Бюллетень ЕАПВ "Изобретения (евразийские заявки и евразийские патенты)"
Бюллетень 07´2016

  

(11) 

023849 (13) B1       Разделы: A B C D E F G H    

(21) 

201391673

(22) 

2012.05.10

(51) 

C08B 37/08 (2006.01)
C08L 5/08
(2006.01)
A61K 31/737
(2006.01)

(31) 

MI2011A000829; MI2012A000136

(32) 

2011.05.12; 2012.02.02

(33) 

IT

(43) 

2014.03.31

(86) 

PCT/EP2012/058654

(87) 

WO 2012/152872 2012.11.15

(71) 

(73) НЬОСИС С.П.А. (IT)

(72) 

Бьянки Давиде, Валетти Марко, Бацца Паола, Миралья Никколо, Валоти Эрманно (IT)

(74) 

Медведев В.Н. (RU)

(54) 

БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ ХОНДРОИТИНСУЛЬФАТ, СУЛЬФАТИРОВАННЫЙ В ПОЛОЖЕНИИ 4 ИЛИ 6 НА ЕГО ПОЛИСАХАРИДНОЙ ЦЕПИ, И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ

(57) 1. Способ получения натриевой соли хондроитинсульфата, в котором все N-ацетил-D-галактозаминовые единицы в одной и той же полисахаридной цепи моносульфатированы либо случайным образом, либо в положении 4 или 6, причем указанный способ включает следующие стадии:

a) преобразование натриевой соли хондроитина в его свободную кислоту или в ее соль с катионом четвертичного аммония, выбранным из тетраметиламмония, тетраэтиламмония или тетрабутиламмония, или в соль пиридиния, или в метиловый сложный эфир;

b) реакция соединения, полученного на стадии а), со сложным ортоэфиром формулы RC(OR1)3, в которой R является выбранным из водорода, метила, этила или фенила, a R1 является выбранным из метила или этила, в условиях кислотного катализа с получением соединения, в котором повторяющаяся дисахаридная единица, присутствующая в хондроитине, имеет формулу I

Увеличить масштаб

в которой R и R1 являются такими, как определено выше;

с) защита гидроксильных групп в положениях 2' и 3' единиц глюкуроновой кислоты в соединении, полученном на предыдущей стадии, посредством реакции с ангидридом формулы (R2CO)2O, в которой R2 является выбранным из метила, этила или пропила, в присутствии пиридина или органического третичного основания, выбранного из триэтиламина или триизопропиламина, и 4-диметиламинопиридина (DMAP) с получением соединения, в котором повторяющаяся дисахаридная единица, присутствующая в хондроитине, имеет формулу II

Увеличить масштаб

в которой R, R1 и R2 являются такими, как определено выше;

d) перегруппировка функционального фрагмента сложного ортоэфира, присутствующего в продукте, полученном на стадии с), с органической водорастворимой кислотой с получением сложноэфирного производного, в котором повторяющиеся единицы GalNAc в полисахариде состоят из триацильных производных, имеющих формулу IIIa или IIIb

Увеличить масштаб

в которой R и R2 являются такими, как определено выше;

е) моносульфатирование соединения, полученного на стадии d), с последующим удалением О-ацильных групп, присутствующих в соединениях IIIa и IIIb, полученных на предыдущей стадии.

2. Способ по п.1, где натриевую соль хондроитина стадии а) получают исходя либо из капсульного полисахарида K4, продуцируемого культуральным бульоном Е. coli штамма О5:K4:Н4, либо из полисахарида, продуцируемого культуральным бульоном Е. coll штамма DSM23644.

3. Способ по п.1, где стадию b) проводят со сложным ортоэфиром, выбранным из триметилортоацетата, триэтилортоацетата, триметилортоформиата, триэтилортоформиата, триметилортопропионата, триэтилортопропионата или триметилортобензоата.

4. Способ по п.1, где кислотный катализ стадии b) осуществляют с кислотой, выбранной из камфорсульфоновой кислоты, паратолуолсульфоновой кислоты, метансульфоновой кислоты, или с сульфоновой смолой.

5. Способ по п.1, где стадию с) проводят с уксусным ангидридом.

6. Способ по п.1, где стадию d) проводят при 20-40°С.

7. Способ по п.1, где стадию d) проводят при 40-70°С.

8. Способ по п.1, где стадию d) проводят в смеси воды с органической водорастворимой кислотой или в одной воде.

9. Способ по п.8, где органическая кислота является выбранной из уксусной, муравьиной, пропионовой, винной, лимонной кислоты или катионной смолы.

10. Способ по п.1, где полученная натриевая соль хондроитинсульфата имеет среднюю молекулярную массу (Mw) 10-30 кДа.

11. Способ по п.10, где натриевая соль хондроитинсульфата имеет распределение моносульфатных групп, отношение которых находится в диапазоне от 90/10 4S/6S до 10/90 4S/6S.

12. Способ по п.1, где отношение между единицами N-ацетил-D-галактозамина, сульфатированного в положении 4 и в положении 6, в полученной натриевой соли хондроитинсульфата составляет менее 1.

13. Способ по п.1, где отношение между единицами N-ацетил-D-галактозамина, сульфатированного в положении 4 и в положении 6, в полученной натриевой соли хондроитинсульфата составляет более 1.

14. Натриевая соль хондроитинсульфата, полученная согласно способу по п.1, имеющая среднюю молекулярную массу, составляющую от 4000 до 9000 Да, определенную посредством хроматографии с фракционированием по размерам молекул (SEC), и имеющая биотехнологическое происхождение, в которой все N-ацетил-D-галактозаминовые единицы в одной и той же полисахаридной цепи являются моносульфатированными либо случайным образом, либо в положении 4 или 6 с распределением моносульфатных групп, отношение которых составляет от 90/10 4S/6S до 10/90 4S/6S.

15. Применение натриевой соли хондроитинсульфата по п.14 для предупреждения и лечения остеоартрита и/или поддержания нормального состояния скелетно-мышечной системы.

16. Композиция для предупреждения и лечения остеоартрита и/или поддержания нормального состояния скелетно-мышечной системы, содержащая натриевую соль хондроитинсульфата по п.14 и один или более фармацевтически или нутрицевтически приемлемых эксципиентов.


наверх