Бюллетень ЕАПВ "Изобретения (евразийские заявки и патенты)"
Бюллетень 2´2015

  

(11) 

020818 (13) B1       Разделы: A B C D E F G H    

(21) 

201001628

(22) 

2009.04.10

(51) 

C12N 9/64 (2006.01)

(31) 

61/124,021

(32) 

2008.04.11

(33) 

US

(43) 

2011.06.30

(86) 

PCT/US2009/002248

(87) 

WO 2009/126307 2009.10.15

(71) 

(73) КАТАЛИСТ БИОСАЙЕНСИЗ, ИНК. (US)

(72) 

Мэдисон Эдвин Л., Тсэнос Кристофер (US)

(74) 

Стояченко И.Л. (RU)

(54) 

МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ ФАКТОРА VII И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

(57) 1. Модифицированный полипептид фактора VII (FVII), включающий модификации в полипептиде FVII, где

модификации осуществляют в положениях, соответствующих положениям 286 и 298 в полипептиде FVII с последовательностью аминокислот, приведенной в SEQ ID NO: 3, или в соответствующих положениях в полипептиде FVII,

модификация в положении 286 представляет собой замену аминокислоты на аргинин (Arg, R);

модификация в положении 298 представляет собой замену аминокислоты на глютамин (Gln, Q) и

модифицированный полипептид FVII обладает повышенной коагулянтной активностью по сравнению с полипептидом FVII, немодифицированным в положениях 286 и 298.

2. Модифицированный полипептид FVII по п.1, где модификация в положении 286 представляет собой замену Gln (Q) на Arg (R).

3. Модифицированный полипептид FVII по п.1, где модификация в положении 298 представляет собой замену Met (M) на глютамин (Gln, Q).

4. Модифицированный полипептид FVII по п.1, содержащий модификации Q286R и M298Q.

5. Модифицированный полипептид FVII по любому из пп.1-4, где немодифицированный полипептид FVII содержит последовательность аминокислот, приведенную в любой из SEQ ID NO: 1-3, 18-74, 98, 158 или 343-353, или представляет собой ее аллельный или видовой вариант, или вариант, обладающий по меньшей мере 60% идентичностью с последовательностью FVII из любой последовательности SEQ ID NO: 1-3, 18-74, 98, 158 или 343-353, или представляет собой активный фрагмент полипептида FVII, который включает последовательность аминокислот, приведенную в любой из последовательностей SEQ ID NO: 1-3, 18-74, 98, 158 или 343-353.

6. Модифицированный полипептид FVII по любому из пп.1-5, содержащий одну или несколько дополнительных модификаций в другом положении в полипептиде FVII.

7. Модифицированный полипептид FVII по п.6, где дополнительная модификация представляет собой замену аминокислоты в положении, соответствующем положению, выбранному из 51, 52, 54, 60, 66, 68, 109, 119, 122, 124, 130, 132, 158, 161, 175, 196, 197, 199, 202, 216, 222, 237, 239, 257, 286, 287, 290, 292, 294, 296, 305, 314, 318, 321, 337, 341, 366, 373, 374, 394, 395 и 396.

8. Модифицированный полипептид FVII по п.6, в котором дополнительная модификация аминокислоты выбрана из

Увеличить масштаб

9. Модифицированный полипептид FVII по любому из пп.6-8, включающий модификации, выбранные из

Увеличить масштаб

Увеличить масштаб

10. Модифицированный полипептид FVII по любому из пп.6-11, включающий модификации, выбранные из

Увеличить масштаб

Увеличить масштаб

Увеличить масштаб

11. Модифицированный двухцепочечный активированный полипептид фактора VII (FVIIa), включающий аминокислотные замены, соответствующие положениям 128, 129, 286 и 289 в SEQ ID NO: 3, где

аминокислота в положении 128 заменена на аспарагин (N), аминокислота в положении 129 заменена на аланин (А), аминокислота в положении 286 заменена на аргинин (R) и аминокислота в положении 298 заменена на глутамин (Q),

модифицированный полипептид FVIIa включает аминокислотную последовательность, по крайней мере на 85 или 90% идентичную последовательности полипептида, приведенной в SEQ ID NO: 3; и

модифицированный полипептид FVIIa обладает прокоагулянтной активностью.

