Бюллетень ЕАПВ "Изобретения (евразийские заявки и евразийские патенты)"
Бюллетень 2´2008

  

(11)

009898 (13) B1       Разделы: A B C D E F G H   

(21)

200400186

(22)

1998.06.10

(51)

C12N 15/54 (2006.01)
C12N 15/82
(2006.01)
C12N 15/70
(2006.01)
C12N 15/11
(2006.01)
C12N 9/10
(2006.01)
C12N 5/10
(2006.01)
A01H 5/00
(2006.01)

(31)

60/049,471

(32)

1997.06.12

(33)

US

(43)

2004.08.26

(62)

200000007; 1998.06.10

(71)(73)

НОРТ КАРОЛИНА СТЕЙТ ЮНИВЕРСИТИ (US)

(72)

Конклинг Марк А., Менду Нандини, Сонг Вен (US)

(74)

Медведев В.Н., Павловский А.Н. (RU)

(54)

СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ КЛЕТОК ТРАНСГЕННЫХ РАСТЕНИЙ И ТРАНСГЕННЫХ РАСТЕНИЙ С ПОВЫШЕННОЙ ПРОДУКЦИЕЙ ХИНОЛЯТФОСФОРИБОЗИЛ-ТРАНСФЕРАЗЫ И ТАБАЧНЫЙ ПРОДУКТ

(57) 1. Способ получения трансгенных растительных клеток с повышенной продукцией хинолятфосфорибозил-трансферазы (ХФРТазы), включающий трансформацию растительных клеток, способных экспрессировать ХФРТазу экзогенной ДНК-конструкцией, содержащей в направлении 5'-3' функциональный растительный промотор, и последовательность ДНК, кодирующую ХФРТазу растения табака, и где указанная последовательность ДНК функционально связана с указанным промотором и указанные трансформированные растительные клетки обладают повышенной продукцией ХФРТазы по сравнению с нетрансформированными растительными клетками.

2. Способ по п.1, где указанные трансформированные растительные клетки представляют собой клетки Nicotiana tabacum.

3. Способ по п.1 или 2, где указанный промотор является конститутивно активным.

4. Способ по п.1 или 2, где указанный промотор является избирательно активным в клетках ткани корней растения.

5. Способ по п.1 или 2, где указанный промотор является избирательно активным в клетках коры корней растения.

6. Способ по любому из пп.1-5, где указанную стадию трансформации осуществляют путем бомбардировки растительных клеток микрочастицами, несущими указанную ДНК-конструкцию.

7. Способ по любому из пп.1-5, где указанную стадию трансформации осуществляют путем инфицирования растительных клеток бактериями Agrobacterium tumefaciens, содержащими Ti-плазмиду, несущую указанную ДНК-конструкцию.

8. Способ получения трансгенного растения с повышенной продукцией ХФРТазы, включающий регенерацию растения из трансформированных клеток, полученных способом по пп.1-7.

9. Способ по п.8, где растение представляет собой растение табака Nicotiana tabacum.

10. Способ получения семян растения табака, включающий сбор семян растения табака, полученного способом по п.9.

11. Способ повышения продукции ХФРТазы в растительных клетках, способных продуцировать ХФРТазу, включающий трансформацию указанных клеток экзогенной ДНК-конструкцией, содержащей в направлении 5'-3' функциональный растительный промотор, и последовательность ДНК, кодирующую ХФРТазу растения табака, где указанная последовательность ДНК функционально связана с указанным промотором, в условиях, когда указанная ДНК-конструкция экспрессирует и продуцирует ХФРТазу в указанных трансформированных клетках растения.

12. Способ по п.11, где указанные трансформированные растительные клетки представляют собой клетки Nicotiana tabacum.

13. Способ по п.11 или 12, где указанная экзогенная ДНК-конструкция интегрируется в геном указанных растительных клеток и содержит в направлении транскрипции:

а) промотор, функционирующий в указанных растительных клетках;

б) последовательность ДНК, кодирующую ХФРТазу, функционирующую в указанных клетках, где указанная последовательность ДНК функционально связана с указанным промотором;

в) область терминации транскрипции, функционирующую в указанных клетках.

14. Способ по п.13, где указанный промотор является конститутивно активным.

15. Способ по п.13, где указанный промотор является избирательно активным в клетках ткани корней растения.

16. Способ по п.13, где указанный промотор является избирательно активным в клетках ткани коры корней растения.

17. Способ получения трансгенного растения с повышенной продукцией ХФРТазы, включающий регенерацию растения из трансформированных клеток, указанных в пп.11-16.

18. Способ по п.17, где растение представляет собой растение табака Nicotiana tabacum.

19. Способ получения семян растения табака, включающий сбор семян растения табака, полученного способом по п.18.

20. Способ получения трансформированных растительных клеток с повышенной продукцией никотина, включающий трансформацию растительных клеток, способных продуцировать ХФРТазу, экзогенной ДНК-конструкцией, содержащей в направлении 5'-3' растительный функциональный промотор, и последовательность ДНК, кодирующую ХФРТазу растения табака, где указанная ДНК-последовательность функционально связана с указанным промотором и указанные трансформированные растительные клетки обладают повышенной продукцией никотина по сравнению с нетрансформированными растительными клетками.

21. Способ по п.20, где указанные трансформированные клетки представляют собой клетки Nicotiana tabacum.

22. Способ по п.20 или 21, где указанный промотор является конститутивно активным.

23. Способ по п.20 или 21, где указанный промотор является избирательно активным в клетках ткани корней растения.

24. Способ по п.20 или 21, где указанный промотор является избирательно активным в клетках ткани коры корней растения.

