Бюллетень ЕАПВ "Изобретения (евразийские заявки и патенты)"
Бюллетень 1´2010

  

(11) 

012984 (13) B1       Разделы: A B C D E F G H    

(21) 

200800300

(22) 

2004.12.17

(51) 

A61K 39/00 (2006.01)
A61K 39/38
(2006.01)

(31) 

60/530,480

(32) 

2003.12.17

(33) 

US

(43) 

2008.10.30

(62) 

200601169; 2004.12.17

(71) 

(73) ВАЙЕТ (US)

(72) 

Арумугхам Расаппа Г., Прасад А. Кришна (US)

(74) 

Дементьев В.Н. (RU)

(54) 

КОНЪЮГАТЫ ИММУНОГЕННЫХ ПЕПТИДНЫХ НОСИТЕЛЕЙ И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ

(57) 1. Способ получения иммуногенного конъюгата, включающий:

(а) введение реактивной группы в аминокислотный остаток пептидного иммуногена;

(б) дериватизацию одной или более функциональных групп белкового носителя с образованием активированной функциональной группы на белковом носителе;

(в) реакцию пептидного иммуногена со стадии (а) с белковым носителем со стадии (б) в таких условиях, при которых образуется конъюгат, при этом реактивная группа пептидного иммуногена ковалентно присоединена к активированной функциональной группе белкового носителя; и

(г) последующую реакцию конъюгата со стадии (в) с "кэпирующим" реагентом для инактивации оставшихся активированных функциональных групп на белковом носителе, с получением иммуногенного конъюгата и защитой функциональности носителя, так что он сохраняет свою способность выявлять заданный иммунный ответ на пептидный иммуноген.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что белковый носитель выбирают из группы, состоящей из человеческого сывороточного альбумина, гемоцианина лимфы улитки (KLH), молекул иммуноглобулина, тиреоглобулина, овальбумина, гемагглютинина вируса гриппа, PADRE полипептида, circumsporozite (CS, окружающего поры) белка возбудителя малярии, поверхностного антигена гепатита В (HBSAg19-28), белка теплового шока (HSP) 65, Mycobacterium tuberculosis (туберкулезной микобактерии), холерогена (холерного токсина), мутантов холерогена с пониженной токсичностью, дифтерийного токсина, белка CRM197, перекрестно-реактивного с дифтерийным токсином, рекомбинантной Streptococcal C5a пептидазы, Streptococcus piogenes ORF1224, Streptococcus piogenes ORF1664, Streptococcus piogenes ORF2452, Chlamydia pneumoniae ORF T367, Chlamydia pneumoniae ORF T858, столбнячного токсоида, ВИЧ gp120 T1, поверхностных компонентов микробных клеток, узнающих адгезивные матричные молекулы (MSCRAMMS), факторов/гормонов роста, цитокинов и хемокинов.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что белковый носитель представляет собой CRM197.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что пептидный иммуноген выбирают из группы, состоящей из бактериального белка, вирусного белка, грибкового белка, паразитарного белка и эукариотического белка.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что функциональная группа одной или более аминокислотных молекул белкового носителя дериватизируется с помощью сшивающего реагента.

6. Способ по п.5, отличающийся тем, что белковый носитель дериватизируется с галогенацетилирующим агентом.

7. Способ по п.1, отличающийся тем, что кэпирующий реагент, который применяют для инактивации активированных функциональных групп на белковом носителе, выбирают из группы реагентов, состоящей из цистеамина, N-ацетилцистеамина, этаноламина, гидроксида натрия, карбоната натрия, бикарбоната аммония и аммиака.

8. Способ по п.1, отличающийся тем, что стадия введения реактивной группы в пептидный иммуноген представляет собой добавление аминокислотного остатка, имеющего реактивную группу.

9. Способ по п.8, отличающийся тем, что аминокислотный остаток представляет собой цистеин, а реактивная группа содержит -SH, или аргинин, с реактивной группой, содержащей гуанидильную группу, или глютамат или аспартат с реактивной группой, содержащей -СООН, или лизин с реактивной группой, содержащей -NH2.