12. Модифицированный полипептид фактора VII (FVII), состоящий из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 280.

13. Модифицированный двухцепочечный активированный полипептид фактора VII (FVIIa), состоящий из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 280, расщепленной между аргинином в положении 152 и изолейцином в положении 153.

14. Модифицированный полипептид FVIIa по п.11, где полипептид включает аминокислотную последовательность, по крайней мере на 95% идентичную последовательности полипептида, приведенной в SEQ ID NO: 3.

15. Активированный модифицированный полипептид фактора VII (FVIIa) по п.11, в котором аминокислотная последовательность легкой цепи модифицированного FVIIa по крайней мере на 95% идентична аминокислотной последовательности на участке 1-152 последовательности, приведенной в SEQ ID NO:280, и включает аминокислотные замены в положениях 128 и 129.

16. Активированный модифицированный полипептид фактора VII (FVIIa) по п.11, в котором аминокислотная последовательность тяжелой цепи модифицированного FVIIa по крайней мере на 95% идентична аминокислотной последовательности на участке 153-406 последовательности, приведенной в SEQ ID NO:280, и включает аминокислотные замены в положениях 286 и 298.

17. Модифицированный полипептид фактора VII (FVII), в котором полипептид FVII включает только 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 замен аминокислот в полипептиде FVII дикого типа, имеющем аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 3 или в его аллельном или видовом варианте, или в полипептиде с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 3, содержащем гетерологичный Gla домен вместо Gla домена последовательности SEQ ID NO: 3;

одна замена аминокислоты находится в положении, соответствующем положению 286 в полипептиде FVII с аминокислотной последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 3, или в соответствующем положении в полипептиде FVII, и

замена в положении 286 представляет собой замену на аргинин (Arg, R), что приводит к модифицированному полипептиду FVII, обладающему повышенной коагулянтной активностью по сравнению с полипептидом FVII, немодифицированным в положении 286.

18. Модифицированный полипептид FVII по любому из пп.1-17, где немодифицированный полипептид FVII содержит последовательность аминокислот, приведенную в любой из SEQ ID NO: 1-3 или 18-74, или представляет собой его аллельный или видовой вариант, или представляет собой активный фрагмент полипептида FVII, включающий последовательность аминокислот, приведенную в любой из последовательностей SEQ ID NO: 1-3 или 18-74.

19. Модифицированный полипептид FVII по п.18, где модифицированный полипептид FVII представляет собой активный фрагмент, включающий замену аминокислоты в положении, соответствующем положению 286 в полипептиде FVII.

20. Модифицированный полипептид FVII по любому из пп.17-19, в котором замена аминокислоты, в дополнение к замене 286R, находится в положении, соответствующем положению, выбранному из 51, 52, 54, 60, 66, 68, 109, 119, 122, 124, 130, 132, 158, 161, 175, 196, 197, 199, 202, 216, 222, 237, 239, 257, 286, 287, 290, 292, 294, 296, 298, 305, 314, 318, 321, 337, 341, 366, 373, 374, 394, 395 и 396.

21. Модифицированный полипептид FVII по любому из пп.17-20, включающий замену аминокислот, выбранную из

Увеличить масштаб

Увеличить масштаб

22. Модифицированный полипептид FVII по п.21, включающий замены аминокислот, выбранные из

Увеличить масштаб

Увеличить масштаб

23. Модифицированный полипептид FVII по любому из пп.1-10, включающий замены аминокислот, выбранные из

Увеличить масштаб

Увеличить масштаб

Увеличить масштаб

24. Модифицированный полипептид FVII по любому из пп.1-23, включающий аминокислотную последовательность, приведенную в любой из SEQ ID NOS: 118, 131-141-155, 157, 274-282, 285-288, 290, 292-297, 299, 301-306, 308, 310-314, 316-318, 321-326, 328, 334-342, 355-358, 360 или 364-371.

