклеозиды с последующим нижним индексом "S" означают S-cEt-нуклеозиды и где каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь.

28. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по п.26 или 27 и фармацевтически приемлемый носитель.

29. Применение соединения по любому из пп.1-27 в изготовлении лекарственного средства для ингибирования активности miR-21 в клетке, где лекарственное средство предназначено для приведения в контакт с клеткой.

30. Применение по п.29, отличающееся тем, что клетка находится в условиях in vivo или клетка находится в условиях in vitro.

31. Применение по п.29 или 30, отличающееся тем, что клетка представляет собой фибробласт, клетку, характеризующуюся гиперпролиферацией, кератиноцит или клетку, находящуюся под действием гипоксии.

32. Применение соединения по любому из пп.1-27 в изготовлении лекарственного средства для снижения экспрессии коллагена в клетке, где лекарственное средство предназначено для приведения в контакт с клеткой.

33. Применение соединения по любому из пп.1-27 в изготовлении лекарственного средства для лечения, предупреждения или отсрочки начала развития заболевания, ассоциированного с miR-21, у субъекта, имеющего заболевание, ассоциированное с miR-21, где лекарственное средство предназначено для введения субъекту, имеющему заболевание, ассоциированное с miR-21.

34. Применение по п.33, отличающееся тем, что заболевание представляет собой фиброз.

35. Применение по п.34, отличающееся тем, что фиброз выбирают из фиброза почек, фиброза легких, фиброза печени, фиброза сердца, фиброза кожи, возрастного фиброза, фиброза селезенки, склеродермии и посттрансплантационного фиброза.

36. Применение по п.35, отличающееся тем, что

a) у субъекта, имеющего заболевание, выбранное из гломерулосклероза, тубулоинтерстициального фиброза, IgA-нефропатии, интерстициального фиброза/тубулярной атрофии; хронического повреждения почек, поражения нефронов, гломерулонефрита, сахарного диабета, идиопатического фокально-сегментарного гломерулосклероза, мембранозной нефропатии, коллабирующей гломерулопатии, хронической рецидивирующей инфекции почек и терминальной стадии почечной недостаточности, присутствует фиброз почек;

b) фиброз почек возникает в результате острой или повторной травмы почек;

c) у субъекта, имеющего заболевание, выбранное из хронического повреждения печени, инфекционного гепатита, неалкогольного стеатогепатита и цирроза, присутствует фиброз печени; легочный фиброз представляет собой идиопатический легочный фиброз; и/или

d) субъект имеет хроническое обструктивное заболевание легких.

37. Применение соединения по любому из пп.1-27 в изготовлении лекарственного средства для лечения фибропролиферативного нарушения у субъекта, где лекарственное средство предназначено для введения субъекту.

38. Применение по любому из пп.33-37, включающее отбор субъекта, имеющего повышенную экспрессию miR-21 в одной или нескольких тканях.

39. Применение по любому из пп.33-37, отличающееся тем, что субъект нуждается в улучшенной функции органов, где функцию органов выбирают из функции сердца, функции легких, функции печени и функции почек.

40. Применение по любому из пп.33-39, отличающееся тем, что введение улучшает функцию органов у субъекта, где функцию органа выбирают из функции сердца, функции легких, функции печени и функции почек.

41. Применение по любому из пп.33-40, где указанное лечение включает введение по меньшей мере одного терапевтического средства, выбранного из противовоспалительного средства, иммуносупрессивного средства, противодиабетического средства, дигоксина, вазодилататора, ингибиторов ангиотензин-II-превращающего фермента (АСЕ), блокаторов рецепторов ангиотензина II (ARB), блокатора кальциевых каналов, динитрата изосорбида, гидралазина, нитрата, гидралазина, бета-блокатора, натрийуретических пептидов, гепариноида и ингибитора фактора роста соединительной ткани.

42. Применение по п.41, где указанное терапевтическое средство представляет собой по меньшей мере один ингибитор АСЕ.

43. Применение по п.42, где ингибитор АСЕ выбран из каптоприла, эналаприла, лизиноприла, беназеприла, хинаприла, фозиноприла и рамиприла.

44. Применение по п.41, включающее введение по меньшей мере одного ингибитора ARB.

45. Применение по п.44, где ингибитор ARB выбран из кандесартана, ирбесартана, олмесартана, лозартана, валсартана, телмисартана и эпросартана.

46. Применение по п.33, отличающееся тем, что заболевание представляет собой рак и/или включает метастазирование.

47. Применение по п.46, отличающееся тем, что рак представляет собой рак печени, рак молочной железы, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, рак толстой кишки, рак легких, рак головного мозга, гемобластоз, рак поджелудочной железы, рак головы и шеи, рак языка, рак желудка, рак кожи или рак щитовидной железы.

48. Применение по любому из пп.46 или 47, где указанное лечение дополнительно включает введение субъекту по меньшей мере одного дополнительного средства противораковой терапии.

49. Применение по п.33, где заболевание представляет собой заболевание сердца.

50. Применение по любому из пп.33-49, отличающееся тем, что субъект является человеком.

51. Применение по любому из пп.33-50, отличающееся тем, что соединение представлено в виде фармацевтической композиции.

52. Применение соединения по любому из пп.1-27 в терапии.

53. Применение соединения по любому из пп.1-27 для получения лекарственного препарата.

54. Применение соединения по любому из пп.1-27 для получения лекарственного препарата для стимулирования заживления ран.


наверх