Бюллетень ЕАПВ "Изобретения (евразийские заявки и евразийские патенты)"
Бюллетень 07´2016

  

(11) 

023910 (13) B1       Разделы: A B C D E F G H    

(21) 

200970647

(22) 

2007.12.27

(51) 

C12Q 1/68 (2006.01)
C12N 15/82
(2006.01)
A01H 5/10
(2006.01)
A01H 5/02
(2006.01)

(31) 

60/882,279

(32) 

2006.12.28

(33) 

US

(43) 

2010.02.26

(86) 

PCT/US2007/088902

(87) 

WO 2008/083198 2008.07.10

(71) 

(73) ПАЙОНИР ХАЙ-БРЕД ИНТЕРНЭШНЛ, ИНК. (US)

(72) 

Эль Сайед Садик, Хофт Эрик, Ли Цзэнлу, Тульзиерам Ломас (US)

(74) 

Медведев В.Н. (RU)

(54) 

СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ РАСТЕНИЯ ПОДСОЛНЕЧНИКА ИЛИ ЗАРОДЫШЕВОЙ ПЛАЗМЫ ПОДСОЛНЕЧНИКА, ИМЕЮЩЕГО УСТОЙЧИВОСТЬ К OROBANCHE

(57) 1. Способ идентификации растения подсолнечника (Helianthus) или зародышевой плазмы подсолнечника, имеющего фенотип системы II устойчивости к Orobanche, включающий обнаружение у растения подсолнечника или зародышевой плазмы подсолнечника по меньшей мере одного однонуклеотидного полиморфизма (SNP) маркерного локуса, который ассоциирован с указанным фенотипом, где маркерный локус представлен последовательностью SEQ ID NO: 2, или обладает частотой рекомбинации менее чем 5% относительно маркерного локуса SEQ ID NO: 2 и картирован в группе сцепления 4 Helianthus annuus.

2. Способ по п.1, в котором обнаружение включает амплификацию маркерного локуса или части маркерного локуса и детекцию полученного амплифицированного ампликона маркера.

3. Способ по п.2, в котором амплификация включает:

a) смешивание праймера для амплификации или пары праймеров для амплификации с нуклеиновой кислотой, изолированной от растения подсолнечника или зародышевой плазмы, причем праймер или пара праймеров являются комплементарными или частично комплементарными по меньшей мере к части маркерного локуса и способны к инициации полимеризации ДНК посредством ДНК-полимеразы, используя нуклеиновую кислоту подсолнечника в качестве матрицы; и

b) удлинение праймера или пары праймеров в реакции полимеризации ДНК, содержащей ДНК-полимеразу и матричную нуклеиновую кислоту, для получения по меньшей мере одного ампликона.

4. Способ по п.3, в котором праймер или пара праймеров выбраны из группы, состоящей из SEQ ID NO: 5, 6, 9 и 10.

5. Способ селекции растений подсолнечника на устойчивость к Orobanche, включающий скрещивание растения подсолнечника, идентифицированного способом по п.1, со вторым растением подсолнечника, которое проявляет меньшую устойчивость к Orobanche, чем растение, идентифицированное способом по п.1, и отбор потомства с устойчивостью к Orobanche, полученного в результате данного скрещивания, путем анализа образцов ДНК, выделенных из одного или более растений потомства с идентификацией растения, содержащего по меньшей мере один полиморфизм маркерного локуса SEQ ID NO: 2, ассоциированный с устойчивостью к Orobanche.

6. Способ по п.5, дополнительно включающий одну или несколько стадий обратного скрещивания, самоопыления и случайного скрещивания и селекции растений, полученных способом по п.5.

7. Способ по п.5, где указанное идентифицированное растение дополнительно содержит систему I устойчивости к Orobanche.

8. Способ идентификации фрагмента нуклеиновой кислоты растения подсолнечника в качестве маркера чувствительности или маркера системы II устойчивости к Orobanche, который включает обеспечение взаимодействия указанного фрагмента нуклеиновой кислоты с последовательностями маркерного локуса, выбранными из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 или 2, и определение на основе взаимодействия указанного фрагмента и указанных маркерных последовательностей наличия у фрагмента одного или нескольких полиморфизмов SEQ ID NO: 2 относительно SEQ ID NO: 1, где наличие одного или нескольких указанных полиморфизмов является показателем устойчивости к Orobanche, и отсутствие указанных полиморфизмов показателем чувствительности к Orobanche.

9. Применение генетического маркера, связанного с системой II устойчивости к Orobanche и картированного в группе сцепления 4 Helianthus annuus, содержащего нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 2 или ее вариант, который сохраняет по меньшей мере один из полиморфизмов SEQ ID NO: 2 относительно SEQ ID NO: 1, для получения дополнительных маркеров устойчивости к Orobanche.

10. Способ снижения существующего семенного фонда Orobanche в почве, включающий выращивание растения подсолнечника, содержащего маркер системы II устойчивости к Orobanche, который содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 2, или ее вариант, который сохраняет по меньшей мере один полиморфизм последовательности SEQ ID NO: 2 относительно SEQ ID NO: 1.

11. Способ идентификации генов или кластеров генов в геноме растения подсолнечника, обеспечивающих устойчивость к Orobanche, включающий амплификацию хромосомного участка, идентифицированного посредством гибридизации с праймером, выбранным из группы, состоящей из SEQ ID NO: 5, 6, 9 или 10.

12. Способ по п.11, дополнительно включающий последовательные раунды скрининга и изоляции клонов для составления контига, содержащего открытую рамку считывания.

13. Применение гена или кластеров генов, идентифицируемых способом по п.11, для получения трансгенных растений подсолнечника, устойчивых к Orobanche.

14. Растение, полученное способом по любому из пп.5, 6.

15. Растение, идентифицированное способом по любому из пп.1-3.


наверх