Бюллетень ЕАПВ "Изобретения (евразийские заявки и евразийские патенты)"
Бюллетень 01´2017

  

(11) 

025786 (13) B1       Разделы: A B C D E F G H    

(21) 

201391400

(22) 

2012.03.29

(51) 

A61K 47/48 (2006.01)
A61P 35/00
(2006.01)

(31) 

61/468,981; 61/468,997

(32) 

2011.03.29

(33) 

US

(43) 

2014.02.28

(86) 

PCT/US2012/031253

(87) 

WO 2012/135522 2012.10.04

(71) 

(73) ИММУНОДЖЕН, ИНК. (US)

(72) 

Цзинь Шэнцзинь (US)

(74) 

Медведев В.Н. (RU)

(54) 

СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА КОНЪЮГАТОВ С УЛУЧШЕННОЙ ГОМОГЕННОСТЬЮ

(57) 1. Способ получения связывающего клетку полипептида с присоединенным к нему линкером, включающий приведение связывающего клетку полипептида с бифункциональным реагентом, образующим перекрестные связи, содержащим группу N-сукцинимидилового эфира, группу N-сульфосукцинимидилового эфира, часть на основе малеимида или часть на основе галоацетила, при температуре приблизительно 15°С или менее для ковалентного присоединения линкера к связывающему клетку полипептиду с получением тем самым смеси, включающей связывающие клетку полипептиды с присоединенными к ним линкерами.

2. Способ по п.1, где способ дополнительно включает конъюгирование цитотоксического агента со связывающими клетку полипептидами с присоединенными к ним линкерами путем осуществления реакции связывающих клетку полипептидов с присоединенными к ним линкерами с цитотоксическим агентом в растворе с рН от приблизительно 4 до приблизительно 9 с получением смеси, включающей (i) связывающий клетку полипептид, химически соединенный посредством линкера с цитотоксическим агентом, (ii) несвязанный цитотоксический агент и (iii) побочные продукты реакции, и подвергание указанной смеси, включающей (i) связывающий клетку полипептид, химически соединенный посредством линкера с цитотоксическим агентом, (ii) несвязанный цитотоксический агент и (iii) побочные продукты реакции, фильтрации тангенциальными потоками, избирательной преципитации, неадсорбционной хроматографии, адсорбционной фильтрации, адсорбционной хроматографии или их комбинации, для очистки связывающих клетку полипептидов, химически связанных посредством линкеров с цитотоксическим агентом, от других компонентов смеси с получением тем самым очищенной смеси связывающих клетку полипептидов, химически связанных посредством линкеров с цитотоксическим агентом.

3. Способ по п.2, где способ дополнительно включает подвергание смеси, включающей связывающие клетку полипептиды с присоединенными к ним линкерами, фильтрации тангенциальными потоками, избирательной преципитации, неадсорбционной хроматографии, адсорбционной фильтрации, адсорбционной хроматографии или их комбинации, для приготовления очищенной смеси связывающих клетку полипептидов с присоединенными к ним линкерами до конъюгирования цитотоксического агента со связывающими клетку полипептидами с присоединенными к ним линкерами в указанной очищенной смеси.

4. Способ по п.2 или 3, где цитотоксический агент выбирают из группы, состоящей из майтансиноидов, таксанов, СС1065 и аналогов перечисленных веществ.

5. Способ по п.4, где цитотоксический агент представляет собой майтансиноид.

6. Способ по п.5, где майтансиноид включает тиоловую группу.

7. Способ по п.6, где майтансиноид представляет собой DM1 или DM4.

8. Способ по любому из пп.1-7, где приведение в контакт на стадии (а) происходит в растворе, имеющем рН от приблизительно 7,5 до приблизительно 9.

9. Способ по п.8, где рН составляет приблизительно 7,8.

10. Способ по п.8 или 9, где раствор включает буферный агент, выбранный из цитратного буфера, ацетатного буфера, сукцинатного буфера и фосфатного буфера.

11. Способ по п.8 или 9, где раствор включает буферный агент, выбранный из группы, состоящей из HEPPSO (N-(2-гидроксиэтил)пиперазин-N'-(2-гидроксипропансульфоновая кислота)), POPSO (пиперазин-1,4-бис-(2-гидроксипропансульфоновая кислота) дегидрата), HEPES (4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-этансульфоновая кислота), HEPPS (EPPS) (4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-пропансульфоновая кислота), TES (N-[трис(гидроксиметил)метил]-2-аминоэтансульфоновая кислота) и их комбинации.

12. Способ по любому из пп.1-11, где указанное приведение в контакт происходит при температуре от приблизительно -10°С до приблизительно 15°С.

13. Способ по п.12, где температура составляет приблизительно 10°С.

14. Способ по любому из пп.1-13, где связывающий клетку полипептид выбирают из группы, состоящей из антител, интерферонов, интерлейкина 2 (IL-2), интерлейкина 3 (IL-3), интерлейкина 4 (IL-4), интерлейкина 6 (IL-6), инсулина, EGF, TGF-α, FGF, G-CSF, VEGF, MCSF, GM-CSF и трансферрина.

15. Способ по п.14, где связывающий клетку полипептид представляет собой антитело.

16. Способ по п.15, где антитело представляет собой моноклональное антитело.

17. Способ по п.16, где антитело представляет собой гуманизированное моноклональное антитело.

18. Способ по любому из пп.15-17, где антитело выбирают из группы, состоящей из huN901, huMy9-6, huB4, huC242, трастузумаба, биватузумаба, сибротузумаба, CNTO95, huDS6, ритуксимаба, антитела к CD27L, антитела к Her2, антитела к EGFR, антитела к EGFRvIII, Cripto, антитела к CD138, антитела к CD38, антитела к EphA2, интегрин-связующего антитела, антитела к CD37, антитела к фолату, антитела к Her3 и антитела к IGFIR.

19. Способ по п.1, где бифункциональный реагент, образующий перекрестные связи, включает часть на основе малеимида.

20. Способ по п.19, где бифункциональный реагент, образующий перекрестные связи, выбирают из группы, состоящей из N-сукцинимидил 4-(малеимидометил)циклогексанкарбоксилата (SMCC), N-сукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбокси-(6-амидокапроата) (LC-SMCC), k-малеимидоундеканоевой кислоты N-сукцинимидилового эфира (KMUA), γ-малеимидобутирата N-сукцинимидилового эфира (GMBS), β-малеимидопропилокси-сукцинимидилового эфира (BMPS), e-малеимидокапроновой кислоты N-гидроксисукцинимидного эфира (EMCS), m-малеимидобензоил-N-гидроксисукцинимидного эфира (MBS), N-(α-малеимидоацетокси)сукцинимидного эфира (AMAS), сукцинимидил-6-(β-малеимидопропионами­до)гексаноата (SMPH), N-сукцинимидил 4-(p-малеимидофенил)бутирата (SMPB) и N-(p-малеимидофе­нил)изоцианата (PMPI), сульфо-Mal, PEG4-Mal и CX1-1.

21. Способ по п.20, где бифункциональный реагент, образующий перекрестные связи, представляет собой N-сукцинимидил-4-(малеимидометил)циклогексанкарбоксилат (SMCC).


наверх