Бюллетень ЕАПВ "Изобретения (евразийские заявки и евразийские патенты)"
Бюллетень 2´2008

  

(11)

009770 (13) B1       Разделы: A B C D E F G H   

(21)

200400393

(22)

2002.09.04

(51)

C07K 16/40 (2006.01)
C07K 14/47
(2006.01)
C12N 9/64
(2006.01)
G01N 33/53
(2006.01)

(31)

145279

(32)

2001.09.04

(33)

IL

(43)

2004.08.26

(86)

PCT/IL2002/000734

(87)

WO 2003/020767 2003.03.13

(71)(73)

ЙЕДА РИСЕРЧ ЭНД ДИВЕЛОПМЕНТ КО.ЛТД. (IL)

(72)

Уоллах Дэвид, Гончаров Таня, Колумам Ганеш (IL)

(74)

Медведев В.Н., Павловский А.Н. (RU)

(54)

АНТИТЕЛА ПРОТИВ КАСПАЗЫ-8 И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ

(57) 1. Антитело против каспазы-8, полученное путем иммунизации животного С-концевым пептидом субъединицы Sub-1 каспазы-8, или его фрагмент, где пептид, используемый для иммунизации, имеет аминокислотную последовательность CQGDNYQKGIPVETD (SEQ ID NO:4), способное совместно иммунопреципитировать указанную каспазу (как активную каспазу-8, так и про-каспазу-8) вместе со связанным с каспазой-8 белком р72 (SEQ ID NO:3) и эффективно высвобождать каспазу и связанный белок из иммунного комплекса при элюции, с использованием указанного пептида, имеющего последовательность SEQ ID NO:4.

2. Антитело по п.1, отличающееся тем, что является поликлональным антителом.

3. Антитело по п.1, отличающееся тем, что является моноклональным антителом или его фрагментом.

4. Антитело по п.1, отличающееся тем, что является химерным антителом или его фрагментом.

5. Антитело по п.1, отличающееся тем, что является полностью гуманизированным антителом или его фрагментом.

6. Антитело по п.1, отличающееся тем, что является анти-анти-Id-антителом или его фрагментом.

7. Антитело по любому из п.1-6, отличающееся тем, что пептид, используемый для иммунизации, связан с KLH.

8. Антитело по любому из пп.1-7, отличающееся тем, что является изотипом иммуноглобулина IgG1.

9. Антитело по любому из п.8, отличающееся тем, что запускает процессинг каспазы-8.

10. Применение антитела по любому из пп.1-9 для разработки ELISA-анализа.

11. Способ получения антитела по п.1 или 2, предусматривающий иммунизацию животного С-концевым пептидом субъединицы Sub-1 каспазы-8, где пептид, используемый для иммунизации, имеет аминокислотную последовательность CQGDNYQKGIPVETD (SEQ ID NO:4).

12. Способ по п.11, отличающийся тем, что антитело является моноклональным.

13. Способ по любому из п.11 или 12, отличающийся тем, что пептид, используемый в качестве иммуногена, связан с носителем.

14. Способ по п.13, отличающийся тем, что носитель представляет собой KLH.

15. Способ очистки каспазы-8 и связанного с каспазой-8 белка, предусматривающий обеспечение контактирования образца, содержащего каспазу-8 и связанный с каспазой-8 белок, с антителом по любому из пп.1-9, совместную иммунопреципитацию каспазы и связанного с каспазой-8 белка, промывание образованного иммунного комплекса и извлечение каспазы-8 и связанного с каспазой-8 белка из иммунного комплекса с использованием пептида с аминокислотной последовательностью CQGDNYQKGIPVETD (SEQ ID NO:4) в качестве конкурентного пептида.

16. Способ по п.15, отличающийся тем, что образец выбран из жидкостей организма, клеточных экстрактов и библиотек экспрессируемых ДНК.

17. Способ по п.16, отличающийся тем, что клетки в образце стимулировали Fas-лигандом перед экстракцией.

18. Способ по любому из пп.15-17, отличающийся тем, что дополнительно обеспечивают контактирование образца с антителом, полученным путем иммунизации животного пептидом, имеющим последовательность SEQ ID NO:5, и/или антителом, полученным путем иммунизации животного пептидом, имеющим последовательность SEQ ID NO:6.

19. Применение С-концевого пептида субъединицы Sub-1 каспазы-8, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4 (эпитопа 179), для получения антитела по любому из пп.1-6, предусматривающее иммунизацию животного таким эпитопом.

20. Антитело против каспазы-8, полученное путем иммунизации животного С-концевым пептидом субъединицы Sub-1 каспазы-8, или его фрагмент, где пептид, используемый для иммунизации, имеет аминокислотную последовательность SESQTLDKVYQMKSKPRC (SEQ ID NO:6).

21. Антитело по п.20, отличающееся тем, что является поликлональным антителом.

22. Антитело по п.20, отличающееся тем, что является моноклональным антителом или его фрагментом.

23. Антитело по п.20, отличающееся тем, что является химерным антителом или его фрагментом.

24. Антитело по п.20, отличающееся тем, что является полностью гуманизированным антителом или его фрагментом.

25. Антитело по п.20, отличающееся тем, что является анти-анти-Id антителом или его фрагментом.

26. Антитело по любому из пп.20-25, отличающееся тем, что пептид, используемый для иммунизации, связан с KLH.

27. Антитело по любому из пп.20-25, отличающееся тем, что является изотипом иммуноглобулина IgG1.

28. Способ получения антитела по п.20 или 21, предусматривающий иммунизацию животного С-концевым пептидом субъединицы Sub-1 каспазы-8, где пептид, используемый для иммунизации, имеет иммунизирующую последовательность SESQTLDKVYQMKSKPRC (SEQ ID NO: 6).

29. Способ по п.28, отличающийся тем, что пептид, используемый в качестве иммуногена, связан с носителем.

30. Способ по п.29, отличающийся тем, что носитель представляет собой KLH.

31. Способ очистки каспазы-8 и связанного с каспазой-8 белка, предусматривающий обеспечение контактирования образца, содержащего каспазу-8 и связанный с каспазой-8 белок, с антителом по любому из пп.20, 21, в сочетании с антителом по любому из пп.1, 2, совместную иммунопреципитацию каспазы-8 и связанного с каспазой-8 белка, промывание образованного иммунного комплекса и извлечение каспазы-8 и связанного с каспазой-8 белка из иммунного комплекса с использованием пептида с аминокислотной последовательностью CQGDNYQKGIPVETD (SEQ ID NO:4) в качестве конкурентного белка.

32. Способ по п.31, отличающийся тем, что образец выбран из жидкостей организма, клеточных экстрактов и библиотек, экспрессирующих ДНК.

33. Способ по любому из п.31 и 32, отличающийся тем, что конкурентный пептид содержит аминокислотную последовательность CQGDNYQKGIPVETD (SEQ ID NO:4).

34. Способ по любому из пп.32-33, отличающийся тем, что клетки в образце стимулировали Fas-лигандом перед экстракцией.

35. Применение С-концевого пептида субъединицы Sub-1 каспазы-8, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:6 (эпитопа 183), для получения антитела по любому из пп.20-27, предусматривающее иммунизацию животного таким эпитопом.

36. Применение антитела по любому из пп.20-27 для разработки ELISA-анализа.


наверх