10. Способ по п.8, отличающийся тем, что аминокислотный остаток вводят в пептидный иммуноген добавлением во время синтеза пептида.

11. Способ по п.1, отличающийся тем, что стадия введения реактивной группы в пептидный иммуноген представляет собой генерирование боковой тиольной группы у аминокислотного остатка путем его модификации при помощи тиолирующего реагента.

12. Способ по п.11, отличающийся тем, что тиолирующий реагент представляет собой N-ацетилгомоцистеин тиолактон.

13. Способ по пп.8, 10 или 11, отличающийся тем, что аминокислотный остаток расположен на аминоконце пептидного иммуногена или карбоксиконце пептидного иммуногена.

14. Способ по п.1, отличающийся тем, что белковый носитель дополнительно содержит один или несколько полипептидных линкеров, ковалентно связанных с белковым носителем, а одна или несколько функциональных групп содержит заместитель одного или более полипептидных линкеров.

15. Иммуногенный конъюгат, содержащий пептидный иммуноген, ковалентно связанный с белковым носителем, отличающийся тем, что белковый носитель имеет формулу

где С обозначает белковый носитель, а

X обозначает дериватизируемую функциональную группу аминокислотного остатка на носителе,

m обозначает целое число больше 0, но меньше или равное 85, и

иммуногенный конъюгат имеет формулу

где С обозначает белковый носитель, a

Xd обозначает дериватизированную функциональную группу аминокислотного остатка белкового носителя,

Р обозначает пептидный иммуноген, ковалентно связанный через реактивную группу аминокислотного остатка пептидного иммуногена с дериватизированной функциональной группой аминокислотного остатка белкового носителя,

R обозначает "кэпирующую" молекулу, ковалентно связанную с дериватизированной функциональной группой аминокислотного остатка белкового носителя;

n обозначает целое число больше 0, но меньше или равное 85, и

р обозначает целое число больше 0, но меньше 85.

16. Конъюгат по п.15, отличающийся тем, что белковый носитель выбирают из группы, состоящей из сывороточного альбумина, гемоцианина лимфы улитки (KLH), молекул иммуноглобулина, тиреоглобулина, овальбумина, гемагглютинина вируса гриппа, PADRE полипептида, circumsporozite (CS, окружающего поры) белка возбудителя малярии, поверхностного антигена гепатита В (HBSAg19-28), белка теплового шока (HSP) 65, Mycobacterium tuberculosis (туберкулезной микобактерии), холерогена (холерного токсина), мутантов холерогена с пониженной токсичностью, дифтерийного токсина, белка CRM197, перекрестно-реактивного с дифтерийным токсином, рекомбинантной Streptococcal C5a пептидазы, Streptococcus piogenes ORF1224, Streptococcus piogenes ORF1664, Streptococcus piogenes ORF2452, Chlamydia pneumoniae ORF T367, Chlamydia pneumoniae ORF T858, столбнячного токсоида, ВИЧ gp120 T1, поверхностных компонентов микробных клеток, узнающих адгезивные матричные молекулы (MSCRAMMS), факторов/гормонов роста, цитокинов и хемокинов.

17. Конъюгат по п.16, отличающийся тем, что белковый носитель представляет собой CRM197.

18. Конъюгат по п.15, отличающийся тем, что пептидный иммуноген выбирают из группы, состоящей из бактериального белка, вирусного белка, грибкового белка, паразитарного белка и эукариотического белка.

19. Иммуногенный конъюгат, полученный способом по п.1 и имеющий формулу

где С обозначает белковый носитель, а

Xd обозначает дериватизированную функциональную группу аминокислотного остатка белкового носителя,

Р обозначает пептидный иммуноген, ковалентно связанный через реактивную группу аминокислотного остатка пептидного иммуногена с дериватизированной функциональной группой аминокислотного остатка белкового носителя,

R обозначает "кэпирующую" молекулу, ковалентно связанную с дериватизированной функциональной группой аминокислотного остатка белкового носителя;

n обозначает целое число больше 0, но меньше или равное 85, и

р обозначает целое число больше 0, но меньше 85.

