Бюллетень ЕАПВ "Изобретения (евразийские заявки и евразийские патенты)"
Бюллетень 2´2007

  

(11)

008247 (13) B1       Разделы: A B C D E F G H   

(21)

200500547

(22)

2003.09.29

(51)

C12N 15/86 (2006.01)
C12N 15/869
(2006.01)

(31)

60/414,089

(32)

2002.09.27

(33)

US

(43)

2005.12.29

(86)

PCT/GB2003/004218

(87)

WO 2004/029258 2004.04.08

(71)(73)

ПАУДЕРДЖЕКТ РИСЕРЧ ЛИМИТЕД (GB)

(72)

Браун Ральф Патрик (US)

(74)

Медведев В.Н., Павловский А.Н. (RU)

(54)

КОНСТРУКЦИИ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ ДЛЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ

(57) 1. Конструкция нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеиновую кислоту вирусного генома, которая представляет собой нуклеиновую кислоту генома вируса герпеса или последовательность, по меньшей мере на 80% ей гомологичную, где указанная нуклеиновая кислота вирусного генома содержит по меньшей мере два эндогенных регуляторных элемента экспрессии гена, каждый из которых содержит эндогенный промотор, способный экспрессироваться в клетках млекопитающего, где указанные эндогенные промоторы указанных элементов являются активными в одной и той же фазе жизненного цикла вируса герпеса и оперативно связаны с кодирующими последовательностями, и где

(a) более 10% и вплоть до 95% вирусных последовательностей, которые находятся в области вирусного генома, которая соответствует области, расположенной между 5'- и 3'-концами нуклеиновой кислоты вирусного генома в данной конструкции, отсутствуют в указанной конструкции, и

(b) нуклеиновая кислота вирусного генома составляет от 1 до 50 т.п.н. в длину.

2. Конструкция нуклеиновой кислоты по п.1, где конструкция представляет собой космиду или плазмиду.

3. Конструкция нуклеиновой кислоты по п.1, где в конструкции отсутствуют последовательности упаковки вируса и/или сайт инициации репликации вируса.

4. Конструкция нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где более 20% и вплоть до 85% последовательностей вирусного генома удалено.

5. Конструкция нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где более 30% и вплоть до 75% последовательностей вирусного генома удалено.

6. Конструкция нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где эндогенные регуляторные элементы экспрессии гена оперативно связаны с их природными кодирующими последовательностями.

7. Конструкция нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где последовательность более чем в 500 п.н., расположенная выше и/или ниже промотора эндогенных элементов экспрессии гена, идентична или по меньшей мере на 90% гомологична эндогенным последовательностям генома вируса герпеса.

8. Конструкция нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где два или более эндогенных элемента регуляции гена происходят из последовательных генов генома вируса герпеса.

9. Конструкция нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где три или более эндогенных элемента регуляции гена происходят из последовательных генов в геноме вируса герпеса.

10. Конструкция нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где по меньшей мере два эндогенных промотора индуцируются в одной и той же фазе жизненного цикла вируса герпеса.

11. Конструкция нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где по меньшей мере два этих эндогенных регуляторных элемента экспрессии гена или же все элементы происходят либо от предранних вирусных генов, либо от ранних вирусных генов.

12. Конструкция нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где по меньшей мере два эндогенных регуляторных элемента экспрессии гена являются различными.

13. Конструкция нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где вирус герпеса выбран из вируса простого герпеса (HSV), цитомегаловируса (CMV) и вируса Эпштейна-Барр (EBV).

14. Конструкция нуклеиновой кислоты по п.13, где вирусом является HSV, который выбран из HSV-1 и HSV-2.

15. Конструкция нуклеиновой кислоты по п.14, где указанная нуклеиновая кислота вирусного генома происходит из вируса простого герпеса и по меньшей мере каждый из двух эндогенных элементов регуляции экспрессии гена содержит эндогенный промотор, выбранный из группы, состоящей из промоторов генов ICP0, ICP4, ICP22 и IСР27.

16. Конструкция нуклеиновой кислоты по п.14 или 15, где нуклеиновая кислота вирусного генома происходит из HSV-2 и вирусные последовательности удалены из указанной конструкции одним или несколькими из следующих способов:

(a) путем частичного гидролиза под действием EcoRI, с последующим повторным лигированием;

(b) путем гидролиза под действием Bst 11071 и ScaI, с повторным лигированием;

(c) путем гидролиза под действием Nsi, с последующим повторным лигированием;

(d) путем частичного гидролиза под действием фермента BstXI, а затем повторного лигирования для удаления последовательностей между ICP27 и ICP0;

(e) путем полного гидролиза под действием фермента BspHI, с последующим частичным гидролизом под действием фермента BsiWI, а затем повторного лигирования для удаления последовательностей, смежных с ICP22;

(f) путем гидролиза под действием фермента SrfI, с последующим повторным лигированием для удаления последовательностей между ICP4 и ICP0; и

(g) путем полного гидролиза под действием фермента BstXI, а затем повторного лигирования для удаления последовательностей между ICP27 и ICP0.