25. Модифицированный полипептид FVII, включающий модификацию в полипептиде FVII, где модификация введена в положение, соответствующее положению, выбранному из 54, 66, 121, 122, 129 и 132 в полипептиде FVII с последовательностью аминокислот, приведенной в SEQ ID NO: 3, или в соответствующих остатках в полипептиде FVII.

26. Модифицированный полипептид FVII по п.25, в котором модификация выбрана из P54S, Q66N, L121S, A122N, Р129А и E132S.

27. Модифицированный полипептид FVII, включающий модификацию в полипептиде FVII, где модификация соответствует модификации, выбранной из T239S, T239Q, T239V, T239L, Т239Н, T239I, Р321К, Р321Е, P321Y, P321S, Q366D, Q366N, Q366V, Q366I, Q366L, Q366M, H373D, Н373Е, H373S, H373F, Н373А, K161S, K161V, H216S, H216K, H216R, S222A, S222K, S222V, S222D, S222N, S222E и H247S в полипептиде FVII с последовательностью аминокислот, приведенной в SEQ ID NO: 3, или в соответствующих остатках в полипептиде FVII.

28. Модифицированный полипептид FVII, включающий две или более модификаций в полипептиде FVII, его аллельном или видовом варианте или его активном фрагменте, в котором две или более модификаций аминокислот выбраны из модификаций, соответствующих Н216А, Н257А, E394N, Р395А, R396S, K109N, A292N, A175S, Н257А и замене Gla из FIX.

29. Модифицированный полипептид FVII по любому из пп.1-28, который является активным или активированным.

30. Модифицированный полипептид FVII по любому из пп.1-29, включающий гетерологичный домен Gla или его часть, достаточную для осуществления связывания фосфолипидов.

31. Модифицированный полипептид FVII по п.30, в котором гетерологичный домен Gla выбран из домена Gla фактора IX (FIX), фактора X (FX), протромбина, белка С, белка S, остеокальцина, белка Gla матрикса, Growth-arrest-specific белка 6 (Gas6) и белка Z.

32. Модифицированный полипептид FVII по п.30 или 31, в котором гетерологичный домен Gla имеет последовательность аминокислот, приведенную в любой из SEQ ID NO: 83-91, 93 и 94, или ее часть, достаточную для осуществления связывания фосфолипидов.

33. Модифицированный полипептид FVII по любому из пп.30-32, в котором весь нативный домен Gla FVII или его непрерывную часть удаляли и заменяли гетерологичным доменом Gla, или его частью, достаточной для осуществления связывания фосфолипидов.

34. Модифицированный полипептид FVII по п.33, в котором нативный домен Gla FVII включает аминокислоты 1-45 в полипептиде FVII с последовательностью аминокислот, приведенной в SEQ ID NO: 3, или соответствующие остатки в полипептиде FVII.

35. Модифицированный полипептид FVII по пп.30-34, в котором гетерологичный домен Gla содержит модификации по сравнению с гетерологичным доменом Gla дикого типа.

36. Модифицированный полипептид FVII по п.32, в котором гетерологичный домен Gla представляет собой домен Gla FIX и модификация представляет собой замену аминокислоты в положении, соответствующем положению, выбранному из 19, 40, 43 и 44 домена Gla FIX, приведенного в SEQ ID NO: 83.

37. Модифицированный полипептид FVII по п.33, в котором модификация выбрана из M19K, E40L, K43I и Q44S.

38. Модифицированный полипептид FVII по любому из пп.35-37, в котором гетерологичный домен Gla содержит дополнительные модификации.

39. Модифицированный полипептид FVII по п.38, в котором гетерологичный домен Gla представляет собой домен Gla FIX и дополнительная модификация представляет собой замену аминокислоты в положении, соответствующем положению 19, 40, 43 и 44 домена Gla FIX, приведенного в SEQ ID NO: 83.

40. Модифицированный полипептид FVII по п.38 или 39, в котором дополнительная модификация выбрана из M19K, E40L, K43I и Q44S.

41. Модифицированный полипептид FVII по любому из пп.35-37, в котором модификация представляет собой M19K/E40L/K43I/Q44S.