25. Способ по любому из пп.20-24, где указанную стадию трансформации осуществляют путем бомбардировки растительных клеток микрочастицами, несущими указанную ДНК-конструкцию.

26. Способ по любому из пп.20-24, где указанную стадию трансформации осуществляют путем инфицирования растительных клеток бактериями Agrobacterium tumefaciens, содержащими Ti-плазмиду, несущую указанную ДНК-конструкцию.

27. Способ получения трансгенного растения с повышенной продукцией никотина, включающий регенерацию растения из трансформированных клеток, полученных способом по пп.20-26.

28. Способ по п.27, где растение предсталяет собой растение табака Nicotiana tabacum.

29. Способ получения семян растения табака, включающий сбор семян растения табака, полученного способом по п.28.

30. Способ повышения продукции никотина в растительных клетках, способных продуцировать ХФРТазу, включающий трансформацию указанных клеток экзогенной ДНК-конструкцией, содержащей в направлении 5'-3' функциональный растительный промотор, и последовательность ДНК, кодирующую ХФРТазу растения табака, где указанная последовательность ДНК функционально связана с указанным промотором, в условиях, когда указанная ДНК-конструкция экспрессирует и продуцирует ХФРТазу в указанных трансформированных растительных клетках.

31. Способ по п.30, где указанные трансформированные растительные клетки представляют собой клетки Nicotiana tabacum.

32. Способ по п.30 или 31, где указанная экзогенная ДНК-конструкция интегрируется в геном указанных растительных клеток и содержит в направлении транскрипции:

а) промотор, функционирующий в указанных растительных клетках;

б) последовательность ДНК, кодирующую ХФРТазу, функционирующую в указанных клетках, где указанная последовательность ДНК функционально связана с указанным промотором; и

в) область терминации транскрипции, функционирующую в указанных клетках.

33. Способ по п.32, где указанный промотор является конститутивно активным.

34. Способ по п.32, где указанный промотор является избирательно активным в клетках ткани корней растения.

35. Способ по п.32, где указанный промотор является избирательно активным в клетках ткани коры корней растения.

36. Способ получения трансгенного растения с повышенной продукцией никотина, включающий регенерацию растения из трансформированных клеток, указанных в пп.30-35.

37. Способ по п.36, где растение представляет собой растение табака Nicotiana tabacum.

38. Способ получения семян растения табака, включающий сбор семян растения табака, полученного способом по п.37.

39. Способ по любому из пп.8-38, где последовательность ДНК, кодирующая ХФРТазу растения табака, выбрана из группы, включающей:

а) последовательность ДНК SEQ ID NO:1;

б) последовательность ДНК, которая кодирует ХФРТазу растения табака с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:2;

в) последовательность ДНК, которая гибридизируется с последовательностью ДНК (а) или (б) в условиях, определяемых жесткостью промывки в 0,3M NaCl, 0,03М цитрата натрия и 0,1% SDS при 70°С, и кодирует ХФРТазу растения табака и

г) последовательность ДНК, которая отличается от последовательности ДНК (а) или (б) из-за вырожденности генетического кода и кодирует ХФРТазу растения табака.

40. Способ по п.39, где последовательность ДНК представляет собой последовательность ДНК SEQ ID NO:1.

41. Трансгенное растение табака рода Nicotiana с повышенной продукцией ХФРТазы по сравнению с нетрансформированным контрольным растением, содержащее трансгенные растительные клетки, раскрытые в пп.1-9, 11-18.

42. Потомство трансгенного растения по п.41.

43. Семена трансгенного растения табака с повышенной продукцией ХФРТазы по сравнению с нетрансгенным растением, где указанное трансгенное растение представляет собой потомство растения по п.41.

44. Трансгенное растение табака рода Nicotiana с повышенной продукцией никотина по сравнению с нетрансгенным растением, содержащее трансгенные растительные клетки, раскрытые в пп.20-28, 30-37.

45. Потомство трансгенного растения по п.44.

46. Семена трансгенного растения табака с повышенной продукцией никотина по сравнению с нетрансгенным растением, где указанное трансгенное растение представляет собой потомство растения по п.44.

47. Табачный продукт, полученный из растения табака по пп.41, 42, 44 или 45.

48. Табачный продукт, содержащий клетки растения табака, полученные способом по любому из пп.2-40.

49. Табачный продукт, содержащий табак растения табака, полученного способом по пп.9, 18, 28 или 37.

50. Табачный продукт по пп.47-49, где последовательность ДНК, кодирующая ХФРТазу растения табака, выбрана из группы, включающей:

а) последовательность ДНК SEQ ID NO:1;

б) последовательность ДНК, которая кодирует ХФРТазу растения табака, с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:2;

в) последовательность ДНК, которая гибридизируется с последовательностью ДНК (а) или (б) в условиях, определяемых жесткостью промывки в 0,3M NaCl, 0,03М цитрата натрия и 0,1%SDS при 70°С, и кодирует ХФРТазу растения табака и

г) последовательность ДНК, которая отличается от последовательности ДНК (а) или (б) из-за вырожденности генетического кода и кодирует ХФРТазу растения табака.

51. Табачный продукт по п.50, где последовательность ДНК представляет собой последовательность ДНК SEQ ID NO:1.

52. Табачный продукт по любому из пп.47-51, выбранный из группы, включающей табак для табачной трубки, табак для сигары, табак для сигареты, жевательный табак, сигареты и сигары.

53. Способ получения табачного продукта с повышенным содержанием никотина, включающий получение трансгенного растения табака по пп.41, 42, 44 или 45 и получение указанного табачного продукта из указанного растения табака.


наверх