Бюллетень ЕАПВ "Изобретения (евразийские заявки и патенты)"
Бюллетень 1´2010

  

(11) 

013070 (13) B1       Разделы: A B C D E F G H    

(21) 

200600390

(22) 

2004.08.06

(51) 

C12N 15/62 (2006.01)
C12N 15/13
(2006.01)
C12N 15/36
(2006.01)
C12N 15/63
(2006.01)
C12N 15/10
(2006.01)
C12N 15/02
(2006.01)
C12P 21/02
(2006.01)
C07K 16/28
(2006.01)
A61K 39/29
(2006.01)
A61K 47/48
(2006.01)
A61P 31/12
(2006.01)
A61P 31/20
(2006.01)

(31) 

60/493,449

(32) 

2003.08.08

(33) 

US

(43) 

2006.08.25

(86) 

PCT/CA2004/001469

(87) 

WO 2005/014838 2005.02.17

(71) 

(73) ВИРЕКС МЕДИКАЛ КОРП. (CA)

(72) 

Джордж Раджан, Тайррелл Лорн, Нужем Антуан, Ван Дакунь, Ма Аллан (CA)

(74) 

Медведев В.Н., Павловский А.Н. (RU)

(54) 

ХИМЕРНЫЕ АНТИГЕНЫ ДЛЯ НАРУШЕНИЯ ТОЛЕРАНТНОСТИ ХОЗЯИНА К ЧУЖЕРОДНЫМ АНТИГЕНАМ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

(57) 1. Химерный антиген для генерации иммунного ответа, содержащий по меньшей мере один антигенный домен, где указанный по меньшей мере один антигенный домен содержит по меньшей мере один антигенный участок поверхностного антигена вируса гепатита В (HBV) и домен связывания с антигенпредставляющей клеткой (АРС), где домен связывания с АРС содержит фрагмент антитела, состоящий из фрагмента тяжелой цепи иммуноглобулина (Ig).

2. Химерный антиген по п.1, в котором фрагмент антитела выбран из группы, состоящей из полноразмерной CH1-области Ig или из части CH1-области Ig и CH2- и CH3-областей Ig.

3. Химерный антиген по п.1 или 2, содержащий полностью или частично CH2-область Ig, полностью или частично CH3-область Ig или же полностью или частично CH2-область Ig и полностью или частично CH3-область Ig.

4. Химерный антиген по любому из пп.1-3, в котором фрагмент антитела содержит шарнирную область Ig или ее часть.

5. Химерный антиген по любому из пп.1-4, в котором фрагмент антитела является фрагментом мышиного антитела.

6. Химерный антиген по любому из пп.1-5, в котором фрагмент антитела содержит Fc-фрагмент Ig.

7. Химерный антиген по п.1, в котором антигенный домен связан с меткой и участком расщепления протеазой и домен связывания с АРС содержит одну или несколько аминокислотных последовательностей, выбранных из группы, состоящей из последовательности CH1-домена Ig или его части, CH2-домена Ig или его части и CH3-домена Ig или его части, а антигенный домен связан с доменом связывания с АРС пептидным линкером.

8. Химерный антиген по любому из пп.1-7, который содержит мономер, содержащий антигенный домен и домен связывания с АРС, или димер, образованный мономерами.

9. Химерный антиген по любому из пп.2-4 и 7, в котором один или несколько антигенных доменов содержат по меньшей мере одну антигенную часть белка, выбранного из группы, состоящей из белка вируса гепатита В (HBV), белка утиного вируса гепатита В (DHBV) или белка вируса гепатита С (HCV).

10. Химерный антиген по п.9, в котором белок HBV является поверхностным антигеном HBV.

11. Химерный антиген по п.10, в котором поверхностный антиген HBV выбран из группы, состоящей из S HBV, S1 HBV, S2 HBV и их комбинаций, корового белка HBV, корового белка HBV ctm и полимеразы HBV.

12. Химерный антиген по п.10 или 11, в котором поверхностным антигеном HBV является S1/S2 HBV или S1/S2/S HBV.

13. Химерный антиген по любому из пп.9-12, в котором HBV представляет собой HBV человека.

14. Химерный антиген по любому из пп.2-4, в котором один или несколько антигенных доменов содержат по меньшей одну антигенную часть белка HCV, выбранного из группы, состоящей из корового белка HCV (1-191), корового белка HCV (1-177), Е1-Е2 HCV, E1 HCV, E2 HCV, NS3 HCV, NS4A HCV и NS5A HCV.

15. Химерный антиген по любому из пп.1-14, где химерный антиген связан с одной или несколькими метками.

16. Химерный антиген по п.15, в котором одна или несколько меток содержат по меньшей мере одну метку 6´His.

17. Химерный антиген по п.16, в котором один или несколько антигенных доменов имеют связанную с ними метку 6´His.

18. Химерный антиген по любому из пп.2-5, в котором один или несколько антигенных доменов содержат одну или несколько антигенных частей белка из HPV, HIV, HSV, облигатного внутриклеточного паразита или антигена злокачественной опухоли.