42. Модифицированный полипептид FVII по любому из пп.30-41, включающий модификации, выбранные из

Увеличить масштаб

Увеличить масштаб

43. Модифицированный полипептид FVII по пп.1-42, включающий одну или более дополнительных модификаций аминокислоты (аминокислот), которые повышают устойчивость к антитромбину-III, увеличивают связывание и/или аффинность к фосфолипидам, повышают аффинность к тканевому фактору, увеличивают собственную активность, увеличивают ТФ-зависимую активность, увеличивают коагулянтную активность, изменяют конформацию полипептида для изменения зимогенности, увеличивают каталитическую или коагулянтную активность, сдвигая равновесие между высокоактивной и менее активной конформацией FVIIa в пользу высокоактивных конформаций, повышают устойчивость к протеазам, уменьшают гликозилирование, увеличивают гликозилирование, снижают иммуногенность, повышают устойчивость и/или способствуют химическому связыванию групп.

44. Модифицированный полипептид FVII по пп.1-43, включающий одну или более дополнительных модификаций аминокислоты (аминокислот), выбранных из

Увеличить масштаб

Увеличить масштаб

Увеличить масштаб

45. Модифицированный полипептид FVII по пп.1-44, где немодифицированный полипептид FVII имеет последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO: 3, или представляет собой аллельный или видовой вариант полипептида, приведенного в SEQ ID NO: 3.

46. Модифицированный полипептид FVII по любому из пп.1-45, который представляет собой зрелый полипептид.

47. Модифицированный полипептид FVII по любому из пп.1-46, который представляет собой одноцепочечный полипептид или двухцепочечный полипептид.

48. Модифицированный полипептид FVII по любому из пп.1-47, который включает пост-трансляционные модификации.

49. Модифицированный полипептид FVII по п.48, в котором пост-трансляционные модификации включают гликозилирование.

50. Модифицированный полипептид FVII по любому из пп.1-49, который является двухцепочечным активированным полипептидом FVIIa.

51. Молекула нуклеиновой кислоты, включающая последовательность нуклеотидов, кодирующую модифицированный полипептид FVII по любому из пп.1-50.

52. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.51.

53. Клетка, включающая вектор по п.52.

54. Фармацевтическая композиция, включающая терапевтически эффективную концентрацию или количество модифицированного полипептида FVII по любому из пп.1-50 в фармацевтически приемлемом носителе.

55. Фармацевтическая композиция, включающая молекулу нуклеиновой кислоты по п.51 в фармацевтически приемлемом носителе.

56. Фармацевтическая композиция, включающая вектор по п.52 в фармацевтически приемлемом носителе.

57. Фармацевтическая композиция, включающая клетку по п.53 в фармацевтически приемлемом носителе.

58. Фармацевтическая композиция по любому из пп.54-57, разработанная для введения одной дозой.

59. Фармацевтическая композиция по любому из пп.54-58, разработанная для введения способом, выбранным из перорального, назального, легочного, буккального, трансдермального, подкожного, интрадуоденального, энтерального, парентерального, внутривенного или внутримышечного способов введения.

60. Фармацевтическая композиция по любому из пп.54-59, являющаяся лиофилизированной.

61. Способ лечения субъекта, включающий введение субъекту фармацевтической композиции по любому из пп.54-60, где

субъект страдает от заболевания или состояния, которое поддается лечению введением FVII или прокоагулянта, и

заболевание или состояние, подвергающееся лечению, выбрано из нарушений свертывания крови, гематологических нарушений, геморрагических нарушений, гемофилий, дефицита фактора VII, нарушений, связанных с кровотечениями, хирургического кровотечения или кровотечения в результате травмы.

62. Применение модифицированного полипептида FVII по любому из пп.1-50, для лечения заболевания или состояния, выбранного из нарушений свертывания крови, гематологических нарушений, геморрагических нарушений, гемофилий, дефицита фактора VII, нарушений, связанных с кровотечениями, хирургического кровотечения или кровотечения в результате травмы.

63. Применение по п.62, где заболевание или состояние является гемофилией, причем гемофилия представляет собой гемофилию А, или гемофилию В, или гемофилию С.

Увеличить масштаб


наверх