17. Конструкция нуклеиновой кислоты по п.14 или 15, где нуклеиновая кислота вирусного генома происходит из HSV-1 и вирусные последовательности удалены из конструкции в целях исключения, по существу, всех последовательностей HSV-1, не относящихся к кодирующим последовательностям ICP0, ICP4, ICP22 и ICP27.

18. Конструкция нуклеиновой кислоты по пп.14-17, где указанная конструкция содержит промоторы ICP0, ICP4, ICP22 и ICP27, оперативно связанные с их природными кодирующими последовательностями.

19. Конструкция нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где две или более кодирующих последовательности оперативно связаны с эндогенными регуляторными элементами экспрессии гена, кодирующими антигены.

20. Конструкция нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где указанная отсутствующая область содержит все промежуточные последовательности или их часть, расположенные между двумя смежными эндогенными регуляторными элементами экспрессии гена и их кодирующими последовательностями.

21. Конструкция нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где отсутствующая область соответствует одному или нескольким генам, присутствующим в области вирусного генома, кроме по меньшей мере двух эндогенных регуляторных элементов экспрессии гена, активных в одной и той же фазе жизненного цикла вируса.

22. Способ создания конструкции нуклеиновой кислоты для ее непосредственного введения субъекту в целях выработки у этого субъекта иммунного ответа, где указанный способ предусматривает

(a) встраивание нуклеиновой кислоты генома вируса герпеса или последовательности, по меньшей мере на 80% ей гомологичной, в остов вектора, где указанная нуклеиновая кислота вирусного генома составляет от 1 до 50 т.п.н. в длину и содержит по меньшей мере два эндогенных регуляторных элемента экспрессии гена, каждый их которых содержит эндогенный промотор, способный экспрессироваться в клетке млекопитающего, где указанные эндогенные промоторы указанных элементов являются активными в одной и той же фазе жизненного цикла вируса герпеса, и

(b) делецию некоторых или всех вирусных последовательностей из указанной нуклеиновой кислоты вирусного генома, за исключением по меньшей мере двух эндогенных элементов регуляции экспрессии гена, которые присутствуют в области вирусного генома, которая соответствует области, расположенной между 5'- и 3'-концами нуклеиновой кислоты вирусного генома указанной конструкции, где указанную делецию осуществляют либо до, либо во время, либо после встраивания нуклеиновой кислоты вирусного генома в остов вектора,

где созданная конструкция соответствует тому, как определено в любом из предшествующих пунктов.

23. Способ по п.22, дополнительно предусматривающий покрытие конструкцией частиц, подходящих для доставки из устройства для опосредуемой частицами доставки.

24. Частицы с покрытием, подходящие для доставки из устройства для опосредуемой частицами доставки, где указанные частицы включают в себя частицы-носители, покрытые конструкцией нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-21 или полученной способом, как определено в п.22 или 23.

25. Дозировочный сосуд, используемый в устройстве для опосредуемой частицами доставки и содержащий частицы с покрытием по п.24.

26. Устройство для опосредуемой частицами доставки, загруженное частицами с покрытием по п.24.

27. Вакцина, содержащая конструкцию нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-21 и фармацевтически приемлемый наполнитель или носитель.

28. Способ in vitro осуществления экспрессии требуемого полипептида в клетке млекопитающего, где указанный способ предусматривает перенос в указанные клетки конструкции нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-21 или полученной способом по п.22 или 23.

29. Применение конструкции нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-21 в производстве лекарственного средства для использования при иммунизации нуклеиновой кислотой.

30. Применение конструкции нуклеиновой кислоты, полученной способом по п.22 или 23, в производстве лекарственного средства для использования при иммунизации нуклеиновой кислотой.

31. Применение частиц с покрытием по п.24 в производстве лекарственного средства для использования при иммунизации нуклеиновой кислотой.

32. Способ иммунизации нуклеиновой кислотой, предусматривающий введение конструкции нуклеиновой кислоты, как определено в любом из пп.1-21.

33. Способ иммунизации нуклеиновой кислотой, предусматривающий введение конструкции нуклеиновой кислоты, полученной способом по п.22 или 23.

34. Способ иммунизации нуклеиновой кислотой, предусматривающий введение частиц с покрытием по п.24.


наверх