20. Конъюгат по п.19, отличающийся тем, что белковый носитель выбирают из группы, состоящей из человеческого сывороточного альбумина, гемоцианина лимфы улитки (KLH), молекул иммуноглобулина, тиреоглобулина, овальбумина, гемагглютинина вируса гриппа, PADRE полипептида, circumsporozite (CS, окружающего поры) белка возбудителя малярии, поверхностного антигена гепатита В (HBSAg19-28), белка теплового шока (HSP) 65, Mycobacterium tuberculosis (туберкулезной микобактерии), холерогена (холерного токсина), мутантов холерогена с пониженной токсичностью, дифтерийного токсина, белка CRM197, перекрестно-реактивного с дифтерийным токсином, рекомбинантной Streptococcal C5a пептидазы, Streptococcus piogenes ORF1224, Streptococcus piogenes ORF1664, Streptococcus piogenes ORF2452, Chlamydia pneumoniae ORF T367, Chlamydia pneumoniae ORF T858, столбнячного токсоида, ВИЧ gp120 T1, поверхностных компонентов микробных клеток, узнающих адгезивные матричные молекулы (MSCRAMMS), факторов/гормонов роста, цитокинов и хемокинов.

21. Конъюгат по п.20, отличающийся тем, что белковый носитель представляет собой CRM197.

22. Конъюгат по п.19, отличающийся тем, что пептидный иммуноген выбирают из группы, состоящей из бактериального белка, вирусного белка, грибкового белка, паразитарного белка и эукариотического белка.

23. Конъюгат по п.15 или 19, отличающийся тем, что реактивная группа аминокислотного остатка пептидного иммуногена представляет собой свободную сульфгидрильную группу.

24. Конъюгат по п.23, отличающийся тем, что свободная сульфгидрильная группа представляет собой боковую цепь цистеинового остатка, или тиольную боковую цепь лизинового остатка.

25. Конъюгат по п.15 или 19, отличающийся тем, что реактивная группа аминокислотного остатка пептидного иммуногена представляет собой гуанидильную группу, карбоксильную группу или e-аминогруппу.

26. Конъюгат по п.15 или 19, отличающийся тем, что белковый носитель дополнительно содержит полипептидный линкер, ковалентно связанный с белковым носителем, а функциональная группа содержит заместитель полипептидного линкера.

27. Конъюгат по п.15 или 19, отличающийся тем, что аминокислотный остаток пептидного иммуногена, содержащий реактивную группу, расположен на аминоконце пептидного иммуногена или карбоксиконце пептидного иммуногена.

28. Иммуногенная композиция, содержащая иммуногенный конъюгат пептидного иммуногена с белковым носителем, полученный способом по п.1, совместно с одним или более фармацевтически приемлемых эксципиентов, разбавителей и/или адъювантов.

29. Иммуногенная композиция по п.28, отличающаяся тем, что белковый носитель выбирают из группы, состоящей из человеческого сывороточного альбумина, гемоцианина лимфы улитки (KLH), молекул иммуноглобулина, тиреоглобулина, овальбумина, гемагглютинина вируса гриппа, PADRE полипептида, circumsporozite (CS, окружающего поры) белка возбудителя малярии, поверхностного антигена гепатита В (HBSAg19-28), белка теплового шока (HSP) 65, Mycobacterium tuberculosis (туберкулезной микобактерии), холерогена (холерного токсина), мутантов холерогена с пониженной токсичностью, дифтерийного токсина, белка CRM197, перекрестно-реактивного с дифтерийным токсином, рекомбинантной Streptococcal C5a пептидазы, Streptococcus piogenes ORF1224, Streptococcus piogenes ORF1664, Streptococcus piogenes ORF2452, Chlamydia pneumoniae ORF T367, Chlamydia pneumoniae ORF T858, столбнячного токсоида, ВИЧ gp120 T1, поверхностных компонентов микробных клеток, узнающих адгезивные матричные молекулы (MSCRAMMS), факторов/гормонов роста, цитокинов и хемокинов.