19. Химерный антиген по п.18, в котором облигатным внутриклеточным паразитом является бактерия.

20. Химерный антиген по п.19, в котором облигатный внутриклеточный паразит является простейшим.

21. Химерный антиген по п.1, в котором фрагмент тяжелой цепи Ig содержит полностью или частично CH1-область Ig.

22. Химерный антиген по любому из пп.1-21, где химерный антиген содержит часть CH1-области Ig, состоящей из аминокислотной последовательности VDKKI (SEQ ID NO: 2).

23. Химерный антиген по любому из пп.1-22, содержащий линкер, который связывает антигенный домен с доменом связывания с АРС.

24. Химерный антиген по п.23, в котором линкер представляет собой пептид.

25. Химерный антиген по п.24, в котором пептид содержит последовательность XRPQGGGS (SEQ ID NO: 1), где X означает V или S.

26. Химерный антиген по любому из пп.1-23, в котором и антигенный домен, и домен связывания с АРС дополнительно содержат одну из пары линкерных молекул, которые связывают антигенный домен с доменом связывания с АРС.

27. Химерный антиген по п.26, в котором пара линкерных молекул выбрана из группы, состоящей из (а) лейциновых молний и (b) биотина и авидина.

28. Химерный антиген по любому из пп.1-27, где химерный антиген содержит посттрансляционную модификацию.

29. Химерный антиген по любому из пп.1-28, который содержит гликозилирование.

30. Химерный антиген по любому из пп.1-29, который содержит гликозилирование маннозой.

31. Химерный антиген по п.30, в котором один или несколько антигенных доменов содержат гликозилирование маннозой.

32. Химерный антиген по п.31, в котором домен связывания с АРС содержит гликозилирование маннозой.

33. Химерный антиген по п.32, который содержит гликозилирование маннозой в низкой степени или гликозилирование маннозой в высокой степени.

34. Химерный антиген по любому из пп.1-33, содержащий (а) линкерный пептид, состоящий из аминокислотной последовательности XRPQGGGS (SEQ ID NO: 1), где X означает S; (b) часть CH1-области Ig, состоящей из аминокислотной последовательности VDKKI (SEQ ID NO: 2); (с) CH2-домен Ig и (d) CH3-домен Ig.

35. Химерный антиген по любому из пп.1-34, в котором по меньшей мере один антигенный домен содержит множественные эпитопы, которые способны вызывать иммунный ответ.

36. Химерный антиген по любому из пп.1-35, в котором домен связывания с АРС содержит по меньшей мере один эпитоп, который способен вызывать иммунный ответ.

37. Химерный антиген по любому из пп.1-36, способный вызывать гуморальный иммунный ответ и/или клеточный иммунный ответ.

38. Химерный антиген по любому из пп.1-37, способный вызывать (а) иммунный Th1-ответ, (b) иммунный Th2-ответ, (с) CTL-ответ или (d) любое сочетание (а), (b) и (с).

39. Способ активации АРС, предусматривающий обеспечение контактирования АРС с химерным антигеном по любому из пп.1-38.

40. Способ по п.39, согласно которому контактирование АРС происходит в условиях ex vivo.

41. Способ по п.39, согласно которому АРС находится у субъекта in vivo.

42. Способ по п.39, согласно которому субъектом является человек.

43. Способ по п.41 или 42, согласно которому контактирование АРС с химерным антигеном вызывает у субъекта (а) иммунный Th1-ответ, (b) иммунный Th2-ответ, (с) иммунный CTL-ответ или (d) любое сочетание (а), (b) и (с).

44. Способ по пп.41-43, согласно которому один или несколько антигенных доменов содержат антиген, в отношении которого субъект является иммунологически толерантным.

45. Способ по любому из пп.41-43, согласно которому у субъекта нарушена иммунологическая толерантность.

46. Способ активации АРС по любому из пп.39-45, согласно которому указанный способ обеспечивает вакцинирование субъекта против HBV посредством введения химерного антигена.

47. Способ активации АРС по любому из пп.39-46, согласно которому указанный способ обеспечивает терапевтическое или профилактическое вакцинирование субъекта посредством введения химерного антигена.

48. Способ по любому из пп.41-47, согласно которому введение химерного антигена вызывает более сильный иммунный ответ, чем отдельное введение антигенного домена, где иммунный ответ представляет собой (а) иммунный Th1-ответ, (b) иммунный Th2-ответ, (с) иммунный CTL-ответ или (d) любое сочетание (а), (b) и (с).

49. Способ по п.48, согласно которому иммунный ответ измеряют по количеству антигенспецифического антитела, присутствующего в организме субъекта.

50. Способ по п.49, согласно которому количество антигенспецифического антитела измеряют с использованием химерного антигена.

51. Способ по любому из пп.48-50, согласно которому иммунный ответ измеряют по количеству интерферона-g, продуцируемого Т-клетками в ответ на их экспозицию с АРС, нагруженными химерным антигеном или только антигенным доменом.

