Бюллетень ЕАПВ "Изобретения (евразийские заявки и патенты)"
Бюллетень 2´2015

  

(11) 

020843 (13) B1       Разделы: A B C D E F G H    

(21) 

201170993

(22) 

2010.02.03

(51) 

C07K 1/00 (2006.01)
C07K 14/00
(2006.01)
C07K 17/00
(2006.01)

(31) 

61/149,669; 61/185,112; 61/268,193; 61/236,493; 61/236,836; 61/243,707; 61/245,490; 61/280,955; 61/280,956; 61/281,109

(32) 

2009.02.03; 2009.06.08; 2009.06.08; 2009.08.24; 2009.08.25; 2009.09.18; 2009.09.24; 2009.11.10; 2009.11.10; 2009.11.12

(33) 

US

(43) 

2012.02.28

(86) 

PCT/US2010/023106

(87) 

WO 2010/091122 2010.08.12

(71) 

(73) АМУНИКС ОПЕРЕЙТИНГ ИНК. (US)

(72) 

Шелленбергер Фолькер, Сильверман Джошуа, Ванг Чиа-Вей, Спинк Бенджамин, Стеммер Вилльям П., Геттинг Натан, То Уэйн, Клиланд Джеффри Л. (US)

(74) 

Липатова И.И., Новоселова С.В., Рыбаков В.М., Дощечкина В.В., Хмара М.В. (RU)

(54) 

УДЛИНЕННЫЕ РЕКОМБИНАНТНЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ И СОДЕРЖАЩИЕ ИХ КОМПОЗИЦИИ

(57) 1. Изолированный удлиненный рекомбинантный полипептид (XTEN), содержащий более чем примерно 36 аминокислотных остатков, отличающийся тем, что:

(а) по меньшей мере примерно 90% последовательности XTEN состоят из неперекрывающихся мотивов последовательности, при этом мотивы последовательности выбраны из группы, состоящей из последовательностей, приведенных в табл. 1;

(б) суммарное содержание остатков глицина (G), аланина (А), серина (S), треонина (Т), глутаминовой кислоты (Е) и пролина (Р) составляет примерно более 90% от всей аминокислотной последовательности XTEN;

(в) последовательность XTEN является в существенной степени неповторяющейся;

(г) последовательность XTEN не содержит предсказанного эпитопа Т-клеток согласно анализу с использованием алгоритма TEPITOPE, при этом предсказание с помощью алгоритма TEPITOPE эпитопов в последовательности XTEN основано на выставлении оценки -9 или более;

(д) последовательность XTEN имеет более 90% формирования статистического клубка согласно алгоритму GOR и

(е) последовательность XTEN имеет менее 2% альфа-спиралей и 2% бета-слоев согласно алгоритму Чоу-Фасмана.

2. Полипептид XTEN по п.1, отличающийся тем, что в существенной степени неповторяющаяся последовательность XTEN характеризуется тем, что содержит последовательность, в которой любые три соседние аминокислоты не могут быть одинаковыми, если только эта аминокислота не является серином, или тем, что последовательности любых двух соседних аминокислотных остатков встречаются не более двух раз в каждом из мотивов последовательности.

3. Полипептид XTEN по п.1, необязательно отличающийся тем, что:

(а) суммарное содержание остатков аспарагина и глутамина составляет менее чем 10% от всей аминокислотной последовательности XTEN; и/или

(б) суммарное содержание остатков метионина и триптофана составляет менее чем 2% от всей аминокислотной последовательности XTEN; и/или

(в) ни один тип аминокислоты не составляет более чем 30% от указанной последовательности XTEN.

4. Полипептид XTEN по п.1, отличающийся тем, что последовательность XTEN имеет оценку подпоследовательностей менее 10.

5. Полипептид XTEN по п.1, отличающийся тем, что последовательность XTEN содержит по крайней мере 100 аминокислотных остатков.

6. Полипептид XTEN по п.1, отличающийся тем, что последовательность XTEN содержит по крайней мере 200 аминокислотных остатков.

7. Полипептид XTEN по п.1, отличающийся тем, что последовательность XTEN содержит по крайней мере 400 аминокислотных остатков.

8. Полипептид XTEN по п.1, содержащий последовательность, имеющую по крайней мере 90% идентичности в отношении группы последовательностей, приведенных в табл. 2.

9. Изолированный химерный белок, содержащий изолированный XTEN по любому из пп.1-8 и биологически активный белок, при этом XTEN сшит с биологически активным белком.