30. Иммуногенная композиция по п.29, отличающаяся тем, что белковый носитель представляет собой CRM197.

31. Иммуногенная композиция по п.28, отличающаяся тем, что пептидный иммуноген выбирают из группы, состоящей из бактериального белка, вирусного белка, грибкового белка, паразитарного белка и эукариотического белка.

32. Иммуногенная композиция по п.28, отличающаяся тем, что один или более адъювантов выбирают из группы, состоящей из GM-CSF, 529 SE, IL-12, фосфата алюминия, гидроксида алюминия, Mycobacterium tuberculosis, Bordetella pertussis, бактериальных липополисахаридов, аминоалкилглюкозаминфосфатов, MPLÔ(3-O-деацетилированного монофосфориллипида А), полипептида, Quil A, STIMULONÔ QS-21, коклюшного токсина (РТ), Е.coli термолабильного токсина (LT), IL-1a, IL-lb, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, интерферона-a, интерферона-b, интерферона-g, G-CSF, TNF-aи TNF-b.

33. Иммуногенный конъюгат по п.26, отличающийся тем, что один или более пептидных линкеров представляют собой полилизин.

34. Способ по п.11, отличающийся тем, что тиолирующий реагент выбирают из реагента Траута (2-иминотиолан), SATA (N-сукцинимидил-S-ацетилтиоацетат), SMPT (4-сукцинимидилоксикарбонилметил-2-пиридилтиотолуол), Sulfo LC SPDP (сульфосукцинимидил пиридилдитио пропион-амидогексаноат) и SPDP (сукцинимидилпиридил дитиопропионат).

35. Иммуногенный конъюгат по п.18 или 22, отличающийся тем, что пептидный иммуноген образуют из белкового антигена бактерии, полученного из организма, выбранного из группы, состоящей из Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Neisseria meningitidis, Neisseria gonorrheae, Haemophilus influenzae, Esherichia coli, Klebsiella enterobacter, Listeria monocytogenes, Vibrio cholerae, Clostridium perfingens, Clostridium botulinum, видов Pseudomonas, Salmonella typhimurium, Borrelia burgdorferi, Shigella flexneri, Shigella boydii, Shigella dysentriae, Alloicoccus otitidis и группы В стрептококков.

36. Иммуногенный конъюгат по п.18 или 22, отличающийся тем, что пептидный иммуноген образуют из белкового антигена вируса, выбранного из группы, состоящей из вируса иммунодефицита человека (ВИЧ, HIV), вируса герпеса (HSV), человеческого вируса папилломы, вируса парагриппа (PIV), вируса везикулярного стоматита (VSV), респираторно-синцитиального вируса (РСВ, RSV), вируса Эпстайна-Барр (EVB), коронавируса, вируса коровьей оспы, ротавируса, вируса бешенства, вируса гепатита С (HCV) и вируса гепатита В (HBV).

37. Иммуногенный конъюгат по п.18 или 22, отличающийся тем, что пептидный иммуноген образован из белкового антигена грибов, выбранных из группы, состоящей из вида Candida, вида Cryptococcus, вида Coccidioides, вида Histoplasma и вида Aspergillus.

38. Иммуногенный конъюгат по п.18 или 22, отличающийся тем, что пептидный иммуноген образован из белкового антигена паразита, выбранного из группы, состоящей из плазмодия, трипаносом, шистосом и лейшмании.

39. Иммуногенный конъюгат по п.18 или 22, отличающийся тем, что пептидный иммуноген образован из белкового антигена, полученного от человека.

40. Иммуногенный конъюгат по п.39, отличающийся тем, что пептидный иммуноген человеческого происхождения берут из злокачественной опухоли.

41. Иммуногенный конъюгат по п.40, отличающийся тем, что пептидный иммуноген получают из карциноэмбрионального антигена или опухолевого антигена, полученного из опухоли, выбранной из почечно-клеточного рака, рака молочной железы, меланомы и рака простаты.



наверх