52. Способ по пп.48-51, согласно которому иммунный ответ измеряют по количеству антигенспецифических CD8+ Т-клеток, полученных в ответ на их экспозицию с АРС, нагруженными химерным антигеном или только антигенным доменом.

53. Способ по любому из пп.41-52, согласно которому субъект имеет инфекцию или злокачественную опухоль.

54. Способ по п.53, согласно которому инфекция представляет собой паразитарную инфекцию или вирусную инфекцию.

55. Способ по п.54, согласно которому вирусная инфекция представляет собой инфекцию HBV.

56. Способ по любому из пп.53-55, согласно которому инфекция представляет собой хроническую инфекцию.

57. Способ по п.56, согласно которому хроническая инфекция представляет собой хроническую инфекцию вирусом гепатита С, хроническую инфекцию вирусом папилломы человека, хроническую инфекцию вирусом иммунодефицита человека или хроническую инфекцию вирусом простого герпеса.

58. Способ по любому из пп.41-57, согласно которому у субъекта развивается иммунный ответ более чем на один эпитоп химерного антигена.

59. Способ по любому из пп.41-58, согласно которому у субъекта развивается иммунный ответ более чем на один эпитоп одного или нескольких антигенных доменов.

60. Способ по любому из пп.41-59, согласно которому химерный антиген содержит фрагмент антитела, который является ксенотипическим для субъекта.

61. Способ по любому из пп.41-60, согласно которому химерный антиген содержит фрагмент антитела, который не является ксенотипическим для субъекта.

62. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый наполнитель и химерный антиген по любому из пп.1-61.

63. Фармацевтическая композиция по п.62 для парентерального введения.

64. Фармацевтическая композиция по п.62 для трансдермального, интрадермального, внутривенного, подкожного, внутримышечного, назального, легочного, ректального, перорального введения.

65. Набор, содержащий химерный антиген по любому из пп.1-61, и инструкции для введения химерного антигена нуждающемуся в этом субъекту.

66. Способ получения химерного антигена, предусматривающий:

(a) получение микроорганизма, клетки или клеточной линии, содержащих полинуклеотид, который кодирует химерный антиген по любому из пп.1-61; и

(b) культивирование указанного микроорганизма, клетки или клеточной линии в условиях, при которых экспрессируется химерный антиген.

67. Способ по п.66, согласно которому клетка или клеточная линия представляет собой клетку насекомого или линию клеток насекомого.

68. Способ по п.66, согласно которому микроорганизм или клеточная линия представляет собой эукариотический микроорганизм или клеточную линию.

69. Способ по п.66, согласно которому микроорганизм или клеточная линия представляет собой дрожжи или линию растительных клеток.

70. Полинуклеотид, кодирующий химерный антиген по любому из пп.1-60.

71. Полинуклеотид по п.69, который содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из нуклеотидов 1-1326 последовательности SEQ ID NO: 26, нуклеотидов 1-2004 последовательности SEQ ID NO: 28, нуклеотидов 1-1350 последовательности SEQ ID NO: 30, нуклеотидов 1-1293 последовательности SEQ ID NO: 32, нуклеотидов 1-1794 последовательности SEQ ID NO: 34, нуклеотидов 1-1581 последовательности SEQ ID NO: 36, нуклеотидов 1-1389 последовательности SEQ ID NO: 38, нуклеотидов 1-1347 последовательности SEQ ID NO: 40, нуклеотидов 1-2157 последовательности SEQ ID NO: 42, нуклеотидов 1-1395 последовательности SEQ ID NO: 44, нуклеотидов 1-1905 последовательности SEQ ID NO: 46 или нуклеотидов 1-2484 последовательности SEQ ID NO: 48.

72. Полинуклеотид по п.69, который кодирует химерный антиген, который по меньшей мере на 90% идентичен полной аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из аминокислот 1-442 последовательности SEQ ID NO: 27, аминокислот 1-668 последовательности SEQ ID NO: 29, аминокислот 1-450 последовательности SEQ ID NO: 31, аминокислот 1-431 последовательности SEQ ID NO: 33, аминокислот 1-598 последовательности SEQ ID NO: 35, аминокислот 1-527 последовательности SEQ ID NO: 37, аминокислот 1-463 последовательности SEQ ID NO: 39, аминокислот 1-449 последовательности SEQ ID NO: 41, аминокислот 1-719 последовательности SEQ ID NO: 43, аминокислот 1-465 последовательности SEQ ID NO: 45, аминокислот 1-635 последовательности SEQ ID NO: 47 и аминокислот 1-828 последовательности SEQ ID NO: 49.

73. Полинуклеотид, который избирательно гибридизуется в жестких условиях с полинуклеотидом, имеющим нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46 и 48.

74. Микроорганизм, содержащий полинуклеотид по любому из пп.70-72.

75. Линия клеток, содержащая полинуклеотид по любому из пп.70-72.

76. Вектор, содержащий полинуклеотид по любому из пп.70-72.


наверх