10. Изолированный химерный белок по п.9, отличающийся тем, что биологически активный белок демонстрирует не менее чем 90% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из табл. 3-7 или 90% идентичности последовательности в отношении последовательности гормона роста, выбранной из табл. 8, не являющегося гормоном роста человека.

11. Изолированный химерный белок по п.9 или 10, отличающийся тем, что указанный химерный белок имеет терминальный период полувыведения по меньшей мере примерно в два раза более продолжительный по сравнению с биологически активным белком, не сшитым с XTEN.

12. Изолированный химерный белок по любому из пп.9-11, отличающийся тем, что указанный химерный белок демонстрирует в физиологических условиях коэффициент кажущейся молекулярной массы, который более чем примерно 6.

13. Изолированный химерный белок по любому из пп.9-12, отличающийся тем, что указанный химерный белок требует менее частых введений дозы или пониженной сопоставимой дозировки для достижения или сохранения циркулирующей концентрации в крови субъекта по сравнению с биологически активным белком, не сшитым с XTEN, который вводят субъекту сопоставимым способом.

14. Изолированный химерный белок по любому из пп.9-13, отличающийся тем, что биологически активный белок является:

i)пептидом, регулирующим уровень глюкозы, который необязательно может представлять собой белок, выбранный из табл. 3-6, или необязательно может представлять собой глюкагон, GLP-1 или эксендин-4;

(ii) фактором свертывания крови, выбранным из табл. 7, который необязательно может представлять собой фактор IX или фактор VII; или

(iii) гормон роста из табл. 8, не являющийся гормоном роста человека.

15. Изолированный химерный белок по любому из пп.9-14, отличющийся тем, что биологически автивный белок представляет собой метаболический белок, выбранный из группы, состоящей из α-натрийуретического пептида, β-натрийуретического пептида, натрийуретического пептида С-типа, фактора роста фибробластов 2 и рецептора TNF.

16. Способ улучшения свойства биологически активного белка, включая стадию присоединения биологически активного белка к XTEN по любому из пп.1-2 для достижения свойства, отличающийся тем, что: (а) терминальный период полувыведения биологически активного белка, соединенного с XTEN, является длиннее в сравнении с терминальным периодом полувыведения биологически активного белка, не соединенного с XTEN; (б) срок годности биологически активного белка, соединенного с XTEN, является длиннее в сравнении со сроком годности биологически активного белка, не соединенного с XTEN, при этом срок годности оценивают по сохранению биологической активности по прошествии определенного интервала времени в сравнении с образцом на исходном уровне; (в) растворимость в физиологических условиях биологически активного белка, соединенного с XTEN, является выше в сравнении с растворимостью биологически активного белка, не соединенного с XTEN; (г) продукция антител IgG, селективно связывающих биологически активный белок, соединенный с XTEN, при его введении субъекту снижена в сравнении с продукцией IgG при введении субъекту биологически активного белка, не соединенного с XTEN, в сопоставимой дозе; и/или (д) время нахождения в пределах терапевтического окна биологически активного белка, соединенного с XTEN, при введении субъекту, дольше в сравнении с биологически активным белком, не соединенным с XTEN, при его введении субъекту.

17. Способ по п.16, отличающийся тем, что биологически активный белок с улучшенными свойствами представляет собой белок, выбранный из табл. 3-5, или эксендин-4, или глюкагон, или GLP-I.

18. Способ по п.16, отличающийся тем, что биологически активный белок с улучшенными свойствами представляет собой белок, выбранный из табл. 6, или α-натрийуретический пептид, β-натрийуретический пептид, натрийуретический пептид С-типа, фактор роста фибробластов или рецептор TNF.

19. Способ по п.16, отличающийся тем, что биологически активный белок с улучшенными свойствами представляет собой белок, выбранный из табл. 7, или представляет собой фактор IX или фактор VII.

20. Способ по п.16, где биологически активный белок с улучшенными свойствами представляет собой фактор роста, выбранный из табл. 8, не являющийся фактором роста человека.

21. Изолированный удлиненный рекомбинантный полипептид (XTEN), содержащий более чем примерно 36 аминокислотных остатков, отличающийся тем, что:

(а) по меньшей мере примерно 90% последовательности XTEN состоит из неперекрывающихся мотивов последовательности, при этом мотивы последовательности выбраны из группы, состоящей из последовательностей, приведенных в табл. 1;

(б) суммарное содержание остатков глицина (G), аланина (А), серина (S), треонина (Т), глутаминовой кислоты (Е) и пролина (Р) составляет примерно более 90% от всей аминокислотной последовательности XTEN;

(в) последовательность XTEN является в существенной степени неповторяющейся.


наверх